一種毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。 技術(shù)背景
[0002] 藥用鉤藤為茜草科鉤藤屬常綠藤本植物，攀援狀灌木，以帶鉤的莖枝入藥，它具有 清熱平肝、息風定驚功效，現(xiàn)代藥理實驗還證明鉤藤有降壓作用，因此具有很高的藥用價 值。2010版中國藥典共收載有5個種，分別為:鉤藤1]]1〇31'11丨3 1'11711(311(^7113(1丨9.)1丨9.61 Havil·、大葉鉤藤Uncarnia macrophylla Wail、毛鉤藤Uncarnia hirsute Havil·、華鉤藤 Uncarnia sinensis(01iv. )Havil和無柄果鉤藤Uncarnia sessilifructus Roxb〇雖然都 被用于臨床，然而由于種的不同，其中的化學成分組成就存在一定差異。藥用鉤藤在我國多 地均有生長，主要分布于貴州的有毛鉤藤、鉤藤和華鉤藤三個種。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，文獻"鉤藤飲片HPLC指紋圖譜研究"（譚超元等，中國實驗方劑學雜志 第18卷第1期，2012年1月）一文中公開了以流動相乙腈(A)-0.385 %乙酸銨-冰乙酸水溶液 (B)梯度洗脫（0 ~10min，15% ~27%A;10min ~40min，27% ~35%A)、檢測波長 245nm 的方 法建立鉤藤飲片的HPLC指紋圖譜;文獻"黔產(chǎn)鉤藤HPLC指紋圖譜的研究"（王克英等，中國醫(yī) 藥指南第10卷第35期，2012年12月）一文中公開以流動相甲醇(A)-0.05%氨水(B)梯度洗脫 (0 ~45min，70% ~45%B;45min ~75min，45% ~35%B;75min ~90min，35% ~30%B)、流速 1. OmL/min、檢測波長245nm的方法建立鉤藤的HPLC指紋圖譜;文獻"鉤藤生物堿HPLC指紋圖 譜構(gòu)建及不同基原種鉤藤藥材的鑒別"（黃樣增等，中藥材2014年02期，2012年12月）一文中 公開以流動相乙腈(A)-甲醇(B)-水（lOmmol/L三乙胺用磷酸調(diào)pH 7.5)(C)梯度洗脫（0~ 15min，5-35%A，45%~5%B;15min~25min，35-30%A，5%~25%B;25min~45min，30-30%八，25%~45%8;4511^11~5211^11，30-0%八，45%~95%8)、流速1.01111711^11、檢測波長 245nm的方法建立鉤藤的HPLC指紋圖譜；文獻"鉤藤的HPLC指紋圖譜研究"（黃艷萍等，中藥 新藥與臨床藥理第21卷第4期，2010年7月）一文中公開了以流動相甲醇(A)-lOmmol磷酸二 氛錢溶液(B)梯度洗脫（0~5min，80%B;5min ~50min，80% ~40%B;50min ~65min，40% ~ 90%B)、流速1.0mL/min、檢測波長254nm的方法建立不同產(chǎn)地鉤藤的HPLC指紋圖譜;這些檢 測方法雖然在一定程度上提高了鉤藤的質(zhì)量控制標準，但有的存在洗脫程序復雜、操作時 間長等缺點，另外對不同種的藥用鉤藤還需要區(qū)別對待，且不同時期采收的毛鉤藤藥材，其 分析評價還有待研究;為了更好的控制毛鉤藤藥材及其產(chǎn)品的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更 好的指導生產(chǎn)，使其從藥材采收、加工等各個環(huán)節(jié)的控制更加嚴格合理，使消費者能全面認 識產(chǎn)品質(zhì)地，需要不斷研究和摸索出更有利于藥材及其產(chǎn)品鑒別和質(zhì)量檢測的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于，提供一種毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法。這種方法針對如下藥 材及產(chǎn)品向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等，以便更好的 控制該藥材和產(chǎn)品的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導藥材的采收、加工、生產(chǎn)，使 消費者能全面認識藥材及產(chǎn)品質(zhì)地，所針對的藥材和產(chǎn)品為：
[0005] 毛鉤藤藥材，由毛鉤藤藥材單獨制備而成的制劑產(chǎn)品，包括藥品、保健品；制劑劑 型包括口服制劑、注射制劑、外用制劑、經(jīng)皮吸收制劑等。
[0006] 本發(fā)明是這樣構(gòu)成的：
[0007] 毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，包括以下內(nèi)容：
[0008] (1)供試品溶液的制備:取待測毛鉤藤樣品，加氨水浸泡，再加入三氯甲烷，甲醇， 超聲提取，取出，放冷，過濾，濾液置于水浴上揮干，殘渣用甲醇溶解，搖勻，微孔濾膜過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0009] (2)色譜條件:色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料:流動相A為乙腈，流動相 B為0.1 %~0.5 %氨水溶液，梯度洗脫，流速為0.8~1.2ml/min、檢測波長為254~260nm、柱 溫為20-30°(：，記錄時間為50-801^11 ;
