專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，特別涉及本發(fā)明藥物組合物注射液的指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法及其注射液中總皂苷和9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：本發(fā)明藥物組合物注射液是由黃芪、人參、苦參素3味藥物組成、采用現(xiàn)代提取分離技術(shù)精制而成的中藥注射劑，具有益氣扶正，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的功效，在臨床上用于原發(fā)性肝癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科腫瘤以及各種原因引起的白細(xì)胞低下及減少癥和慢性乙型肝炎的治療。高效液相色譜(HPLC)技術(shù)是構(gòu)建中藥指紋圖譜主要的方法，在中藥的質(zhì)量控制中發(fā)揮著重要的作用；但目前中藥指紋圖譜研究尚處于研究階段，還存在一些問(wèn)題需要不斷探索，如指紋圖譜研究的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化有待加強(qiáng)，由于受所用儀器、色譜柱等影響，指紋圖譜的重現(xiàn)性問(wèn)題尚需提高，指紋圖譜分析評(píng)價(jià)方法還有待完善等。超高效液相色譜(UltraPerformanceLiquidChromatography,UPLC)色譜理論認(rèn)為提高色譜柱的效能(efficiency)就能增加儀器的解析度(resolution),而運(yùn)用粒徑低于2μπι的小顆粒無(wú)疑是增加效能的好方法；但減小固定相的粒度以增加色譜柱效能一直的色譜儀器科學(xué)的瓶頸，因?yàn)樾☆w粒不僅要求系統(tǒng)能承受高于目前極限壓力(比如6000psi/400bar)，需要更小的系統(tǒng)體積(死體積)，并且需要能適應(yīng)可能只有幾秒峰寬的高速檢測(cè)器；與傳統(tǒng)的高效液相色譜(HPLC)相比，UPLC具有高分離度(ultraresolution)、高速度(ultraspeed)、靈敏度(sensitivity)等優(yōu)勢(shì)；目前，UPLC多應(yīng)用于代謝組學(xué)分析及其他一些生化領(lǐng)域，在天然產(chǎn)物的分析方面運(yùn)用也逐漸興起，因?yàn)樵谶@些領(lǐng)域深入研究需要更高的分析精度。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):本發(fā)明藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括如下含量測(cè)定和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.01.2mg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成濃度為1.01.lmg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液23ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈桑尤胂悴萑?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9,10-二甲氧基紫植燒-3-0-β-D-匍萄糖苷對(duì)照品，配制為15.016.5μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,進(jìn)樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈桑尤胂悴萑?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜檢測(cè)方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min，理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi；毛細(xì)管電壓(Vcap):4000V;四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(OCTIRFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以8%12%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以75%85%甲醇18ml溶液洗脫，收集75%85%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；本發(fā)明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.712±0.071，0.740±0.074，0.749±0.075，0.769±0.077，0.834±0.083，1.000±0.000，1.019±0.102，1.031±0.103，1.038±0.104，1.045±0.105，1.059±0.106，1.072±0.107，1.173±0.117，1.191±0.119，1.204±0.120;相對(duì)保留峰面積分別為:1.616±0.161,2.631±0.263,2.036±0.204，12.671±1.267,3.346±0.335，1.000+0.000,0.868+0.087,0.428+0.043,0.566+0.057,0.854+0.085,0.633±0.063,0.402±0.040,0.417±0.042,0.295±0.030,0.461±0.046。本發(fā)明藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，優(yōu)選如下含量測(cè)定和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.999mg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.1OOmg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成濃度為1.050mg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液2.5ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml,高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，配制為15.9μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,進(jìn)樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml,高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法為，色譜條件:分析色譜柱:AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測(cè)波長(zhǎng):205nm，柱溫:30°C，流速:0.8ml/min，理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:0分鐘15%A，20分鐘19%A，36分鐘25.5%A，50分鐘50%A，65分鐘70%A，85分鐘70%A;質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細(xì)管電壓(Vcap)4000V;四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor)175V;截取錐電壓(Skimmer)65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤?