專利名稱：使用內(nèi)標物質(zhì)的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用內(nèi)標物質(zhì)的測定對象物質(zhì)的測定方法。
背景技術(shù)：
在毛細管電泳法中，以往進行的是使用1種內(nèi)標物質(zhì)，將其峰作為先端標記，來確定測定對象物質(zhì)的大致位置(專利文獻1)。但是，僅使用1種內(nèi)標物質(zhì)的情況下，受測定條件或試樣中的夾雜物的影響，內(nèi)標物質(zhì)與測定對象物質(zhì)的峰的位置關(guān)系發(fā)生變動。因此，在精度良好地確定測定對象物質(zhì)的位置的情況下，使用分子量標記。測定對象物質(zhì)為DNA或RNA的情況下，也已知使用高分子量側(cè)與低分子量側(cè)的2 種分子量標記來進行測定的情況。這種情況下使用的分子量標記為DNA或RNA，以其堿基數(shù)為基礎進行設定。S卩，在進行DNA或RNA的電泳的情況下，通過精確設定分子量標記的位置，可以根據(jù)與2個分子量標記的位置關(guān)系來求出分子量。但是，此處使用的分子量標記為利用嵌入劑進行了標識的DNA或RNA等，具有穩(wěn)定性差、在使用血清試樣的情況下與試樣中的物質(zhì)反應、背景提高、分子量標記的峰變寬等問題。另一方面，在測定對象物質(zhì)為蛋白質(zhì)或化合物的情況下，根據(jù)測定對象物質(zhì)的分子量或電荷的不同，其遷移度不同，因而通常僅使用1種內(nèi)標物質(zhì)，其使用目的也是為了確定測定對象物質(zhì)的大致位置。因此，在進行這樣的蛋白質(zhì)或化合物的測定的情況下，目前希望開發(fā)出不具有上述DNA或RNA在測定時的問題、能夠精度良好地鑒定蛋白質(zhì)或化合物的測定方法。特別是在微芯片電泳這樣的使用微細毛細管進行電泳的情況下，由于微細，因而即使在相同條件下進行，若進行芯片的替換，則物質(zhì)的移動時間也有時會發(fā)生變化。因此， 難以確定目的峰的情況也是常見的。進一步地，在這樣的測定法的情況下，為了能夠進行高靈敏度測定，必須要使用不會對測定帶來影響且能夠靈敏度良好地進行測定的內(nèi)標物質(zhì)。 因此，也希望開發(fā)出在上述這樣的條件下對測定物質(zhì)的峰進行鑒定的測定方法。現(xiàn)有技術(shù)文獻專利文獻專利文獻1 日本特開平2007-24610號公報

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的課題在于提供在測定對象物質(zhì)為蛋白質(zhì)或化合物的電泳法中使用內(nèi)標物質(zhì)的測定方法。用于解決課題的手段鑒于上述狀況，本發(fā)明人對于測定對象物質(zhì)為蛋白質(zhì)或化合物的情況下的利用使用內(nèi)標物質(zhì)的毛細管電泳法進行的測定方法的開發(fā)進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，作為內(nèi)標物質(zhì)，通過使用在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物與該化合物的陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的組合、或在分子內(nèi)具有3個以上的陽離子基團的化合物與該化合物的陽離子基團的1 3個被取代為陰離子基團的化合物的組合來作為內(nèi)標物質(zhì)，即使測定對象物質(zhì)為蛋白質(zhì)或化合物，也能夠容易地確定測定對象物質(zhì)的峰。即，在由負朝向正方向泳動的毛細管電泳法中，由于在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物在較早的時間被檢測到峰、在分子內(nèi)具有陽離子基團的化合物在較晚的時間被檢測到峰， 因而通過使用在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物與使該化合物的陰離子基團或陽離子基團的1 3個呈相反電荷的物質(zhì)，能夠?qū)y定對象物質(zhì)調(diào)整在2個內(nèi)標物質(zhì)之間， 由此能夠容易地鑒定測定對象物質(zhì)的峰，從而完成了本發(fā)明。SP，本發(fā)明涉及“一種基于毛細管電泳法的測定對象物質(zhì)的測定方法，該測定方法的特征在于將下述(1)或( 用作內(nèi)標物質(zhì)，對測定對象物質(zhì)的峰進行鑒定(1)在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物和該化合物的陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的組合，(2)在分子內(nèi)具有3個以上陽離子基團的化合物和該化合物的陽離子基團的1 3個被取代為陰離子基團的化合物的組合”。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，即使存在相鄰的2個以上的峰，也能夠容易地且精度良好地確定測定對象物質(zhì)。另外，此處使用的標識物質(zhì)不與試樣中的物質(zhì)發(fā)生反應，不會帶來提高背景等的影響，因而即使在微量成分的分析中也能夠精度良好地進行測定。


