專利名稱：一種利用水產(chǎn)品來制備混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的方法及其一種展開劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種磷脂的提取方法，更具體的說，涉及一種利用貝類水產(chǎn)品來制備混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的方法及其一種展開劑。
背景技術(shù)：
磷脂是極性脂肪的一類，其中磷脂包括磷脂酰膽堿(Wiosphatidylcholine，PC)、 磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine, PE)、磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol, PI)、磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserin^PS)以及各種溶血磷脂等。研究發(fā)現(xiàn)磷脂類物質(zhì)對(duì)于心腦血管疾病的預(yù)防有著積極的作用，例如DHA-PS能夠促進(jìn)嬰幼兒的大腦發(fā)育以及緩解阿爾茨默病，因此吸引了眾多科研工作者們對(duì)磷脂的提取、鑒定及純化進(jìn)行研究，但研究過程中往往需要大量資金來購(gòu)買各種磷脂單一標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定性或定量分析，目前國(guó)內(nèi)外同時(shí)含有幾種磷脂的混合標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)品尚沒有出現(xiàn)。另外目前各種磷脂單一標(biāo)準(zhǔn)品基本上是采用酶合成的方法進(jìn)行制備，造成成本偏高。因此，發(fā)明一種成本低、方法簡(jiǎn)單且能夠同時(shí)含有幾種磷脂物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)品意義非常大，不僅僅降低了標(biāo)準(zhǔn)品的生產(chǎn)成本，同時(shí)也方便科學(xué)研究工作的開展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之一在于針對(duì)現(xiàn)有磷脂單一標(biāo)準(zhǔn)品所存在的問題而提供一種利用水產(chǎn)品來制備混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的方法，該方法所制備的混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品包括磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺，適合于對(duì)磷脂的定性研究工作。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題之一在于提供一種用于混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品薄層色譜分析的展開劑。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種利用貝類水產(chǎn)品來制備混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的方法，該方法包括以下步驟(a)將采購(gòu)的貝類去殼、清洗，然后將貝肉水分浙干或者進(jìn)行簡(jiǎn)單吸水處理；(b)將貝肉進(jìn)行破碎勻漿處理，勻漿盡量充分；(c)將貝肉勻漿加入到其重量5 20倍的氯仿-甲醇混合溶液中，在0°C 30°C 下，充分?jǐn)嚢? 4 得貝肉漿液，(d)將攪拌好的貝肉漿液經(jīng)濾膜抽濾，然后將濾液旋轉(zhuǎn)蒸干；(e)將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為2 2 1.8的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取， 靜置分層后，收集氯仿層或?qū)⒙确聦诱舾?，即為含有磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺的溶液狀或固體狀混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品。所述貝類水產(chǎn)品為海水貝或淡水貝。所述海水貝優(yōu)選為小文蛤、大文蛤、牡蠣或蛤蜊。
所述淡水貝優(yōu)選為螺螄、河蛘或中華圓田螺。在所述步驟(C)中，所述氯仿-甲醇混合溶液中，氯仿與甲醇的體積比為2 1。在所述步驟(d)中，所述濾膜規(guī)格為0. 2 μ m或0. 45 μ m。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例中，步驟(d)中，旋轉(zhuǎn)蒸干過程中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的水浴溫度不超過50°C。本發(fā)明的混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品可以用目前比較常規(guī)的薄層色譜分析展開劑將所要分析的磷脂有效分離，如體積比為20 30 20 30 20 30 7-13 6 12的氯仿-乙酸乙酯-正丙醇-甲醇-水的展開劑。但是本發(fā)明優(yōu)選的展開劑為體積比為20 30 20 30 20 30 7-13 6 12的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水的展開劑，更優(yōu)選為體積比為25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水的展開劑。本發(fā)明的混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法，以海水貝和淡水貝為原料，方法簡(jiǎn)單，原料豐富，成本較低，經(jīng)濟(jì)效益較大。該混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品含有磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺，適合科研人員對(duì)磷脂成分的定性分析。


