專利名稱：快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測方法，尤其是一種快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼 光譜檢測方法。
背景技術：
2008年的三聚氰胺奶粉事件對食品安全再次敲響了警鐘。在原料奶中摻兌三聚氰 胺可以提高原料奶的氮含量，我國現(xiàn)行的奶制品蛋白含量測定中，依然用凱氏定氮法，通過 奶制品中的氮含量來確定蛋白含量。這給不法分子以可乘之機，通過添加含氮的廉價工業(yè) 原料來提高原料奶的氮含量，使檢測結果表現(xiàn)出蛋白質含量虛高的假象。長期攝入三聚氰 胺會造成生殖、泌尿系統(tǒng)的損害，導致膀胱、腎部結石等。盡管日前國家批準發(fā)布了《原料乳中三聚氰胺快速檢測液相色譜法》國家標準， 但所需的液相色譜儀現(xiàn)場操作條件苛刻(流動性是汞)，操作復雜，耗材成本高，分析速度不
王困相為了達到三聚氰胺檢測重復性好、靈敏度高、操作簡單、實驗成本低、快速檢測、易 于普及推廣的目標，國內外做了很多研究。其中，申請?zhí)枮?00810225085. 8的中國專利《用 于液態(tài)奶中三聚氰胺現(xiàn)場快速檢測的拉曼光譜法及試劑盒》，該專利采用拉曼光譜法檢測 三聚氰胺，操作簡便、靈敏準確、重現(xiàn)性良好，但是只適用于液態(tài)奶。對于乳粉，其成分復雜， 利用上述專利的方法進行處理，三聚氰胺的回收率低，達不到檢測要求；現(xiàn)有技術中對乳粉 的前處理步驟繁瑣，且不適于拉曼光譜儀的檢測。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種樣品前處理簡單的快速分析乳粉中三聚氰 胺含量的激光拉曼光譜檢測方法。為解決上述技術問題，本發(fā)明所采取的技術方案是一種快速分析乳粉中三聚氰 胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，按照下述步驟進行測定
①稱取乳粉1.0 2. 0g，加入3 5mL乙腈振蕩、超聲，靜置后，準確量取上清液，在上 清液中加入蛋白沉淀劑，混勻，離心，再準確取上清液，加入正己烷，振蕩，下清液即為待測 溶液；
②在檢測池中依次加入表面增強試劑、所述待測溶液和無機鹽絮凝劑，搖勻，置檢測池 于激光拉曼光譜儀檢測室內，在400 1700CHT1范圍內進行拉曼光譜掃描獲得拉曼光譜 ③進行定性判斷當712cm—1士3cm—1處存在明顯特征拉曼峰時，乳粉中存在三聚氰胺；
④定量測定對測定的拉曼光譜圖，以1017CHT1士3CHT1處的特征拉曼峰作為定量基準 峰，采用歸一化方法，根據三聚氰胺的拉曼光譜信號的相對強度與三聚氰胺含量的線性比 例關系，對乳粉中的三聚氰胺進行快速的定量檢測。所述蛋白沉淀劑為質量濃度為1的醋酸鉛溶液或者質量濃度為1的醋酸鋅溶液。所述表面增強劑為金納米溶膠或者銀納米溶膠，所述無機鹽凝聚劑為質量濃度為 1%的氯化鈉溶液或質量濃度為1%的氯化鉀溶液。優(yōu)選的，步驟①取1. OOg乳粉，加入3. OOmL乙腈振蕩5min，超聲提取5min ；靜置 Imin后，取ImL上清液加入0. 050mL蛋白沉淀劑混勻；8000r/min離心Imin ；取0. 50mL上 清液，加入0. 50mL正己烷，劇烈振蕩lmin，下層清液即為待測液。所述步驟②待測溶液的量為0. 050mL,表面增強試劑的量為0. 50mL,無機鹽凝聚 劑 0. IOmL0本發(fā)明采用乙腈提取三聚氰胺，用蛋白質沉淀劑將乳粉中的蛋白質沉淀以減少檢 測干擾，最后用正己烷萃取的方法，三聚氰胺的回收率達到90%以上。采用上述技術方案所產生的有益效果在于本發(fā)明的測定方法前處理的步驟簡 單、快速，三聚氰胺的回收率高，克服了現(xiàn)有技術中乳粉的處理方法不適于拉曼光譜檢測的 技術問題；本發(fā)明的可準確快速地對三聚氰胺進行定性和定量分析，單件乳粉的檢測從提 取到出試驗結果20min;且本發(fā)明實驗耗材成本較低，易于普及推廣，是現(xiàn)有檢測技術的重 要補充。