%冰醋酸水溶液2ml使溶解,上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗)分離，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；本發(fā)明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.712，0.740，0.749，0.769，0.834，1.000，1.019，1.031，1.038，1.045，1.059，1.072，1.173，1.191，1.204;相對(duì)保留峰面積分別為:1.616,2.631,2.036，12.671,3.346，1.000,0.868,0.428,0.566,0.854,0.633,0.402，0.417,0.295,0.461。本發(fā)明藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，優(yōu)選如下含量測(cè)定和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0mg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成濃度為1.0mg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液2.1ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻Imin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，配制為15.2μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈桑尤胂悴萑?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜檢測(cè)方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min，理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細(xì)管電壓(Vcap):4000V;四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)应獻(xiàn)%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗)分離，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以9%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以78%甲醇18ml溶液洗脫，收集78%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；本發(fā)明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.781,0.791,0.810,0.830,0.91,1.000，1.119，1.131，1.138，1.145，1159，1.172，1.273，1.291，1.304;相對(duì)保留峰面積分別為:1.776,2.891,2.236，13.671,3.676，1.000,0.948,0.471,0.616,0.939,0.696,0.442，0.459,0.325,0.507。本發(fā)明藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，優(yōu)選如下含量測(cè)定和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:A藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.18mg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成濃度為1.09mg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液3ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈桑尤胂悴萑?.2ml,高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，配制為16.3μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C藥物組合物注射液指紋圖譜檢測(cè)方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min，理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min)，70%A(65min),70%A(85min);質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細(xì)管電壓(Vcap):4000V;四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗)分離，先以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以11%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以82%甲醇18ml溶液洗脫，收集82%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；本發(fā)明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.642,0.670,0.679,0.700,0.75，1.000，1.009，1.008，1.008，1.005，1.009，1.007，1156，1.072，1.084;相對(duì)保留峰面積分別為:1.455,2.368，1.832，11.404,3.311，1.000,0.781,0.385,0.509,0.769,0.570,0.362，0.375,0.265,0.415。上述本發(fā)明藥物組合物注射液的原料藥組成為:黃芪25-35重量份、人參8_12重量份、苦參素0.5-1.5重量份；本發(fā)明藥物組合物注射液的制備方法為:以上三味藥,人參用60-80%的乙醇，回流提取1-3次，每次1-2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為650C1.101.20的清膏，備用；黃芪加水煎煮1-3次，每次1-3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為65°C1.101.20的清膏，與人參清膏合并，加乙醇使含醇量達(dá)75%，用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，靜置10-18小時(shí)，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對(duì)密度為650C1.101.15的清膏；再加乙醇使含醇量達(dá)85%，用氫氧化鈉調(diào)值PH至67，靜置，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加注射用水到400ml，用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，加活性炭適量，攪勻，煮沸15分鐘，濾過(guò)，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調(diào)PH值至67，100—120°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭后的藥液合并，混勻，加注射用水至規(guī)定量，濾過(guò)，灌裝，即得。