專利名稱：測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中中藥有效成分的方法，具體涉及一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中浙貝母有效成分的方法。
背景技術(shù)：
隨著全球性控?zé)熯\(yùn)動(dòng)的不斷推進(jìn)，社會(huì)公眾對(duì)于吸煙與健康問題日益關(guān)注。浙貝母有止咳化痰、清熱散結(jié)之作用，目前，部分卷煙已通過添加浙貝母提取物來降低吸煙引起的危害。而中藥功效與其主要的有效成分密切相關(guān)，中藥浙貝母的有效成分是貝母素甲、貝母素乙，這些有效成分的含量很低，尤其是在燃燒之后，這些有效成分可能經(jīng)熱裂解、化學(xué)反應(yīng)等產(chǎn)生變化，使卷煙主流煙氣中的含量更低，故對(duì)中藥材有效成分的進(jìn)行檢測(cè)有一定意義。現(xiàn)有的貝母素甲、貝母素乙的分析方法主要是高效液相色譜法，高效液相色譜法檢測(cè)器靈敏度低、自身抗干擾能力弱，在分析低含量樣品時(shí)，易出現(xiàn)定量不準(zhǔn)確或無法定量的問題，人們希望能有一種靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)的測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，提供一種靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)，能快速、準(zhǔn)確定量分析貝母素甲、貝母素乙的測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的。一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于:包括以下步驟:
(I)對(duì)于卷煙:將卷煙在22土 1°C、相對(duì)濕度60±2%的條件下平衡48小時(shí)后，測(cè)定50支經(jīng)過平衡卷煙的平均質(zhì)量和平均吸阻，按照平均質(zhì)量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支；
(2 )卷煙煙絲中貝母素甲、貝母素乙的提取:取按步驟(I)挑選出的5-20支卷煙煙絲于玻璃容器中，加入50ml-150ml的醇作為提取溶劑，對(duì)整個(gè)容器稱重，提取出貝母素甲、貝母素乙，用醇補(bǔ)足重量，過濾后即可進(jìn)樣分析；
(3)卷煙主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的提取:在吸煙機(jī)上，使用92mm的玻璃纖維濾片，捕集按步驟(I)挑選出的10-20支卷煙主流煙氣的粒相物，放置3-5min后取出濾片，將濾片置于玻璃容器中，加入50-150ml的醇作為提取溶劑，對(duì)整個(gè)容器稱重，提取出貝母素甲、貝母素乙，用醇補(bǔ)足重量，過濾后即可進(jìn)樣分析；
(4)對(duì)步驟(2)和步驟(3)所得樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。步驟(4)所述超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析中，色譜條件:分析柱=WatersAcquity UPLC BEH C18 (1.7ym,2.1 X 100mm);流動(dòng)相:A 相為添加了 0.1%_0.3% 有機(jī)酸 I的水溶液，B相為乙腈，梯度洗脫；流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ； 質(zhì)譜條件:根據(jù)貝母素甲、貝母素乙的質(zhì)譜碎裂規(guī)律，選擇串聯(lián)質(zhì)譜的特定掃描模式進(jìn)行分析，具體參數(shù)如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:550°C ;離子噴霧電壓:4200V。步驟(2)和步驟(3)所述提取過程為超聲波提取，震蕩提取或浸泡提取。步驟(2)和步驟(3)所述提取溶劑中的醇為包括一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)碳原子的一元醇或多元醇。所述色譜條件中流動(dòng)相所用的有機(jī)酸I為包括一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)碳原子的一元有機(jī)酸或多元有機(jī)酸；所述的質(zhì)譜條件中特定掃描模式為全掃描模式、中性丟失掃描模式、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式。本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明能夠有效地將卷煙煙絲及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙完全提取，然后經(jīng)過超高效液相色譜分析，串聯(lián)質(zhì)譜的特定掃描模式分析，從而實(shí)現(xiàn)貝母素甲、貝母素乙的快速、準(zhǔn)確定量分析。本發(fā)明的方法不僅可以測(cè)定諸如卷煙煙絲及主流煙氣粒相物這樣的復(fù)雜體系中貝母素甲、貝母素乙含量，而且靈敏度高、選擇性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好、操作簡(jiǎn)便快速。
具體實(shí)施例方式以下將結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下做出若干替代或明顯變型，而且性能或用途相同，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例1。a、對(duì)于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對(duì)濕度(60±2)%的條件下平衡48小時(shí)后，測(cè)定50支經(jīng)過平衡卷煙的平均質(zhì)量和平均吸阻，按照平均質(zhì)量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙煙絲中貝母素甲、貝母素乙的提取:取10支卷煙煙絲于250ml的具塞錐形瓶中，加入IOOml甲醇，對(duì)整個(gè)容器稱重，在常溫下，在超聲功率350W和超聲波頻率為70KHz下超聲30min，靜置5min，用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻后過濾待測(cè)。C、對(duì)所得樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析:
