專利名稱：鳶尾科紅蔥屬植物紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物的質(zhì)量檢測方法，尤其涉及一種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
紅蔥，為鳶尾科植物紅蔥Eleutherine plicata Herb.的全草,原產(chǎn)西印度群島，在我國分布于廣西、云南等地，為民間藥用植物。《中華本草》載其有清熱涼血、活血通經(jīng)、消腫解毒的作用。主治吐血、咯血、痢疾、經(jīng)閉腹痛、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、瘡癤腫毒。民間本草載其可用于月經(jīng)過多，紅崩，衄血，胃腸出血，外傷出血，痢疾，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，跌打腫痛，瘡毒；傣醫(yī)將鱗莖用于刀傷，癲癇抽搐，關(guān)節(jié)疼痛，頭暈，心慌，胸悶嘔吐，全身疲乏無力。結(jié)合廣西當(dāng)?shù)孛耖g運用，概括紅蔥的功效作用集中在①婦科疾病:經(jīng)閉腹痛、月經(jīng)過多胃腸道疾病:胃腸出血、痢疾；③關(guān)節(jié)病變:風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、跌打腫痛。根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究，紅蔥具有降血脂、降血糖、抗氧化和抗誘變、抗菌、増加冠狀動脈血流量、抑制HIV、抑制人體拓撲異構(gòu)酶II等多種藥理活性。根據(jù)中國藥典2010版的內(nèi)容，沒有針對紅蔥及其提取物的質(zhì)量標準。由于紅蔥在臨床上具有多方面的功效，因此，建立紅蔥及紅蔥提取物質(zhì)量控制方法具有重要的意義。本發(fā)明的目的是從性狀鑒別、薄層鑒別、含量測定等多個方面對紅蔥以及其提取物進行綜合、全面的質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在干，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供ー種簡便、快捷的紅蔥及紅蔥提取物的質(zhì)量檢測方法，以有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，從而保證臨床療效。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法包括紅蔥的性狀鑒別、紅蔥以及紅蔥提取物的薄層鑒別和含量測定方法，其中含量的測定是對其所含的黃酮類化合物、蒽醌類化合物的測定。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:紅蔥藥材性狀鑒別:呈長圓狀卵形或長橢圓形。鱗莖長卵圓形，鱗片肥厚，紫紅色，無膜質(zhì)包被。根柔嫩，紅褐色。葉片卷曲，完整葉片展開后呈寬披針形或?qū)挆l形，長10-15cm，寬0.5-1.5cm,頂端漸尖，縱脈平行。氣微，味淡。薄層鑒別方法:(I)取紅蔥及其提取物粉末適量，加30-90%こ醇加熱回流，過濾，濾液蒸至無醇味，用石油醚振搖提取1-3次，合并石油醚液，水液備用。石油醚液水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液點于硅膠G薄層板上，以石油醚-丙酮(7 12: I
5)展開，取出，晾干，噴以5-20%硫酸こ醇溶液，在90 120°C加熱至斑點顯色清晰。置365nm或254nm的紫外光燈下檢視，可呈現(xiàn)9個明顯的熒光斑點。(2)取鑒別(I)項下水液，繼續(xù)用有機溶劑振搖提取1-3次，合并溶劑，水浴蒸干。殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液，點于硅膠G薄層板上，以石油醚-こ酸こ酷-丙酮-甲酸(3 8: I 5: 0.2 0.8: 0.1 0.5)展開，取出，晾干。置365nm或254nm的紫外光燈下檢視，可呈現(xiàn)6個明顯的熒光斑點。優(yōu)選的檢視波長為365nm。定性鑒別⑴項下提取時所用的石油醚優(yōu)選為沸程在30-60°C的石油醚。定性鑒別(2)項下提取時所用的有機溶劑優(yōu)選為三氯甲烷。定性鑒別⑴及⑵項下展開時所用的石油醚優(yōu)選為沸程在60-90°C的石油醚。所述硫酸こ醇溶液的濃度優(yōu)選為10%?？傸S酮紫外分光光度含量測定法(I)對照品溶液的制備:取蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成蘆丁對照品溶液。(2)供試品溶液的制備:取紅蔥或紅蔥提取物適量，精密稱定，置具塞容器中，カロ入30-95 %的こ醇溶液20-100ml，稱定重量，加熱回流0.5_3h，放冷，稱重，溶劑補足重量，搖勻，過濾。取濾液l_3ml于蒸發(fā)皿中，加聚酰胺粉適量吸附，水浴揮去溶剤，井置于層析柱上。