上述本發(fā)明藥物組合物注射液的原料藥組成為:黃芪30重量份、人參10重量份、苦參素I重量份；本發(fā)明藥物組合物注射液的制備方法為:以上三味藥，人參用75%的乙醇，回流提取三次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.20(65°C)的清膏，備用；黃芪加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.20(65°C)的清膏，與人參清膏合并，加乙醇使含醇量達(dá)75%，用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，靜置12小時(shí)，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.101.15(650C)的清膏；再加乙醇使含醇量達(dá)85%，用氫氧化鈉調(diào)值PH至67，靜置，濾過(guò)，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加注射用水到400ml，用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，加活性炭適量，攪勻，煮沸15分鐘，濾過(guò)，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調(diào)PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭后的藥液合并，混勻，加注射用水至規(guī)定量，濾過(guò)，灌裝，即得。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:本發(fā)明藥物組合物注射液含量測(cè)定方法，更加明確了產(chǎn)品的有效成分及其含量測(cè)定方法，能更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證產(chǎn)品更安全、有效；本發(fā)明使用指紋圖譜技術(shù)有效的控制了本發(fā)明藥物組合物注射液的質(zhì)量；通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明指紋圖譜測(cè)定方法精密度良好，重現(xiàn)性較好，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好;本發(fā)明通過(guò)高分辨質(zhì)譜對(duì)化學(xué)成分的鑒定，實(shí)驗(yàn)依據(jù)更加充分和考靠；所鑒定的色譜峰經(jīng)過(guò)該色譜峰(TIC)保留時(shí)間區(qū)域的質(zhì)譜圖比較，證明該色譜峰顯示了單一的化合物；本發(fā)明藥物組合物注射液色譜指紋圖譜(除苦參素外)中共鑒定了16個(gè)化學(xué)成分，以上化學(xué)成分進(jìn)一步經(jīng)過(guò)高分辨質(zhì)譜進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確認(rèn)；四個(gè)化學(xué)成分來(lái)源于藥材黃苗，分別為(6aR,IlaR)-3-hydroxy-9,lO-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-sambubioside,9,10_二甲氧基紫植燒-3-0-β-D-匍萄糖昔、2’-輕基-3’，4’-二甲氧基異黃烷-7-0-β-D-葡萄糖苷和黃芪甲苷；十二個(gè)化學(xué)成分來(lái)源于藥材人參，其中8個(gè)化學(xué)成分(人參皂苷Re，Rgl，Rf，RbI，Re，Rg2，Rb2和Rd)來(lái)源于人參藥材中的原型成分，4個(gè)化學(xué)成分來(lái)源于人參藥材中含量高的原型成分在生產(chǎn)和制劑工藝中(藥材提取溶液的酸性環(huán)境、較高溫度加熱80度，制劑滅菌100度加熱)特定工藝條件下分解產(chǎn)生的次級(jí)人參皂苷，但本身也是活性化學(xué)成分。附圖:1.未進(jìn)行固相萃取處理的本發(fā)明藥物組合物注射液供試品2.氧化苦參堿的ESI(+)MS的質(zhì)譜圖3.氧化苦參堿為UV205nm檢測(cè)I4.氧化苦參堿為UV205nm檢測(cè)25.本發(fā)明藥物組合物注射液中化學(xué)成分低分辨LC-MS鑒定6.本發(fā)明藥物組合物注射液中化學(xué)成分低分辨LC-MS鑒定人參皂苷Rgl7.本發(fā)明藥物組合物注射液中化學(xué)成分低分辨LC-MS鑒定人參皂苷Re8.9,10-_■甲氧基紫植燒-3-0-β-D-甸萄糖昔(N0.4)9.2’-羥基-3’，4’-二甲氧基異黃烷-7-0-β-D-葡萄糖苷(N0.5)10.人參皂苷Rf(N0.6)11.人參皂苷Rbl(N0.7)12.人參皂苷Re(N0.8)13.人參皂苷Rg2(N0.9)14.人參皂苷Rb2(N0.10)15.人參皂苷Rhl(N0.11)16.黃芪甲苷(N0.12)17.人參皂苷Rd(N0.13)18.人參皂苷Rg5，Rg6,RKl，F(xiàn)419.人參皂苷Rh4或Rk3(N0.15)20.人參皂苷Rk3或Rh4(N0.16)21-1.ESI(-)負(fù)離子的總離子流圖(TIC)21_2.0六0檢測(cè)器圖譜(205.)22.本發(fā)明藥物組合物注射液組分高分辨LC-MS鑒定(N0.1)23.人參皂苷Rgl(N0.2)24.人參皂苷Re(N0.3)25.9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷(N0.4)26.2’-羥基-3’，4’-二甲氧基異黃烷-7-0-β-D-葡萄糖苷(N0.5)27.人參皂苷Rf(N0.6)28.人參皂苷Rbl(N0.7)29.人參皂苷Re(N0.8)30.人參皂苷Rg2(N0.9)31.人參皂苷Rb2(N0.10)32.人參皂苷Rhl(N0.11)33.黃芪甲苷(N0.12)34.人參皂苷Rd(N0.13)35.人參皂苷Rg5、F4、Rkl或Rg6(N0.14)36.人參皂苷Rh4或Rk3(N0.15)37.人參皂苷Rk3或Rh4(N0.16)38.本發(fā)明藥物組合物注射液150min圖譜39.空白梯度圖譜40.本發(fā)明藥物組合物注射液指紋圖譜下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明；本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中藥物組合物注射液均由實(shí)施例1方法制備。