專利名稱：基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法
基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法技術領域
本發(fā)明屬于分析化學領域，具體涉及一種基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法。
背景技術：
食品中可能添加的物質品種繁多，近幾年來一些食品安全事件曝光一些不法商販違法在食品中添加非食用工業(yè)染料。如添加在辣椒制品中的蘇丹染料，羅丹明B ；添加在腌制醬菜中的堿性橙、堿性嫩黃；添加在水產品中的堿性橙I、堿性橙II等，這些染料大多屬于偶氮類，原料為石化產品，含有大量苯環(huán)芳烴類雜質或者副產品，有很強致癌性，對人體健康危害極大。
一般來說，非法添加進入食品的化合物為保證產品色、香、味更為持久有效，與常見的合法食品添加劑相比，水溶性較差，極性較弱。目前檢測這類化合物的文獻和標準主要為液相色譜法、氣相質譜法、液相色譜/質譜法，均是有針對性的檢測。發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法，采用飛行時間質譜技術結合快速液相色譜分離，建立了食品中違禁添加物質的快速篩查方法并實際應用，具備顯著的社會效益。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法，其特征在于采用液相色譜/飛行時間質譜技術篩查違禁染料蘇丹I、II、III、IV、7B、對位紅、蘇丹藍2、蘇丹橙、蘇丹黑B、蘇丹黃、橙色I、橙色II、孔雀石綠、龍膽紫、羅丹明B、蘇丹G、堿性橙、堿性嫩黃和柑橘紅2號，并對可疑樣品進行確證和定量； 所述的方法的具體步驟如下1)篩查采用150V錐孔電壓掃描，調用已建立的質譜篩查數(shù)據(jù)庫以分子式匹配模式自動檢索，質量允許誤差設置IOppm ；2)確證對篩查發(fā)現(xiàn)的可疑化合物采用保留時間結合源內裂解進一步確證；3)定量對于確證為違禁染料的化合物定量。根據(jù)化合物不同，分別采用優(yōu)化的錐孔電壓，基體工作曲線外標法定量；由于飛行時間質譜的線性范圍小于3個數(shù)量級，因此超過線性范圍的樣品，需要稀釋，以滿足準確定量的需要。
本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于提供一種基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法，采用飛行時間質譜技術結合快速液相色譜分離，建立了食品中違禁添加物質的快速篩查方法并實際應用，具備顯著的社會效益。


圖1是化合物的分子結構圖。
圖2是篩查出樣品中含有蘇丹I的檢索流程圖圖2-1是本節(jié)建立的脂溶性化合物質譜篩查數(shù)據(jù)庫。
圖2-2是篩查出樣品中含有蘇丹I的結果圖；圖2-3是與所建立的質譜篩查數(shù)據(jù)庫匹配圖；圖2-4是篩查出樣品中含有蘇丹I的質譜圖。
圖3-1是辣椒粉篩查發(fā)現(xiàn)違禁染料-羅丹明B ；圖3-2是篩查的樣品證實含有羅丹明B。
具體實施方式
1實驗部分試劑及材料蘇丹I、II、III、IV、7B、對位紅、蘇丹藍2、蘇丹橙、蘇丹黑B、蘇丹黃、橙色I、橙色II、孔雀石綠、龍膽紫、羅丹明B、蘇丹G、堿性橙、堿性嫩黃和柑橘紅2號的化合物信息見表1 ；中性氧化鋁80-100目，層析級，使用前105°C干燥2小時，每IOOg加ImL去離子水降低吸附活性，裝填在直徑1 cm、長30cm的玻璃層析柱內，高度約4cm，使用前用正己烷沖洗。
儀器和設備Agilent RRLC 1200快速液相色譜系統(tǒng)，配有二極管陣列檢測器、Agilent 62 飛行時間質量分析器；旋轉蒸發(fā)儀；漩渦振蕩器；低速離心機 1. 3色譜條件及質譜參數(shù)色譜條件色譜柱為Agilent SB C18柱(2. 1X50 mm，1. 8 μ m)；流動相A為0. 1%甲酸溶液，B為乙腈；梯度淋洗，初始50% B,5min內至100% B保留至Hmin，14. Imin變?yōu)?50% B，平衡6min回到初始；質譜條件質譜掃描范圍100-1700 m/z ；脫溶劑氮氣11 mL/min，氣流溫度360°C，霧化壓力50psi ；毛細管電壓-4000 V，分液電壓65V，篩查錐孔電壓150 V，定量時采用優(yōu)化的錐孔電壓(表1)；定性時采用第二根霧化噴針加入質量參比溶液實時校正質量軸，噴霧壓力 5psi ；質量校正物質別分別為嘌呤(C5H4N4, m/z=121. 0509)和 C18H18O6N3P3F24, m/z = 922. 0098 ；進樣 2 μ L。
