專利名稱：一種香青蘭提取物及其指紋圖譜檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制備、藥物分析和藥物代謝技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及中藥提取物的制備，以及通過中藥指紋圖譜方法進行中藥質(zhì)量控制；一方面通過高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜進行多成分全面質(zhì)量控制，另一方面通過鎖定原型吸收成分，進行具體成分的質(zhì)量控制。
背景技術(shù)：
中藥中含有多種化學(xué)成分，并被同時服用到體內(nèi)，產(chǎn)生治療作用。但中藥內(nèi)含化學(xué)成分的極性差距顯著，經(jīng)常是既含有極性很小的化學(xué)成分又含有極性很大的化學(xué)成分，單一溶劑通常難以提取出各類極性成分。所以采用不同極性試劑經(jīng)兩步或多步提取可盡量提取出各類劑型化學(xué)成分，保證提取物中各類成分的充分包含。指紋圖譜技術(shù)在中藥等植物藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用，已成為國內(nèi)外公認的最有效手 段之一。美國FDA在1996年頒布的《FDA關(guān)于植物制品的指南》和2004年的《植物藥產(chǎn)品的行業(yè)指南》中，要求對植物原料、植物藥中間品和植物藥產(chǎn)品以指紋圖譜進行質(zhì)量控制，提出了建設(shè)性意見。英國草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學(xué)會、德國藥用植物學(xué)會也接受色譜指紋圖譜。中國國家食品藥品監(jiān)督管理局于2000年發(fā)布了《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》，明確要求對新申請的中藥注射劑和已上市的中藥注射劑實行指紋圖譜標準，中國國家藥典委員會于2002年發(fā)布了《中藥注射劑色譜指紋圖譜實驗研究技術(shù)指南(試行)》，對色譜指紋圖譜的技術(shù)內(nèi)容提出了指導(dǎo)性意見。化學(xué)成分色譜指紋圖譜，尤其是高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜直接顯示多種具體化學(xué)成分的指紋特征信息，便于從成分整體上進行多成分質(zhì)量控制，在國際上容易獲得認可，因此中藥采用HPLC指紋圖譜進行質(zhì)量控制，是國際認可、技術(shù)合理的有效質(zhì)量控制手段。采用具體某種中藥內(nèi)含成分進行中藥質(zhì)量控制，成分的選擇直接決定中藥質(zhì)量控制水平的高低。最理想的備選成分是藥效明確，機制清楚，原型吸收并達到靶點的長時間、高濃度駐留，但符合此高要求的成分常難明確，所以間接阻礙了中藥質(zhì)量控制水平的提升。但藥效-質(zhì)量關(guān)聯(lián)的質(zhì)控目標要求我們實踐創(chuàng)新方法，逐漸接近目標；所以對中藥多成分中主要通過吸收入血產(chǎn)生藥效的情況開展研究，將可以原型吸收入血作為質(zhì)控成分的篩選原則，可以更接近藥效-質(zhì)量關(guān)聯(lián)的質(zhì)控目標。香青蘭為新疆維吾爾族藥，為唇形科植物香青蘭的干燥地上部分，具有瀉肝火、清胃熱、止血功效，用于頭痛咽痛、黃疸、吐血等癥。香青蘭中的化學(xué)成分與其功效作用密切相關(guān)。其大多以適當形式吸收進入血液循環(huán)系統(tǒng)后，運送到相應(yīng)的作用部位才能產(chǎn)生療效。所以通過提取物指紋圖譜與口服提取物后生物樣品指紋圖譜的比較分析，明確香青蘭中的原型吸收成分作為質(zhì)控具體成分，并結(jié)合香青蘭總體成分指紋圖譜綜合進行質(zhì)量控制，是創(chuàng)新性的質(zhì)控方法
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種香青蘭提取物的制備方法，并運用HPLC指紋圖譜的方法對其進行質(zhì)量控制。為實現(xiàn)此目的，一方面通過高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜進行多成分全面質(zhì)量控制，另一方面通過中藥代謝方法鎖定原型吸收成分，進行具體成分的質(zhì)量控制，使香青蘭的藥效物質(zhì)更加明確。為此，本發(fā)明第一方面提供了制備香青蘭提取物的方法，其包括以下步驟將香青蘭藥材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-90分鐘；再加入水體積1-3倍的95%乙醇繼續(xù)加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收乙醇并濃縮、干燥，即得。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中水提取時，水的用量是藥材重量的5-20倍，例如5-15倍，例如5-10倍。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中水提取時，是以煎煮的方式提取。在一個實施方案中，煎煮的時間為30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。 根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中加乙醇提取時，所用乙醇的量是水體積的1-2倍，優(yōu)選I倍。