圖1為示出實施例1中的DNA標識抗體的制備方法的圖。圖2為示出實施例1中的毛細管芯片的布置的圖。圖3為示意性示出實施例1中的毛細管芯片的泳動用試樣與試液的配置關(guān)系的圖。圖4為實施例1中利用本發(fā)明的方法測定AFP時的電泳圖譜。圖5為實施例1中利用本發(fā)明的方法測定PIVKA II時的電泳圖譜。
具體實施例方式[本發(fā)明的在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物(下面有時簡稱為本發(fā)明的含有陰離子基團的化合物。)]作為本發(fā)明的含有陰離子基團的化合物，在其分子內(nèi)陰離子基團通常具有3 10 個、優(yōu)選具有5 8個、更優(yōu)選具有5 6個、特別優(yōu)選具有5個。上述這樣的化合物在由負朝向正的方向進行電泳的情況下，由于泳動速度變快，因而通常在早于任何測定對象物質(zhì)的時間被檢測到峰，可以作為有用的內(nèi)標物質(zhì)來使用。作為上述陰離子基團，可以舉出例如-HP(V、-N0”-ci(V、-c0(r、-s(V，其中優(yōu)選-cocr、-s(V。-cocr由于反應性高，因而適于將陽離子基團導入；-SO3-由于可以提高熒光強度，因而在對上述本發(fā)明的含有陰離子基團的化合物進行熒光檢測時優(yōu)選具有該基團。需要說明的是，對于上述陰離子基團的具體例， 只要是在電泳時(溶解于電泳溶液中時)成為陰離子基團的物質(zhì)即可，可以為與氫離子鍵合了的酸、或堿金屬鹽(例如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、銣鹽)、銨鹽、有機銨鹽(例如三甲基銨鹽、三乙基銨鹽、三丙基銨鹽)等鹽。作為本發(fā)明的含有陰離子基團的化合物的具體例，可以舉出例如通式[1]所示的化合物或其鹽[式中，R1 R6各自獨立地表示可以具有酰胺鍵的、具有-C00—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基；R7 Rki各自獨立地表示烷基、炔基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷基磺?；⒎蓟酋；?、取代氨基、-coo—、-so”鹵原子、氫原子、羥基、氰基或者硝基；R11表示氫原子、烷基、炔基或者芳基；η表示0 3的整數(shù)。其中，R1 R11中的3個基團為_C00_、-S03_，或者為具有這些基團作為取代基的基
團。]。上述通式[1]所示的化合物或其鹽為在635nm附近具有激發(fā)波長的熒光物質(zhì)，并且在毛細管電泳中泳動的情況下峰形狀呈尖峰，成為利用熒光檢測的毛細管電泳測定中特別有用的內(nèi)標物質(zhì)。對于通式[1]中的作為R1 R6所示烷基的取代基的-C00—或_S03_以及R7 Riq 所示的-C00-或-SO3-來說，只要是在電泳時(溶解于電泳溶液中時)成為陰離子基團的物質(zhì)即可，可以為與氫離子鍵合了的羧酸(-C00H)或磺酸(-SO3H)等酸；堿金屬鹽(例如鋰鹽、 鈉鹽、鉀鹽、銣鹽)、銨鹽、有機銨鹽(例如三甲基銨鹽、三乙基銨鹽、三丙基銨鹽)等鹽。對于通式[1]中的R1 R6所示的可以具有酰胺鍵的、具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基中的烷基來說，其可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，優(yōu)選為直鏈狀，可以舉出碳原子數(shù)通常為1 10、優(yōu)選為1 6、更優(yōu)選為1 5的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、 異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、 仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、 叔壬基、新壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、 環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基等，其中優(yōu)選例如甲基、乙基、正丙基、正戊基等直鏈狀的烷基。對于R1 R6所示的可以具有酰胺鍵的、具有-C00—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基中的烷基來說，可以舉出不具有酰胺鍵的取代或無取代烷基、或取代或無取代烷基的烷基鏈中含有通常為1 10個、優(yōu)選為1 3個、更優(yōu)選為1個酰胺鍵的基團。作為可以具有酰胺鍵的無取代烷基的優(yōu)選具體例，例如可以舉出如下通式[59] 所示的基團-T1- (CONH-T2) k_R21 [59](式中，R21表示氫原子或烷基，TjPkfT2表示亞烷基，k表示0 10的整數(shù)。)。