下面結合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進一步詳細的說明。圖1是本發(fā)明實施例1中某品牌的乳粉的三聚氰胺檢測的拉曼光譜圖。
具體實施例方式實施例1
①準確稱取某品牌乳粉1. 00g，加入3. OOmL乙腈振蕩提取5min，超聲提取5min ；靜置 Imin后，準確量取ImL上清液，向上清液中加入質量濃度為m的醋酸鉛0. 050mL混勻；以 8000r/min轉速離心Imin ；準確量取0. 50mL上清液，加入0. 50mL正己烷，劇烈振蕩lmin, 下層清液即為待測液；同時進行空白試驗和樣品加標試驗，樣品中加標量為ang/kg。②在檢測池中依次加入0. 50mL金納米溶膠、所述0. 050mL待測溶液和0. IOmL質 量濃度為1%的氯化鈉溶液，搖勻，置檢測池于激光拉曼光譜儀檢測室內，在400 1700CHT1 范圍內進行拉曼光譜掃描獲得拉曼光譜圖；設置儀器參數如下
a)激光功率200mW
b)積分時間20sec
c)平均次數3
d)平滑參數5
e)激光光源波長785nm。③進行定性判斷
乳粉和加標試驗的檢測池712cm—1 士3cm—1處存在明顯特征拉曼峰，說明乳粉中摻有三 聚氰胺，乳粉的拉曼光譜圖參見圖1 ；
空白試驗的檢測池712(3!^1 士3CHT1處沒有明顯特征拉曼峰，即712CHT1 士3CHT1處的拉 曼峰低于三倍噪聲信號值。
④定量測定
對乳粉和對比試驗的檢測池的拉曼光譜圖進行定量分析以1017cm—1 士 3cm—1處的特征 拉曼峰作為定量基準峰，采用歸一化方法，根據三聚氰胺的拉曼光譜信號的相對強度與三 聚氰胺含量的線性比例關系，測定待測溶液中的三聚氰胺的含量為1. 20mg/L，測定加標樣 品待測液中的三聚氰胺的含量為1.82 mg/L。然后按照下述公式(1)計算乳粉中三聚氰胺的含量
式(1)中，X—乳粉中三聚氰胺的含量，mg/kg; c -從標準曲線得到的三聚氰胺含量，mg/L; V 一乙腈體積，mL; m —乳粉稱量質量，g。計算得乳粉中三聚氰胺的含量為3. 60mg/kg。加標樣品中三聚氰胺含量為5. 46mg/kg，加標回收率為93. 0%。實施例2
①準確稱取另一某品牌乳粉2.00g，加入5. OOmL乙腈振蕩提取5min，超聲提取5min ； 靜置Imin后，準確量取2mL上清液，向上清液中加入質量濃度為21的醋酸鋅0. IOmL混勻； 以8000r/min轉速離心Imin ；準確量取1. OOmL上清液，加入1. OOmL正己烷，劇烈振蕩lmin， 下層清液即為待測液；同時進行空白試驗和加標試驗，樣品中加標量為ang/kg ；
②在檢測池中依次加入0.50mL銀納米溶膠、所述0. 050mL待測溶液和0. IOmL質量濃 度為1%的氯化鉀溶液，搖勻，置檢測池于激光拉曼光譜儀檢測室內，在400 1700CHT1范圍 內進行拉曼光譜掃描獲得拉曼光譜圖，儀器參數同實施例1。③進行定性判斷
加標試驗的檢測池712cm-1 士3CHT1處存在特征拉曼峰；
乳粉和空白試驗的檢測池
權利要求