[0010] (3)標準指紋圖譜的建立：以上述方法作為建立毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段;依 據(jù)10批或10批以上樣品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留 時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有8~12 個；
[0011] (4)以（1)、（2)所述方法作為待測毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的 指紋圖譜；
[0012] (5)將待測毛鉤藤的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求的部分 或全部：
[0013] I.計算待測毛鉤藤的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90~1.00;
[0014] II.待測毛鉤藤指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的20%;
[0015] III.待測毛鉤藤指紋圖譜中有5%~50%的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中 各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于± 50 %。
[0016] 其中，所述步驟（1)中毛鉤藤樣品可以為毛鉤藤藥材，還可以為毛鉤藤單獨制成 的、藥品或保健品；所述藥材樣品通過陰干后切段、粉碎過60目篩、經(jīng)45°C烘干至恒重的方 法制備。
[0017] 其中，所述步驟（2)中梯度洗脫參數(shù)為：0~45min，72 %~45 %B; 45min~60min， 45% ~37%B〇
[0018] 其中，所述步驟(3)中10批或10批以上樣品可以為每月采收一次、連續(xù)采收12個月 及以上的毛鉤藤藥材，還可以為毛鉤藤單獨制成的藥品或保健品，連續(xù)或不連續(xù)生產(chǎn)10批 及以上。
[0019] 進一步地，所述毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，包括以下內(nèi)容：
[0020] (1)供試品溶液的制備:取含毛鉤藤為2.0g的待測毛鉤藤樣品粉末，加入l-3mL氨 水浸泡20-40min，再加入三氯甲烷20-30mL，甲醇2-8ml，超聲提取45-75min，取出，放冷，過 濾，濾液置于50-60°C水浴上揮干，殘渣用甲醇溶解于10mL量瓶中并定容至刻度，搖勻，用 0.45μπι微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0021 ] (2)色譜條件:色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料:流動相Α為乙腈，流動相 B為0 · 1 %~0 · 3%氨水溶液，梯度洗脫，參數(shù)為：0~45min，72%~45%B; 45min~60min， 45%~37%8，流速為0.8~1.21111/1^11、檢測波長為254~26011111、柱溫為20-30°(：，記錄時間 為50_80min;
[0022] (3)標準指紋圖譜的建立：以上述方法作為建立毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段;依 據(jù)10批或10批以上樣品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留 時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有8~12 個；
[0023] (4)以（1)、（2)所述方法作為待測毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的 指紋圖譜；
[0024] (5)將待測毛鉤藤的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求的部分 或全部：
[0025] I.計算待測毛鉤藤的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.90~1.00;
[0026] II.待測毛鉤藤指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10%;
[0027] III.待測毛鉤藤指紋圖譜中有5%~50%的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中 各共有峰面積的比值比較，其差值不得大于± 30 %。
[0028]更進一步地，所述毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，