作為通式[59]中的R21所示的烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種， 可以舉出碳原子數(shù)通常為1 10、優(yōu)選為1 6的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、新丁基、正戊基、異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、叔壬基、新壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基等。作為T1和k個T2所示的亞烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，可以舉出碳原子數(shù)通常為2 10、優(yōu)選為2 8的基團，具體地說，可以舉出例如亞甲基、1， 2-亞乙基、1，3-亞丙基、1，4-亞丁基、1，5-亞戊基、1，6-亞己基、七亞甲基、1，8-亞辛基、1， 9-亞壬基、十亞甲基等直鏈狀亞烷基；例如乙叉、亞丙基、異亞丙基、1-甲基-1，3-亞丙基、
2-甲基-1，3-亞丙基、1，1-二甲基-1，2-亞乙基、1，2-二甲基-1，2-亞乙基、乙基-1，2-亞乙基、1-甲基-1，4-亞丁基、1，1-二甲基-1，3-亞丙基、2，2-二甲基-1，3-亞丙基、2-乙基-1，3-亞丙基、1-甲基-1，5-亞戊基、2-甲基-1，5-亞戊基、1，3- 二甲基-1，4-亞丁基、
3-乙基-1，4-亞丁基、1-甲基-1，6-亞己基、1-甲基七亞甲基、1，4-二乙基-1，4-亞丁基、 2，4_ 二甲基七亞甲基、1-甲基-1，8-亞辛基、1-甲基-1，9-亞壬基等支鏈狀亞烷基；例如環(huán)亞丙基，1，3-環(huán)亞丁基、1，3-環(huán)亞戊基、1，4-環(huán)亞己基、1，5-環(huán)亞庚基、1，5-環(huán)亞辛基、1， 5-環(huán)亞壬基、1，6-環(huán)亞癸基等環(huán)狀亞烷基等。k通常為0 10的整數(shù)、優(yōu)選為0 3的整數(shù)、更優(yōu)選為0或1。上述通式[1]中的R1 R6的具體例中，特別優(yōu)選具有-C00—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基。作為更優(yōu)選的具體例，R1和R2各自獨立地為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，更優(yōu)選具有-COO—或-SO3-作為取代基的碳原子數(shù)為1 5的烷基。對于R3 和R4，其任意一方為具有-coo—或-SO3-作為取代基的烷基、優(yōu)選為具有-C00—或-SO3-作為取代基的碳原子數(shù)為1 5的烷基，另一方為無取代的烷基、優(yōu)選為無取代的碳原子數(shù)為 1 5的烷基。對于R5和R6，其任意一方為具有-C00-或-SO3-作為取代基的烷基、優(yōu)選為具有-C00-或-SO3-作為取代基的碳原子數(shù)為1 5的烷基，另一方為無取代的烷基、優(yōu)選為無取代的碳原子數(shù)為1 5的烷基。作為通式[1]中的R7 Rltl所示的烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，可以舉出碳原子數(shù)通常為1 6、優(yōu)選為1 3的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。作為R7 Rki所示的炔基，可以舉出碳原子數(shù)通常為2 6、優(yōu)選為2 4的基團， 具體地說，可以舉出例如乙炔基、2-丙炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、2-甲基-4-戊炔基、5-己炔基等。作為R7 Rltl所示的芳基，可以舉出通常碳原子數(shù)為6 10的基團，具體地說，可以舉出例如苯基、萘基等。作為R7 Rltl所示的烷氧基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，可以舉出碳原子數(shù)通常為1 6、優(yōu)選為1 3的基團，具體地說，可以舉出例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、異戊氧基、仲戊氧基、叔戊氧基、新戊氧基、正己氧基、異己氧基、仲己氧基、叔己氧基、新己氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)戊氧基、環(huán)己氧基等。