圖1為幾種商業(yè)化磷脂的單一標(biāo)準(zhǔn)品和采用牡蠣為原料按本發(fā)明方法制備的一種混合型磷脂之薄層色譜圖。PI為磷脂酰肌醇，購(gòu)于美國(guó)Sigma公司，PC、PE和PS分別為磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸，均購(gòu)于瑞典Larodan公司；牡蠣來自于廣東。展開劑為體積比為25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為單質(zhì)碘。圖2為采用海水貝類為原料按本發(fā)明方法制備的幾種混合型磷脂之薄層色譜圖。 小文蛤來自江蘇、大文蛤分別來自遼寧和山東、蛤蜊來自江蘇和山東。展開劑為體積比為 25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為10%的磷鉬酸乙醇溶液，顯色溫度為110°C。圖3為采用淡水貝類為原料按本發(fā)明方法制備出的幾種混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品之薄層色譜圖。螺螄、河蛘、中華圓田螺分別來自于上海。展開劑為體積比為 25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為15%的磷鉬酸乙醇溶液，顯色溫度為120°C。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。所述牡蠣來自廣東，所述大文蛤分別來自遼寧和山東，所述小文蛤來自江蘇，所述蛤蜊分別來自江蘇和山東，所述螺螄、河蛘與中華圓田螺均來自上海。實(shí)施例1將牡蠣去殼、清洗，并將肉進(jìn)行浙干處理，稱取25g貝肉，采用高速勻漿機(jī)將其進(jìn)行破碎處理并放于錐形瓶中，加入250ml的2 1氯仿-甲醇溶液攪拌他后經(jīng)0.2 μ m濾膜抽濾，將濾液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為35°C，將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為2 2 1.8 的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取，靜置分層后，收集氯仿層。然后將其進(jìn)行薄層色譜分析，展開劑為25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為單質(zhì)碘。結(jié)果如圖1所示，標(biāo)準(zhǔn)板進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)牡蠣混合磷脂含有磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、 磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺，而且各個(gè)條帶清晰可見。實(shí)施例2將大文蛤(從左到右分別來自遼寧和山東)去殼、清洗，并將肉進(jìn)行浙干處理，稱取30g貝肉，采用高速勻漿機(jī)將其進(jìn)行破碎并放于錐形瓶中，加入250ml的2 1氯仿-甲醇溶液攪拌IOh后經(jīng)0. 2 μ m濾膜抽濾，將濾液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為35°C，將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為2 2 1.8的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取，靜置分層后，收集氯仿層。 然后將其進(jìn)行薄層色譜分析，展開劑為25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為10%的磷鉬酸乙醇溶液，顯色溫度為110°C。結(jié)果如圖2所示，與標(biāo)準(zhǔn)板進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)大文蛤混合磷脂含有磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺，而且各個(gè)條帶清晰可見。實(shí)施例3將蛤蜊(從左到右分別來自江蘇和山東)去殼、清洗，并將肉進(jìn)行浙干處理，稱取 25g貝肉，采用高速勻漿機(jī)將其進(jìn)行破碎并放于錐形瓶中，加入300ml的2 1氯仿-甲醇溶液攪拌1 后經(jīng)0. 45 μ m濾膜進(jìn)行抽濾，將濾液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為45°C，將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為2 2 1.8的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取，靜置分層后，收集氯仿層。然后將其進(jìn)行薄層色譜分析，展開劑為25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為10%的磷鉬酸乙醇溶液，顯色溫度為110°C。結(jié)果如圖2 所示，標(biāo)準(zhǔn)板進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)蛤蜊混合磷脂含有磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺，而且各個(gè)條帶清晰可見。實(shí)施例4將小文蛤去殼、清洗，并將肉進(jìn)行浙干處理，稱取25g貝肉，采用高速勻漿機(jī)將其進(jìn)行破碎并放于錐形瓶中，加入375ml的2 1氯仿-甲醇溶液攪拌IMi后經(jīng)0. 45 μ m 濾膜進(jìn)行抽濾，將濾液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為35°C，將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為 2:2: 1.8的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取，靜置分層后，收集氯仿層。