實(shí)驗(yàn)例IHPLC-ES1-1ontrap分析鑒定本發(fā)明藥物組合物注射液中的化學(xué)成分I儀器與色譜質(zhì)譜條件1.1儀器與材料高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀:高效液相:Agilent1200series;質(zhì)譜:BrukerHCT1ntrap(三維離子講質(zhì)譜儀)色譜純乙臆(Acetonitrile):HPLCgrade,FisherScientific色譜純甲醇(Methanol):HPLCgrade,TianjinJizhunChemicals超純水(Water):ultra-purewater固相萃取柱(SPE):TianjinShuangjichromatographyscientific1.2色譜條件分析色譜柱:AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm檢測(cè)波長(zhǎng):205nm,柱溫:30°C,流速:0.8ml/min理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000Timetable:Time(min)Acetonitrile-water(V/V)015:852019:813625.5:74.55050:506570:308570:301.3質(zhì)譜條件ESIconditions:GasTemp:350°CDryingGas:8L/minNebulizer:30psiVcap:4000V`MS1ntrapconditions:CapillaryExit:145VSkimmer:40V1.4工作站BrukerESICompass1.3forHCT/EsquireDataAnalysisversion4.02供試品溶液制備`2.1樣品前處理本發(fā)明藥物組合物注射液中(實(shí)施例1制備)含有大量的苦參素(10mg/mL)，而苦參素是氧化苦參堿(Oxymatrine)與極少量氧化槐果堿(Oxysophocarpine)的混合堿,本實(shí)驗(yàn)以液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)方法鑒定了大量氧化苦參堿的存在；HPLC-ES1-MS分析:在色譜指紋圖譜開(kāi)始2-5min出現(xiàn)一很大的色譜峰(圖1)，經(jīng)HPLC-ES1-MS鑒定為苦參素；氧化苦參堿的分子量為264.4，質(zhì)譜圖中的265.1為氧化苦參堿的[M+H]+峰，529.2為氧化苦參堿的[2M+H]+峰(圖2);為了避免大量苦參素的存在對(duì)人參和黃芪化學(xué)成分分析的干擾，我們采用固相萃取方法除去大量的苦參素。2.2樣品前處理實(shí)驗(yàn)步驟:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg;活化步驟:使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；備注:利用薄層色譜法(TLC)鑒定酸水洗脫液、水洗脫液含有大量苦參素，10%甲醇洗脫液中含有極少量的苦參素，80%甲醇洗脫液未見(jiàn)苦參素斑點(diǎn)，而顯示紫紅色皂苷的斑點(diǎn)；100%甲醇洗脫液未見(jiàn)明顯斑點(diǎn)；進(jìn)一步對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰。權(quán)利要求1.一種藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下含量測(cè)定、鑒別和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:A、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.98·1.10mg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0·1.2mg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1V/V的比例混合，制成濃度為1.01.lmg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液23ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，配制為·15.016.5μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-·18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,進(jìn)樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18:150X4.6mm,5μm,流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:0分鐘:15%A，30分鐘:25%A，40分鐘:40%A，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草醛?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜檢測(cè)方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18:·150X4.6mm,5μm,檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30°C，流速·0.8ml/min,理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:0分鐘:15%A，20分鐘:19%A，36分鐘:25.5%A,50分鐘:50%A，65分鐘:70%A，85分鐘:70%A;質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細(xì)管電壓(Vcap):4000V;四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤?%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以·15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以8%12%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以75%85%甲醇18ml溶液洗脫，收集75%85%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用·0.45μπι微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.712±0.071,0.740±0.074,0.749±0.075,0.769±0.077,0.834±0.083，1.000±0.000，1.019±0.102，1.031±0.103，1.038±0.104，1.045±0.105，1.059±0.106，1.072±0.107，1.173±0.117，1.191±0.119，1.204±0.120;相對(duì)保留峰面積分別為:1.616±0.161,2.631±0.263,2.036±0.204，12.671±1.267,3.346±0.335，1.000±0.000，0.868±0.087，0.428±0.043，0.566±0.057，0.854±0.085，0.633±0.063,0.402±0.040,0.417±0.042,0.295±0.030,0.461±0.046；藥物組合物注射液由如下方法制成:黃苗25-35重量份、人參8-12重量份、苦參素0.5-1.5重量份以上三味藥，人參用60-80%的乙醇，回流提取1-3次，每次1_2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為65°C1.101.20的清膏，備用；黃芪加水煎煮1-3次，每次1-3小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為65°C1.101.20的清膏，與人參清膏合并，加乙醇使含醇量達(dá)75%，用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，靜置10-18小時(shí)，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對(duì)密度為65°C1.101.15的清膏；再加乙醇使含醇量達(dá)85%，用氫氧化鈉調(diào)值PH至67,靜置,濾過(guò),濾液回收乙醇至無(wú)醇味,加注射用水到400ml,用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調(diào)PH值至67，加活性炭適量，攪勻，煮沸15分鐘，濾過(guò)，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調(diào)PH值至67，100--120°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭后的藥液合并，混勻，加注射用水至規(guī)定量，濾過(guò)，灌裝，即得。