作為R7 Rltl所示的芳氧基，可以舉出碳原子數(shù)通常為6 10的基團，具體地說， 可以舉出例如苯氧基、萘氧基等。對于R7 Rltl所示的烷基磺?；械耐榛酋；鶃碚f，可以舉出磺基(-SO2OH) 的-OH基被烷基所取代的基團，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，可以舉出通常碳原子數(shù)為1 6的基團，具體地說，可以舉出例如甲基磺酰基、乙基磺?；⒄酋；?、異丙基磺?；⒄』酋；?、異丁基磺?；?、仲丁基磺?；?、叔丁基磺?；?、正戊基磺?；?、異戊基磺酰基、仲戊基磺?；⑹逦旎酋；?、新戊基磺酰基、正己基磺酰基、異己基磺酰基、仲己基磺?；⑹寮夯酋；?、新己基磺?；?、環(huán)丙基磺?；?、環(huán)丁基磺酰基、環(huán)戊基磺?；h(huán)己基磺?；取Ｗ鳛镽7 Rltl所示的芳基磺?；?，可以舉出磺基(-SO2OH)的-OH基被芳基所取代的基團，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，可以舉出通常碳原子數(shù)為6 10的基團，具體地說，可以舉出例如苯磺?；?、萘基磺?；取Ｗ鳛镽7 Rki所示的鹵原子，可以舉出例如氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。作為R7 Rki所示的取代氨基，可以舉出氨基的氫原子中的1 2個被取代基所取代的基團，作為這些取代基，可以舉出例如烷基、烷氧基羰基、酰基、磺基等。對于作為R7 Rki所示的取代氨基的取代基而舉出的烷基來說，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，可以舉出碳原子數(shù)通常為1 10、優(yōu)選為1 6的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、叔壬基、異壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基等。對于作為R7 Rki所示的取代氨基的取代基而舉出的烷氧基羰基來說，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，可以舉出碳原子數(shù)通常為1 10、優(yōu)選為1 6的基團，
具體地說，可以舉出例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、正戊氧基羰基、異戊氧基羰基、仲戊氧基羰基、叔戊氧基羰基、新戊氧基羰基、正己氧基羰基、異己氧基羰基、仲己氧基羰基、叔己氧基羰基、新己氧基羰基、正庚氧基羰基、異庚氧基羰基、仲庚氧基羰基、叔庚氧基羰基、新庚氧基羰基、正辛氧基羰基、異辛氧基羰基、仲辛氧基羰基、叔辛氧基羰基、新辛氧基羰基、 正壬氧基羰基、異壬氧基羰基、仲壬氧基羰基、叔壬氧基羰基、新壬氧基羰基、正癸氧基羰基、異癸氧基羰基、仲癸氧基羰基、叔癸氧基羰基、新癸氧基羰基、環(huán)丙氧基羰基、環(huán)丁氧基羰基、環(huán)戊氧基羰基、環(huán)己氧基羰基、環(huán)庚氧基羰基、環(huán)辛氧基羰基、環(huán)壬氧基羰基、環(huán)癸氧基羰基等。對于作為R7 Rki所示的取代氨基的取代基而舉出的?；鶃碚f，可以舉出例如衍生自脂肪族羧酸的基團、衍生自芳香族羧酸的基團等。作為該衍生自脂肪族羧酸的?；?，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀，并且鏈中可以進一步具有雙鍵，可以舉出碳原子數(shù)通常為2 20、優(yōu)選碳原子數(shù)為2 15、更優(yōu)選為2 10、
8進一步優(yōu)選為2 6的基團，具體地說，可以舉出例如乙酰基、丙酰基、丁?；?、異丁?；⑽祯；?、異戊?；?、新戊?；⒓乎；?、庚酰基、辛酰基、癸?；⒃鹿瘐；?、肉豆蔻酰基、棕櫚?；?、硬脂?；⒍；⒈；⒓谆；投辊；?、油?；?。作為該衍生自芳香族羧酸的?；?，可以舉出碳原子數(shù)通常為7 15、優(yōu)選為7 11的基團，具體地說，可以舉出例如苯甲酰基、萘甲?；?、蒽甲酰基等。上述通式[1]中的R7 Rki的具體例中，特別優(yōu)選-C00—或_S03_或氫原子。作為更優(yōu)選的具體例，R7 Rki中的3個為氫原子，剩下的一個為-C00—或-SO”優(yōu)選為-S03_。作為通式[1]中的R11所示的烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環(huán)狀中的任意一種，優(yōu)選為直鏈狀，可以舉出碳原子數(shù)通常為1 10、優(yōu)選為1 6、更優(yōu)選為1 3的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、 異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、 仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、 叔壬基、異壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、 環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基等。