專利名稱：一種檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及常見氨基酸的液相色譜檢測方法，具體涉及一種檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法及用途。
背景技術(shù)：
已知氨基酸(Amino acid)為含有氨基和羧基的一類有機(jī)化合物的通稱，其示生物功能大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位，是構(gòu)成動(dòng)物營養(yǎng)所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。現(xiàn)有技術(shù)公開了氨基連在α-碳上的為α-氨基酸；天然氨基酸均為α-氨基酸。其中，常見的20種L-α-氨基酸包括(I)精氨酸，(2)天冬酰胺，(3)谷氨酰胺，(4)絲氨酸，(5)天冬氨酸，
(6)谷氨酸，(7)蘇氨酸，(8)甘氨酸，(9)丙氨酸，(10)脯氨酸，(11)甲硫氨酸，(12)纈氨酸，(13)苯丙氨酸，(14)色氨酸，(15)異亮氨酸，(16)亮氨酸，(17)組氨酸，(18)半胱氨酸，(19)賴氨酸，(20)酪氨酸，它們的結(jié)構(gòu)通式為
權(quán)利要求
1.一種檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，其包括步驟將待測樣品經(jīng)過樣品預(yù)處理后，加入反應(yīng)溶劑及衍生化試劑進(jìn)行衍生化反應(yīng)，然后采用高效液相色譜法測定20種常見氨基酸衍生物的濃度，確定氨基酸的含量。
2.按權(quán)利要求I所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，所述的反應(yīng)試劑為不含有活潑胺基的有機(jī)溶劑，選自乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃、甲苯、苯或乙醚。
3.按權(quán)利要求I所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，所述的樣品預(yù)處理是，取適量待測中性水溶液樣品，加入乙腈稀釋或沉淀蛋白。
4.按權(quán)利要求I所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方 法，其特征在于，所述的樣品選自植物天然提取物、藥品、保健食品或飼料；或血漿、尿液、腦脊液、生物組織材料。
5.按權(quán)利要求I所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，按下述步驟測定動(dòng)植物天然提取物、藥品、保健食品或飼料中20種常見氨基酸濃度 定量分取動(dòng)植物天然提取物樣品，加入定量的反應(yīng)試劑混勻，再加入硼酸鹽緩沖液及過量的衍生化試劑進(jìn)行反應(yīng)，渦旋混勻，放置一段時(shí)間后，用液相色譜法測定氨基酸衍生物的濃度； 所述的衍生化試劑為9-氯甲酸芴甲酯，其分子式為FMOC-C1，結(jié)構(gòu)式如通式(I )，
6.按權(quán)利要求I所述的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法，其特征在于，按下述步驟測定血漿、尿液、腦脊液、生物組織材料中20種常見氨基酸濃度， 定量稱取待測樣品，加入定量的蛋白沉淀試劑，渦旋混勻，高速離心，取上清液，加入硼酸鹽緩沖液及過量的衍生化試劑反應(yīng)，渦旋混勻，放置一段時(shí)間后，用液相色譜法測定氨基酸衍生物的濃度； 所述的蛋白沉淀試劑選自乙腈或者甲醇； 所述的高效液相色譜法，是采用紫外檢測器測定20種常見氨基酸衍生物的峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線校正方程換算成氨基酸的濃度；其中，液相色譜柱采用通用型，填料選自十八烷基鍵合相硅膠或辛烷基鍵合相硅膠；流動(dòng)相由乙腈和50 mM pH值為4. 15的乙酸鈉緩沖液組成，梯度洗脫，檢測波長為UV 263nm。
7.按權(quán)利要求5或6的方法，其特征在于，所述的20種常見氨基酸的線性范圍為O.17 98. 40 μ g/mL。
8.按權(quán)利要求5或6的方法，其特征在于，所述的20種常見氨基酸的最低檢測限為O.05 O. 13 μ g/mL，其中，進(jìn)樣量為20 μ L0
9.權(quán)利要求I的檢測多種常見氨基酸的液相色譜方法在測定中藥板藍(lán)根中氨基酸濃度中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種檢測常見氨基酸的液相色譜方法以及其在中藥板藍(lán)根中的應(yīng)用。本發(fā)明是將待測樣品經(jīng)過樣品預(yù)處理后，加入反應(yīng)溶劑及衍生化試劑進(jìn)行衍生化反應(yīng)，然后采用高效液相色譜法測定20種常見氨基酸的濃度。本發(fā)明的方法采用通用型的液相色譜柱和紫外檢測器對(duì)氨基酸進(jìn)行高效液相色譜測定，并能排除其他物質(zhì)對(duì)氨基酸的干擾。本發(fā)明可用于動(dòng)植物天然提取物、藥品、保健食品、飼料以及血漿、尿液、腦脊液、生物組織等生物材料中氨基酸濃度的定量測定，且也可準(zhǔn)確測定中藥板藍(lán)根中氨基酸的含量。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102621250SQ20111003284
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2011年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月30日
發(fā)明者周威, 段更利 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)