1.色譜條件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 μ m, 2.1 X 100mm);流動(dòng)相:A相為0.2%的乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min, A: B (90%: 10%) ；6min,A: B (70%: 30%)；15min,A: B (25%: 75%)；16min,A: B (0%: 100%)；18min,A: B(0%: 100%)； 18.lmin,A: B (90%: 10%)；21min,A: B (90%: 10%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C。2.質(zhì)譜條件:采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式進(jìn)行定量分析，具體參數(shù)如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:550°C ;離子噴霧電壓:4200V。兩種化合物的特征母離子-子離子對(duì)如表I所示。實(shí)施例2。a、對(duì)于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對(duì)濕度(60±2)%的條件下平衡48小時(shí)后，測(cè)定50支經(jīng)過平衡卷煙的平均質(zhì)量和平均吸阻，按照平均質(zhì)量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙及主流煙氣粒相物的捕集與處理:使用一張92mm的玻璃纖維濾片，在(22±1) °C、相對(duì)濕度(60±2)%條件下，用RM200 二十孔道轉(zhuǎn)盤式吸煙機(jī)捕集20支卷煙主流煙氣。抽吸結(jié)束后，空吸2 口，取出捕集器，放置3min后取出濾片，移至250ml錐形瓶中，用移液管準(zhǔn)確加入IOOml甲醇溶液，對(duì)整個(gè)容器稱重，超聲萃取30min，靜置2min，用甲醇補(bǔ)
足重量。C、對(duì)所得樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。1.色譜條件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 μ m, 2.1 X 100mm);流動(dòng)相:A相為0.2%乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min，A: B (90%: 10%) ；6min,A: B (70%: 30%)；15min,A: B (25%: 75%)；16min,A: B (0%: 100%)；18min,A: B(0%: 100%)； 18.lmin,A: B (90%: 10%)；21min,A: B (90%: 10%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ；
2.質(zhì)譜條件:采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式進(jìn)行定量分析，具體參數(shù)如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:5500C ;離子噴霧電壓:4200V。兩種化合物的特征母離子-子離子對(duì)如表I所示。實(shí)施例3。a、對(duì)于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對(duì)濕度(60±2)%的條件下平衡48小時(shí)后，測(cè)定50支經(jīng)過平衡卷煙的平均質(zhì)量和平均吸阻，按照平均質(zhì)量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙煙絲中貝母素甲、貝母素乙的提取:取10支卷煙煙絲于250ml的具塞錐形瓶中，加入IOOml異丙醇，以150轉(zhuǎn)/分震蕩30分鐘，靜置5min后取續(xù)濾液待測(cè)。C、對(duì)所得樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析:
1.色譜條件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 μ m, 2.1 X 100mm);流動(dòng)相:A相為0.2%的乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min, A: B (90%: 10%) ；6min,A: B (70%: 30%)；15min,A: B (25%: 75%)；16min,A: B (0%: 100%)；18min,A: B(0%: 100%)； 18.lmin,A: B (90%: 10%)；21min,A: B (90%: 10%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C。2.質(zhì)譜條件:采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式進(jìn)行定量分析，具體參數(shù)如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:550°C ;離子噴霧電壓:4200V。兩種化合物的特征母離子-子離子對(duì)如表I所示。實(shí)施例4。a、對(duì)于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對(duì)濕度(60±2)%的條件下平衡48小時(shí)后，測(cè)定50支經(jīng)過平衡卷煙的平均質(zhì)量和平均吸阻，按照平均質(zhì)量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙及主流煙氣粒相物的捕集與處理:使用一張92mm的玻璃纖維濾片，在(22±1) °C、相對(duì)濕度(60±2)%條件下，用RM200 二十孔道轉(zhuǎn)盤式吸煙機(jī)捕集20支卷煙主流煙氣。