作為R11所示的炔基，可以舉出碳原子數(shù)通常為2 6、優(yōu)選為2 4的基團，具體地說，可以舉出例如乙炔基、2-丙炔基、3- 丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、2-甲基-4-戊炔基、5-己炔基等。作為R11所示的芳基，可以舉出碳原子數(shù)為6 10的基團，具體地說，可以舉出例
如苯基、萘基等。上述通式[1]中的R11的具體例中，特別優(yōu)選烷基。通式[1]中的η通常為0 3的整數(shù)、優(yōu)選為1或2、更優(yōu)選為2。通式[1]中，R1 R11中的至少3個基團為_C00_、_S03_、或為具有_C00_、_S03_作為取代基的基團，但優(yōu)選-C00-或具有-COO-作為取代基的基團具有至少1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團具有至少2個，特別優(yōu)選-C00-或具有-C00-作為取代基的基團為1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團為4個。本發(fā)明的化合物[1]中，優(yōu)選例如下述通式[la]所示的物質(zhì)(式中，Rla R6a各自獨立地表示具有-COO—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基，R8a表示_S03_，Rlla表示烷基，η與上述相同。其中，Rla R6a中的2個基團為-C00_、_S03_， 或者為具有它們作為取代基的基團。)。通式[la]中，對于Rla R6a所示的具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基中的烷基來說，可以舉出與上述通式[1]中R1 R6所示的可以具有酰胺鍵的、取代或無取代烷基中的烷基的示例同樣的基團，優(yōu)選的基團也是相同的。Rla和R2a優(yōu)選各自獨立地為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基、更優(yōu)選具有-C00-或-SO3-作為取代基的碳原子數(shù)為1 5的烷基。R3a和R4a各自獨立地為具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基，其其中優(yōu)選
中，優(yōu)選其一方為具有-coo-或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為烷基；更優(yōu)選一方為具有-COO-或-SO3-作為取代基的碳原子數(shù)為1 5的烷基，另一方為碳原子數(shù)為1 5的燒基。R5a和R6a各自獨立地為具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基，其中優(yōu)選其一方為具有-COO-或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為烷基；更優(yōu)選一方為具有-C00-或-SO3-作為取代基的碳原子數(shù)為1 5的烷基，另一方為碳原子數(shù)為1 5的燒基。作為Rlla所示的烷基，可以舉出與上述通式[1]中R11所示的烷基的示例同樣的基團，優(yōu)選的基團也是相同的。通式[la]中Rla-Rfia中的至少2個基團為-COO—、-S03_、或者為具有-COO—、-S03_作為取代基的基團，優(yōu)選-C00-或具有-COO-作為取代基的基團具有至少1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團具有至少1個，特別優(yōu)選-coo—或具有-COO-作為取代基的基團為1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團為3個。作為通式[1]的優(yōu)選具體例，例如可以舉出
權(quán)利要求
1.一種基于毛細管電泳法的測定對象物質(zhì)的測定方法，該測定方法的特征在于，將下述(1)或( 用作內(nèi)標物質(zhì)，對測定對象物質(zhì)的峰進行鑒定(1)在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物、和該化合物的陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的組合，(2)在分子內(nèi)具有3個以上陽離子基團的化合物、和該化合物的陽離子基團的1 3個被取代為陰離子基團的化合物的組合。