然后將其進(jìn)行薄層色譜分析，展開劑為25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為10%的磷鉬酸乙醇溶液，顯色溫度為110°C。結(jié)果如圖2所示，與標(biāo)準(zhǔn)板進(jìn)行比對(duì)， 發(fā)現(xiàn)小文蛤混合磷脂含有磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺，而且各個(gè)條帶清晰可見。實(shí)施例5將螺螄、中華圓田螺與河蛘去殼、清洗，并將肉進(jìn)行浙干處理，稱取20g貝肉，采用高速勻漿機(jī)將其進(jìn)行破碎并放于錐形瓶中，加入250ml的2 1氯仿-甲醇溶液攪拌20h 后經(jīng)0. 45 μ m濾膜進(jìn)行抽濾，將濾液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，水浴溫度為45°C，將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為2 2 1.8的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取，靜置分層后，收集氯仿層。然后將其進(jìn)行薄層色譜分析，展開劑為25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水，顯色劑為15%的磷鉬酸乙醇溶液，顯色溫度為120°C。結(jié)果如圖3所示，與標(biāo)準(zhǔn)板進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)所挑選每一種淡水貝的混合磷脂均含有磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺，而且各個(gè)條帶清晰可見。
權(quán)利要求
1.一種利用貝類水產(chǎn)品來制備混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的方法，其特征在于，包括以下步驟(a)將采購(gòu)的貝類水產(chǎn)品去殼、清洗，然后將貝肉水分浙干或者進(jìn)行簡(jiǎn)單吸水處理；(b)將貝肉進(jìn)行破碎并進(jìn)行勻漿處理，勻漿盡量充分；(c)將勻漿處理的貝肉加入到其重量5 20倍的氯仿-甲醇混合溶液中，在0°C 30°C 下，充分?jǐn)嚢? 4 得貝肉漿液；(d)將攪拌好的貝肉漿液經(jīng)濾膜抽濾，然后將濾液旋轉(zhuǎn)蒸干；(e)將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為2 2 1.8的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取，靜置分層后，收集氯仿層或?qū)⒙确聦诱舾?，即為含有磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺的溶液狀或固體狀混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述貝類水產(chǎn)品為海水貝或淡水貝。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述海水貝優(yōu)選為小文蛤、大文蛤、牡蠣或蛤蜊。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述淡水貝優(yōu)選為螺螄、河蛘或中華圓田螺。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟(c)中，所述氯仿-甲醇混合溶液中，氯仿與甲醇的體積比為2 1。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟(d)中，所述濾膜規(guī)格為0.2μπι 或 0. 45 μ m0
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(d)中，旋轉(zhuǎn)蒸干過程中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的水浴溫度不超過50°C。
8.一種用于權(quán)利要求1所述的混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品薄層色譜分析的展開劑，其特征在于，所述展開劑為體積比為20 30 20 30 20 30 7-13 6 12的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水的混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的展開劑，其特征在于，所述展開劑為體積比為 25 25 25 10 9的氯仿-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開的一種利用貝類來制備混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品的方法，包括以下步驟(a)將貝類去殼、清洗，然后將貝肉水分瀝干或者進(jìn)行簡(jiǎn)單吸水處理；(b)將貝肉進(jìn)行破碎處理；(c)將搗碎的貝肉加入到其重量5～20倍的氯仿-甲醇混合溶液中，在0℃～30℃下，充分?jǐn)嚢?～48h；(d)將攪拌好的貝肉漿液經(jīng)濾膜抽濾，然后將濾液旋轉(zhuǎn)蒸干；(e)將蒸干后的物質(zhì)采用體積比為2∶2∶1.8的氯仿-甲醇-水進(jìn)行再次提取，靜置分層后，收集氯仿層或?qū)⒙确聦诱舾桑礊楹辛字Ｄ憠A、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺的溶液狀或固體狀混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明以海水貝和淡水貝為原料，方法簡(jiǎn)單，原料豐富，成本較低，經(jīng)濟(jì)效益較大。該混合型磷脂標(biāo)準(zhǔn)品含有磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺，適合科研人員對(duì)磷脂成分的定性分析。
文檔編號(hào)G01N30/94GK102564825SQ20121000175
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月5日
發(fā)明者劉承初, 李家樂, 李閱兵 申請(qǐng)人:上海海洋大學(xué)