1.一種快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，其特征在于按照下述 步驟進行①稱取乳粉1.0 2. 0g，加入3 5mL乙腈振蕩、超聲，靜置后，準確量取上清液，在上 清液中加入蛋白沉淀劑，混勻，離心，再準確量取上清液，加入正己烷，振蕩，下清液即為待 測溶液；②在檢測池中依次加入表面增強試劑、所述待測溶液和無機鹽絮凝劑，搖勻，置檢測池 于激光拉曼光譜儀檢測室內，在400 1700 cm-1范圍內進行拉曼光譜掃描獲得拉曼光譜 圖；③進行定性判斷當712cm—1士3cm—1處存在明顯特征拉曼峰時，乳粉中存在三聚氰胺；④定量測定對測定的拉曼光譜圖，以1017CHT1士3CHT1處的特征拉曼峰作為定量基準 峰，采用歸一化方法，根據三聚氰胺的拉曼光譜信號的相對強度與三聚氰胺含量的線性比 例關系，對乳粉中的三聚氰胺進行現(xiàn)場快速的定量檢測。
2.根據權利要求1所述的快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，其 特征在于步驟①中所述蛋白沉淀劑為質量濃度為m的醋酸鉛溶液或者質量濃度為m的醋 酸鋅溶液。
3.根據權利要求2所述的快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，其 特征在于步驟②中所述表面增強劑為金納米溶膠或者銀納米溶膠，所述無機鹽凝聚劑為質 量濃度為1%的氯化鈉溶液或質量濃度為1%的氯化鉀溶液。
4.根據權利要求3所述的快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，其 特征在于步驟①取1. OOg乳粉，加入3. OOmL乙腈振蕩5min，超聲提取5min ；靜置Imin后， 取ImL上清液加入0. 050mL蛋白沉淀劑混勻；8000r/min離心Imin ；取0. 50mL上清液，加入 0. 50mL正己烷，劇烈振蕩lmin，下層清液即為待測液。
5.根據權利要求4所述的快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，其 特征在于所述步驟②待測溶液的量為0. 050mL，表面增強試劑的量為0. 50mL，無機鹽凝聚 劑 0. IOmL0
6.根據權利要求4所述的快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，其 其特征在于所述激光光源的功率為200mW。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種快速分析乳粉中三聚氰胺含量的激光拉曼光譜檢測方法，其按照下述步驟進行①稱取乳粉1.0～2.0g，加入3～5mL乙腈振蕩、超聲，靜置后，準確量取上清液，在上清液中加入蛋白沉淀劑，混勻，離心，再準確量取上清液，加入正己烷，振蕩，下清液即為待測溶液；②在檢測池中依次加入表面增強試劑、所述待測溶液和無機鹽絮凝劑，搖勻，置檢測池于激光拉曼光譜儀檢測室內，在400～1700cm-1范圍內進行拉曼光譜掃描獲得拉曼光譜圖；③進行定性判斷；④定量計算。本發(fā)明的測定方法前處理的步驟簡單、快速，三聚氰胺的回收率高，克服了現(xiàn)有技術中乳粉的處理方法不適于拉曼光譜檢測的技術問題，是現(xiàn)有檢測技術的重要補充。
文檔編號G01N21/65GK102087217SQ201110008009
公開日2011年6月8日 申請日期2011年1月14日 優(yōu)先權日2011年1月14日
發(fā)明者劉春偉, 張會軍, 張巖, 張敬軒, 李國俊, 李強, 李揮 申請人:河北省食品質量監(jiān)督檢驗研究院