2.如權(quán)利要求1所述的測定方法，其中，在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物的陰離子基團為-COO—或-S03_， 陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的陽離子基團為下述通式[103] 所示的基團通式[103]中，R102 Rltl4各自獨立地表示氫原子或碳原子數(shù)為1 3的烷基，由Rltl2 R104中的2 3個基團和它們所鍵合的氮原子可以形成雜環(huán)狀銨陽離子。
3.如權(quán)利要求1所述的測定方法，其中，在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物為通式[1]所示的化合物或其鹽通式[1]中，R1 R6各自獨立地表示可以具有酰胺鍵的、具有-COO—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基，R7 Rki各自獨立地表示烷基、炔基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷基磺?；?、芳基磺?；?取代氨基、-coo—、-SO”鹵原子、氫原子、羥基、氰基或者硝基， Rn表示氫原子、烷基、炔基或者芳基，η表示0 3的整數(shù)，其中，R1 R11中的3個基團為-COO—、-SO3-,或者為具有這些基團作為取代基的基團； 陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物為通式[1’ ]所示的化合物或其Trrt.通式[1’ ]中，R1’ R6’各自獨立地表示具有通式[101]所示的基團作為取代基的烷基、或者表示可以具有酰胺鍵的、具有-coo—或-SO3-作為取代基的或者無取代的烷通式[101]中，Rltl1 Rltl4各自獨立地表示氫原子或碳原子數(shù)為1 3的烷基，m表示 2 6的整數(shù)，另外，由Rltl2 Rltl4中的2 3個基團和它們所鍵合的氮原子可以形成雜環(huán)狀銨陽離子，R7' Rltl'各自獨立地表示烷基、炔基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷基磺?；?、芳基磺酰基、 取代氨基、-coo—、-SO”鹵原子、氫原子、羥基、氰基或者硝基， R11’表示氫原子、烷基、炔基或者芳基，η表示0 3的整數(shù)， 其中，R1’ R6’中的至少1個為具有通式[101]所示的基團作為取代基的烷基。
4.如權(quán)利要求3所述的測定方法，其中，在通式[1]所示的化合物中，R1 R6各自獨立地表示具有-COO—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基，
5.如權(quán)利要求4所述的測定方法，其中，R1和R2各自獨立地為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，R3和R4中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基，R5和R6中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基。
6.如權(quán)利要求4所述的測定方法，其中，R1’和R2’中的一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為具有通式[101] 所示的基團作為取代基的烷基，R3’和R4’中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基，R5’和R6’中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基。
7.如權(quán)利要求1 6任一項所述的測定方法，其中，測定對象物質(zhì)為AFP、PIVKAll。
全文摘要
本發(fā)明的課題在于提供在測定對象物質(zhì)為蛋白質(zhì)或化合物的電泳法中使用內(nèi)標物質(zhì)的測定方法。本發(fā)明涉及基于電泳法的測定對象物質(zhì)的測定方法，該測定方法的特征在于將(1)在分子內(nèi)具有3個以上陰離子基團的化合物以及該化合物的陰離子基團的1～3個被取代為陽離子基團的化合物的組合、或(2)在分子內(nèi)具有3個以上陽離子基團的化合物以及該化合物的陽離子基團的1～3個被取代為陰離子基團的化合物的組合用作內(nèi)標物質(zhì)，對測定對象物質(zhì)的峰進行鑒定。
文檔編號G01N27/447GK102414559SQ201080018910
公開日2012年4月11日 申請日期2010年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月28日
發(fā)明者山本直之, 黑澤龍雄 申請人:和光純藥工業(yè)株式會社