根據(jù)本發(fā)明第一方面的方法，其中乙醇提取時，是以回流的方式提取。在一個實施方案中，回流的時間為30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。本發(fā)明第二方面提供了一種香青蘭提取物，其是基本上按照本發(fā)明第一方面的方法提取得到的。本發(fā)明第二方面提供了一種香青蘭提取物，其是以香青蘭為藥材經(jīng)如下步驟的方法提取得到的將香青蘭藥材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-90分鐘；再加入水體積1-3倍的95%乙醇繼續(xù)加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收乙醇并濃縮、干燥，即得。根據(jù)本發(fā)明第二方面的香青蘭提取物，其中水提取時，水的用量是藥材重量的5-20倍，例如5-15倍，例如5-10倍。根據(jù)本發(fā)明第二方面的香青蘭提取物，其中水提取時，是以煎煮的方式提取。在一個實施方案中，煎煮的時間為30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。根據(jù)本發(fā)明第二方面的香青蘭提取物，其中加乙醇提取時，所用乙醇的量是水體積的1_2倍，優(yōu)選I倍。根據(jù)本發(fā)明第二方面的香青蘭提取物，其中乙醇提取時，是以回流的方式提取。在一個實施方案中，回流的時間為30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。本發(fā)明第三方面提供了用指紋圖譜方法檢測和評價香青蘭藥材或香青蘭提取物的方法，該方法包括如下步驟(a)取供測試的香青蘭藥材或供測試的香青蘭提取物，所述供測試的香青蘭藥材照本發(fā)明第一方面所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述供測試的香青蘭提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)；(b)另取對照的香青蘭藥材或?qū)φ盏南闱嗵m提取物，所述對照的香青蘭藥材照本發(fā)明第一方面所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述對照的香青蘭提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)；(c)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經(jīng)0. 45 i! m微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用于高效液相色譜(HPLC)分析；
(d)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為0. 1%的磷酸水溶液-乙腈；流速0. 8^1. 2ml/min ;采用200_400nm波長紫外檢測記錄每一波長下成分響應(yīng)值的方式
檢測；梯度洗脫方式為
權(quán)利要求
1.制備香青蘭提取物的方法，其包括以下步驟將香青蘭藥材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-90分鐘；再加入水體積1-3倍的95%乙醇繼續(xù)加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收乙醇并濃縮、干燥，即得。
2.一種香青蘭提取物，其是基本上按照權(quán)利要求I所述的方法提取得到的。
3.用指紋圖譜方法檢測和評價香青蘭藥材或香青蘭提取物的方法，該方法包括如下步驟 (a)取供測試的香青蘭藥材或供測試的香青蘭提取物,所述供測試的香青蘭藥材照本發(fā)明第一方面所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述供測試的香青蘭提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)； (b)另取對照的香青蘭藥材或?qū)φ盏南闱嗵m提取物，所述對照的香青蘭藥材照本發(fā)明第一方面所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述對照的香青蘭提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)； (c)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經(jīng)0. 45 微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用于高效液相色譜(HPLC)分析； (d)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為0.1%的磷酸水溶液-乙腈；流速0. 8^1. 2ml/min ;采用200-400nm波長紫外檢測記錄每一波長下成分響應(yīng)值的方式檢測；梯度洗脫方式為