樣品前處理5g樣品，加入30mL正己烷提取2 3次，漩渦振蕩離心取上清液，旋轉濃縮揮干溶解， 殘渣用丙酮-正己烷(5 95, V/V)3mL溶解，溶解液過裝填在玻璃管的中性氧化鋁層析柱， 用正己烷洗5 8mL，然后用100%甲醇50mL洗脫，洗脫液60°C旋轉濃縮至1 2mL，轉移到離心管，用氮氣吹干。用乙腈1 mL溶解，過有機濾膜。待測。
油狀樣品(如辣椒油)吸取樣品1 2g，采用IOmL正己烷溶解，然后直接過氧化鋁柱。采用正己烷淋洗致流出液無色，以下處理同上。
含水分較多固態(tài)或流質樣品(如辣椒醬、調味醬、調味食品)稱取約5g樣品，采用 3X10mL正己烷-丙酮(3:1，V/V)提取，低速離心后合并上清液，加入1 2g 600°C烘烤 4h的無水硫酸鈉脫水，旋轉濃縮完全干后，用丙酮-正己烷(5 95, V/V)溶解殘渣，過氧化鋁柱，以下處理同上。
1.5試驗方法篩查采用150V錐孔電壓掃描，調用已建立的質譜篩查數(shù)據(jù)庫以分子式匹配模式自動檢索，質量允許誤差設置lOppm。
確證對篩查發(fā)現(xiàn)的可疑化合物采用保留時間結合源內裂解進一步確證； 定量基體工作曲線外標法定量。超過線性范圍的樣品，需稀釋。
2 結果化合物的分子結構信息本節(jié)所分析化合物的結構見圖1 表1 19種化合物的信息2.2篩查以篩查食品中是否含有蘇丹I為例說明篩查過程。
1)首先建立質譜篩查信息數(shù)據(jù)庫，數(shù)據(jù)庫包括質量信息、分子式組成以及碎片信息，該數(shù)據(jù)庫可不斷擴充。
2)按本節(jié)2. 3所述進行樣品前處理，經液相色譜/飛行時間質譜檢測獲得總離子流色譜圖，以安捷倫Masshimter質譜工作站軟件根據(jù)在1)中所建立的質譜篩查信息數(shù)據(jù)庫中進行檢索。根據(jù)檢索結果，結合同位素峰的豐度比和質量差匹配理論分子式組成以及其它特征離子信息(如含有加氫離子，失單電子離子，對應多價態(tài)離子、二聚體、脫水峰以及各種中性脫失離子)與化合物在液相色譜上的保留時間實際判斷。圖2為檢索流程。
2. 3 確證作為高分辨質譜，TOF-MS確證的評分標準是一個母離子2分，一個子離子2. 5分，4分即可作為化合物確證的要求(2002/657/EC)，在本實驗條件下可達到這個要求。以對辣椒樣品篩查為例說明，篩查時出現(xiàn)分子離子峰m/z 443.2335 ([M_H] +)、399. 1699 ([M-C2H6N] + 和m/z 355. 1078，為[M-C4HJ2]+的疑似羅丹明B的化合物，且保留時間與羅丹明B標準品的保留時間相同；符合對化合物的確證要求，證明了樣品中確實含有羅丹明B (圖3)。
2. 4 定量在各類液相色譜與質譜聯(lián)用的分析中，基質效應客觀存在，并隨樣品的不同影響作用不同。對常見的幾種食品辣椒油、辣椒醬、辣椒粉、火腿腸、調味粉的基質效應進行了研究。 由表2可知，不同食品所產生的基質效應不同。以5種樣品中基質效應最強的基質曲線進行外標法定量，以稱樣5g、定容體積ImL下信噪比S/N=10作為方法的最低定量限L0D(n = 6)，結果見表2。
表2在食品基體中各種禁用染料的校正曲線、相關系數(shù)和檢測限
權利要求
1.基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法，其特征在于采用液相色譜/飛行時間質譜技術篩查食品中可能含有的違禁染料蘇丹I、II、III、IV、7B、對位紅、 蘇丹藍2、蘇丹橙、蘇丹黑B、蘇丹黃、橙色I、橙色II、孔雀石綠、龍膽紫、羅丹明B、蘇丹G、堿性橙、堿性嫩黃和柑橘紅2號，并對可疑樣品進行確證和定量。
2.根據(jù)權利要求1所述的基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法， 其特征在于所述的方法的具體步驟如下1)篩查采用150V錐孔電壓掃描，調用已建立的質譜篩查數(shù)據(jù)庫以分子式匹配模式自動檢索，質量允許誤差設置IOppm ；2)確證對篩查發(fā)現(xiàn)的可疑化合物采用保留時間結合源內裂解進一步確證；3)定量對于確證為違禁染料的化合物定量；根據(jù)化合物不同，分別采用優(yōu)化的錐孔電壓，基體工作曲線外標法定量；超過線性范圍的樣品，需要稀釋。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于液相色譜/飛行時間質譜的食品中違禁染料篩查方法，采用飛行時間質譜技術結合快速液相色譜分離，建立了食品中違禁添加物質的快速篩查方法并實際應用，具備顯著的社會效益。
文檔編號G01N30/02GK102495150SQ20111038429
公開日2012年6月13日 申請日期2011年11月28日 優(yōu)先權日2011年11月28日
發(fā)明者張玉燕, 楊方, 錢疆, 陳健, 陳章捷, 陳馳 申請人:福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心