2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下含量測(cè)定、鑒別和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:A、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.999mg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.100mg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1V/V的比例混合，制成濃度為1.050mg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液2.5ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，配制為15.9μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μL分析;液相條件=AgilentEclipseXDB-C18:.150X4.6mm，5μm，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:0分鐘:.15%A，30分鐘:25%A,40分鐘:40%A，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm,柱溫30V，流速0.8ml/min;精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜的質(zhì)量檢測(cè)方法為，色譜條件:分析色譜柱=AgilentXDB-C18:150Χ4.6_，5μπι，檢測(cè)波長(zhǎng):205nm，柱溫:30°C，流速:0.8ml/min，理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:0分鐘15%A,20分鐘19%A,36分鐘25.5%A,50分鐘50%A,65分鐘70%A,85分鐘70%A;質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細(xì)管電壓(Vcap)4000V；四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor)175V；截取錐電壓(Skimmer)65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤?%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫,然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.712,0.740,0.749,0.769,0.834，1.000，1.019，1.031，1.038，1.045，1.059，1.072，.1.173，1.191，1.204;相對(duì)保留峰面積分別為:1.616,2.631,2.036，12.671,3.346，1.000，.0.868,0.428,0.566,0.854,0.633,0.402,0.417,0.295,0.461。3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下含量測(cè)定、鑒別和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:Α、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.10mg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.0mg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成濃度為1.0mg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液2.1ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水IOml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈?，加入香草?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，配制為15.2μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液I3ml使溶解，上C-18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以IOml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾,進(jìn)樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈桑尤胂悴萑?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜檢測(cè)方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18150X4.6mm5μm,檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min,理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min),70%A(65min),70%A(85min)；質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細(xì)管電壓(Vcap):4000V;四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤?%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以9%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以78%甲醇18ml溶液洗脫，收集78%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；本發(fā)明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.781,0.791,0.810,0.830,0.91，1.000，1.119，1.131，1.138，1.145，1.159，1.172，1.273，1.2911.304;相對(duì)保留峰面積分別為:1.776,2.891,2.236，13.671，3.676，1.000,0.948,0.471,0.616,0.939,0.696,0.442,0.459,0.325,0.507。