4.用指紋圖譜方法檢測和評價香青蘭藥材或香青蘭提取物的方法，該方法包括如下步驟 (i)取供測試的香青蘭藥材或供測試的香青蘭提取物，所述供測試的香青蘭藥材照本發(fā)明第一方面所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述供測試的香青蘭提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)； (ii)另取對照的香青蘭藥材或?qū)φ盏南闱嗵m提取物，所述對照的香青蘭藥材照本發(fā)明第一方面所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述對照的香青蘭提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)； (iii)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經(jīng)0. 45 y m微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用于高效液相色譜(HPLC)分析； (iv)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為0.1%的磷酸水溶液-乙腈；流速0. 8^1. 2ml/min ;采用200_400nm波長紫外檢測記錄每一波長下成分響應(yīng)值的方式檢測；梯度洗脫方式為
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中 所述 C18 色譜柱是 Thermo scientific 0DS-2 Hypersil C18 色譜柱;所述C18色譜柱是Thermo scientific 0DS-2 Hypersil C18色譜柱，規(guī)格為·4.6mmX 250mm, 5 u m ； 其中(iv)項所述流動相的流速為lml/min ； 其中(iv)項所述波長為277nm ； 其中(iv)項中所述色譜柱的柱溫控制在30°C ;和/或 其中步驟(vii)中所述哺乳動物選自人、大鼠、小鼠、狗、猴等。
6.以原型吸收成分和/或代謝成分為指標用指紋圖譜方法檢測和評價香青蘭藥材或香青蘭提取物的方法，該方法包括如下步驟 (1)取供測試的香青蘭藥材或供測試的香青蘭提取物，所述供測試的香青蘭藥材照權(quán)利要求I所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述供測試的香青蘭提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)； (2)另取對照的香青蘭藥材或?qū)φ盏南闱嗵m提取物，所述對照的香青蘭藥材照權(quán)利要求I所述方法處理得到香青蘭提取物(由此獲得的香青蘭提取物或者前述對照的香青蘭提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)； (3)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經(jīng)0. 45 微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用于高效液相色譜(HPLC)分析； (4)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為0.1%的磷酸水溶液-乙腈；流速0. 8^1. 2ml/min ;采用200-400nm波長紫外檢測記錄每一波長下成分響應(yīng)值的方式檢測；梯度洗脫方式為
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中 所述 C18 色譜柱是 Thermo scientific 0DS-2 Hypersil C18 色譜柱; 所述C18色譜柱是Thermo scientific 0DS-2 Hypersil C18色譜柱，規(guī)格為4.6mmX 250mm, 5 u m ； 其中(4)項所述流動相的流速為lml/min ； 其中⑷項所述波長為277nm ;和/或 其中(4)項中所述色譜柱的柱溫控制在30°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中步驟(7)中所述哺乳動物選自人、大鼠、小鼠、狗、猴等。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中步驟(7)中所述生物樣品選自血樣、尿樣及唾液樣品。
10.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中步驟(10)中獲得I個原型吸收成分和2個代謝成分；在一個實施方案中，所述I個原型吸收成分的保留時間約為21. Omin ;在一個實施方案中，所述2個代謝成分的保留時間分別約為21. 5min和25. 3min。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種香青蘭提取物及其指紋圖譜檢測方法。具體地，制備香青蘭提取物的方法包括以下步驟將香青蘭藥材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-90分鐘；再加入水體積1-3倍的95%乙醇繼續(xù)加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收乙醇并濃縮、干燥，即得。還提供了由該方法制備得到的香青蘭提取物，用指紋圖譜方法檢測和評價香青蘭藥材或香青蘭提取物的方法，用指紋圖譜方法檢測和評價香青蘭藥材或香青蘭提取物的方法，以及以原型吸收成分和/或代謝成分為指標用指紋圖譜方法檢測和評價香青蘭藥材或香青蘭提取物的方法。本發(fā)明方法可以有效地用于香青蘭或其提取物的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/88GK102707003SQ20121017999
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者劉洋, 方敏, 李錚, 汪國鵬, 潘艷麗, 胡宇馳 申請人:北京市藥品檢驗所