抽吸結(jié)束后，空吸2 口，取出捕集器，放置3min后取出濾片，移至250ml錐形瓶中，用移液管準(zhǔn)確加入IOOml異丙醇，以150轉(zhuǎn)/分震蕩30分鐘，靜置2min后取續(xù)濾液待測(cè)。C、對(duì)所得樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。1.色譜條件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 μ m, 2.1 X 100mm);流動(dòng)相:A相為0.2%乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min，A: B (90%: 10%) ；6min,A: B (70%: 30%)；15min,A: B (25%: 75%)；16min,A: B (0%: 100%)；18min,A: B(0%: 100%)； 18.lmin,A: B (90%: 10%)；21min,A: B (90%: 10%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ；
2.質(zhì)譜條件:采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式進(jìn)行定量分析，具體參數(shù)如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:5500C ;離子噴霧電壓:4200V。兩種化合物的特征母離子-子離子對(duì)如表I所示。表1: 兩種化合物在MRM模式下質(zhì)譜分析參數(shù)。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)對(duì)于卷煙:將卷煙在22土1°C、相對(duì)濕度60±2%的條件下平衡48小時(shí)后，測(cè)定50支經(jīng)過平衡卷煙的平均質(zhì)量和平均吸阻，按照平均質(zhì)量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支； (2)卷煙煙絲中貝母素甲、貝母素乙的提取:取按步驟(I)挑選出的5-20支卷煙煙絲于玻璃容器中，加入50ml-150ml的醇作為提取溶劑，對(duì)整個(gè)容器稱重，提取出貝母素甲、貝母素乙，用醇補(bǔ)足重量，過濾后即可進(jìn)樣分析； (3)對(duì)步驟(2)所得樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于:所述步驟(2)為卷煙主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的提取:在吸煙機(jī)上，使用92mm的玻璃纖維濾片，捕集按步驟(I)挑選出的10-20支卷煙主流煙氣的粒相物，放置3-5min后取出濾片，將濾片置于玻璃容器中，加入50_150ml的醇作為提取溶劑，對(duì)整個(gè)容器稱重，提取出貝母素甲、貝母素乙，用醇補(bǔ)足重量，過濾后即可進(jìn)樣分析。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于:步驟(4)所述超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析中，色譜條件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 μ m，2.1 X 100mm);流動(dòng)相:A 相為添加了 0.1%_0.3%有機(jī)酸I的水溶液，B相為乙腈，梯度洗脫；流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ； 質(zhì)譜條件:根據(jù)貝母素甲、貝母素乙的質(zhì)譜碎裂規(guī)律，選擇串聯(lián)質(zhì)譜的特定掃描模式進(jìn)行分析，具體參數(shù)如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:550°C ;離子噴霧電壓:4200V。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于:步驟(2)所述提取過程為超聲波提取，震蕩提取或浸泡提取。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于:步驟(2)所述提取溶劑中的醇為包括一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)碳原子的一元醇或多元醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，其特征在于:所述色譜條件中流動(dòng)相所用的有機(jī)酸I為包括一個(gè)、二個(gè)或三個(gè)碳原子的一元有機(jī)酸或多元有機(jī)酸；所述的質(zhì)譜條件中特定掃描模式為全掃描模式、中性丟失掃描模式、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式。
全文摘要
測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的方法，涉及測(cè)定卷煙及主流煙氣粒相物中中藥有效成分的方法。包括以下步驟(1)按平均質(zhì)量和平均吸阻挑選煙支；(2)卷煙煙絲中貝母素甲、貝母素乙的提?。?3)卷煙主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙的提??；(4)對(duì)步驟(2)和步驟(3)所得樣品進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。本發(fā)明能夠有效地將卷煙煙絲及主流煙氣粒相物中貝母素甲、貝母素乙完全提取，然后經(jīng)過超高效液相色譜分析，串聯(lián)質(zhì)譜的特定掃描模式分析，從而實(shí)現(xiàn)貝母素甲、貝母素乙的快速、準(zhǔn)確定量分析。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103163231SQ20111042670
公開日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2011年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月19日
發(fā)明者索衛(wèi)國, 郭磊, 廖堃, 蔡繼寶, 洪瑋 申請(qǐng)人:江西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司