4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下含量測(cè)定、鑒別和/或指紋圖譜檢測(cè)方法:Α、藥物組合物注射液中總皂苷成分的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，精密稱(chēng)取人參皂苷Rgl標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成0.981.1Omg/ml的人參皂苷儲(chǔ)備溶液；精密稱(chēng)取黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品，置于容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成1.1Smg/ml的黃芪甲苷儲(chǔ)備溶液，將以上兩種儲(chǔ)備溶液按照1:1(V/V)的比例混合，制成濃度為1.09mg/ml對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液3ml，注入活化后的C18SPE柱，依次采用水10ml，I%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫，將80%甲醇-水洗脫部分蒸干，取甲醇適量定容于2ml容量瓶，制成供試品溶液；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈桑尤胂悴萑?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；B、藥物組合物注射液中9，10-二甲氧基紫檀烷-3-Ο-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法為:對(duì)照品溶液制備，稱(chēng)取9，10-二甲氧基紫檀烷-3-Ο-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品，配制為16.3μg/ml的對(duì)照品溶液；供試品溶液制備，精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液.10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤隝%冰醋酸水溶液3ml使溶解，上C_18，500mg固相萃取柱，使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗分離，以15mlI%冰醋酸水溶液洗脫,再以.1Oml水洗脫，然后以10%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以80%甲醇18ml溶液洗脫，收集80%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μL分析；液相條件:AgilentEclipseXDB-C18(150X4.6mm，5μm)，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),25%A(30min),40%A(40min)，檢測(cè)波長(zhǎng)207nm,柱溫30°C，流速0.8ml/min；精密吸取供試品溶液200μL，置于試管中，氮?dú)獯蹈桑尤胂悴萑?.2ml，高氯酸0.8ml混勻，于60°C進(jìn)行顯色反應(yīng)15min，加入冰醋酸5ml混勻，冰浴冷卻lmin，以空白溶液作參比，在552nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總皂苷的量，即得；C、藥物組合物注射液指紋圖譜檢測(cè)方法為:色譜條件，分析色譜柱AgilentXDB-C18.150X4.6mm5μm,檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30°C，流速0.8ml/min,理論板數(shù)按人參皂苷Rf峰計(jì)算應(yīng)不低于200000，流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫:15%A(Omin),19%A(20min),25.5%A(36min),50%A(50min),70%A(65min),70%A(85min)；質(zhì)譜條件:電噴霧(ESI)離子源，正離子模式；氣簾氣溫度(Gastemp)350°C;氣簾氣流速(Gasflow)8L/min;輔助氣壓力(Nebulizer)為30psi;毛細(xì)管電壓(Vcap):4000V;四級(jí)桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀條件(MSQTOFconditions):碎裂電壓(Fragmentor):175V;截取錐電壓(Skimmer):65V;第一重八級(jí)桿的射頻電壓(0CT1RFVpp)750V;供試品溶液制備:精密量取本發(fā)明藥物組合物注射液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)尤?%冰醋酸水溶液2ml使溶解，上固相萃取柱(C-18，500mg，活化步驟:使用前先用無(wú)水甲醇5ml、再用5ml雙蒸水沖洗)分離，先以15ml1%冰醋酸水溶液洗脫，再以IOml水洗脫，然后以11%甲醇水溶液15ml洗脫，棄去上述洗脫液，再以82%甲醇18ml溶液洗脫，收集82%甲醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μπι微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μI分析；對(duì)10%和100%甲醇洗脫液進(jìn)行HPLC分析，在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間沒(méi)有皂苷類(lèi)和黃酮類(lèi)色譜峰；本發(fā)明藥物組合物注射液指紋圖譜共有15個(gè)指紋峰，共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為:0.642,0.670,0.679,0.700,0.75，1.000，1.009，1.008，1.008，1.005，.1.009，1.007，1.156，1.072，1.084;相對(duì)保留峰面積分別為:1.455,2.368，1.832，11.404，.3.311，1.000,0.781,0.385,0.509,0.769,0.570,0.362,0.375,0.265,0.415。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)一種藥物組合物注射液的質(zhì)量檢測(cè)方法；其中色譜指紋圖譜質(zhì)量檢測(cè)方法用分析色譜柱AgilentXDB-C18150×4.6mm5μm，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫30℃，流速0.8ml/min；供試品溶液制備，取藥物組合物注射液，水浴蒸干，殘?jiān)尤氡姿崴芤喝芙猓瞎滔噍腿≈蛛x，梯度洗脫，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣10μl分析，供試品指紋圖譜(見(jiàn)附圖40)；本發(fā)明還提供該藥物組合物注射液中總皂苷和9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定方法。文檔編號(hào)G01N21/31GK103105371SQ20111035496公開(kāi)日2013年5月15日申請(qǐng)日期2011年11月10日優(yōu)先權(quán)日2011年11月10日發(fā)明者段宏泉,翁紅,張子安,李穎,楊玲申請(qǐng)人:長(zhǎng)白山制藥股份有限公司