用甲苯洗脫，再用甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，定容，作為供試品。(3)標準曲線的制備:精密量取一系列不同濃度的蘆丁標準品溶液，置于比色皿中，在波長200-700nm內(nèi)選擇吸收波長，測定吸光度，并以吸光度(A)為縱坐標，溶液濃度(C)為橫坐標,繪制標準曲線。(4)精密量取供試品溶液，置于比色皿中測定吸光度值。根據(jù)標準曲線，計算紅蔥及(或)紅蔥提取物中總黃酮含量。所述的蘆丁在120°C烘干至恒重。對照品溶液的制備優(yōu)選:制成每ImL含0.1mg的溶液；總蒽醌紫外分光光度含量測定法(I)對照品溶液的制備:取大黃酸對照品適量，精密稱定，加95%こ醇溶解，制成總蒽醌對照品溶液。(2)供試品溶液的制備:取紅蔥或紅蔥提取物適量，精密稱定，置圓底燒瓶中，カロ入30-95%的こ醇溶液20-100ml，加熱回流0.5_3h，放冷，過濾，定容，作為供試品。(3)標準曲線的制備:精密量取一系列不同濃度的大黃酸標準品溶液，加0.5%醋酸鎂-甲醇顯色，置于比色皿中，在波長200-700nm內(nèi)選擇吸收波長，測定吸光度，并以吸光度(A)為縱坐標，溶液濃度(C)為橫坐標，繪制標準曲線。(4)精密量取供試品溶液，稀釋，加0.5%醋酸鎂-甲醇顯色，置于比色皿中測定吸光度值。根據(jù)標準曲線，計算紅蔥及(或)紅蔥提取物中總蒽醌含量。所述的大黃酸在120°C烘干至恒重。對照品溶液的制備優(yōu)選:制成每Im L含0.614mg的溶液；紅蔥及其提取物優(yōu)選的鑒別方法包括如下:(I)取紅蔥及其提取物粉末，加50-70%こ醇加熱回流提取，過濾，濾液蒸至無醇味，用石油醚(30-60°C )振搖提取1-3次，合并石油醚液，水液備用。石油醚液水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液點于硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90°C )_丙酮(7-12: 1-5)展開，取出，晾干，噴以10%硫酸こ醇溶液，在100-110°C加熱至斑點顯色清晰。置365nm的紫外光燈下檢視。
(2)取鑒別(I)項下水液，繼續(xù)用三氯甲烷振搖提取1-3次，合并溶劑，水浴蒸干。殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液，點于硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90°C )_こ酸こ酷-丙酮-甲酸(3-8: 1-5: 0.2-0.8: 0.1-0.5)展開，取出，晾干。置365nm的紫外光燈下檢視。紅蔥及其提取物優(yōu)選的總黃酮紫外分光光度含量測定法包括如下:(I)對照品溶液的制備:取在120°C下烘干至恒重的蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每ImL含0.1mg蘆丁的對照品溶液。(2)供試品溶液的制備:取紅蔥或紅蔥提取物約l_3g，精密稱定，置具塞容器中，加入50-80%的こ醇溶液40-60ml，稱定重量，加熱回流l_2h，放冷，稱重，溶劑補足重量。搖勻，取上清液l_5ml于蒸發(fā)皿中，加聚酰胺粉適量吸附，水浴揮去溶剤，井置于層析柱上。用甲苯洗脫，再用甲醇洗脫，收集洗脫液，定容，作為供試品。(3)標準曲線的制備:精密量取一系列不同濃度的蘆丁標準品溶液，置于比色皿中，在波長200-400nm內(nèi)選擇吸收波長，測定吸光度，并以吸光度(A)為縱坐標，溶液濃度(C)為橫坐標,繪制標準曲線。(4)精密量取供試品溶液，置于比色皿中測定吸光度值。根據(jù)標準曲線，計算紅蔥及(或)紅蔥提取物中總黃酮的含量。紅蔥及其提取物優(yōu)選的總蒽醌紫外分光光度含量測定法包括如下:(I)對照品溶液的制備:取在120°C下烘干至恒重的大黃酸對照品適量，精密稱定，加95%溶解，制成每ImL含0.614mg蘆丁的對照品溶液。(2)供試品溶液的制備:取紅蔥或紅蔥提取物約10_15g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入50-80%的こ醇溶液80-100ml，，加熱回流l_2h，過濾，定容到80_100ml，作為供試品。(3)標準曲線的制備:精密量取一系列不同濃度的大黃酸標準品溶液，加0.5%醋酸鎂-甲醇顯色，置于比色皿中，在波長200-700nm內(nèi)選擇吸收波長，測定吸光度，并以吸光度(A)為縱坐標，溶液濃度(C)為橫坐標，繪制標準曲線。(4)精密量取供試品溶液，稀釋18-22倍，加0.5%醋酸鎂-甲醇顯色，置于比色皿中測定吸光度值。根據(jù)標準曲線，計算紅蔥及(或)紅蔥提取物中總蒽醌含量。本發(fā)明相對現(xiàn)在技術(shù)的有益效果是:本發(fā)明從性狀鑒別、薄層鑒別、含量測定等多個方面對紅蔥以及其提取物進行綜合質(zhì)量控制。本方法質(zhì)量控制方法重現(xiàn)性好、檢測成分低、精密度高、可操作性強，從而保證了紅蔥及其提取物的質(zhì)量以及臨床療效。


圖1是紅蔥藥材2是紅蔥藥材石油醚提取TLC3是紅蔥藥材三氯甲烷提取TLC4是蘆丁以及紅蔥提取物紫外掃描5是紅蔥提取物石油醚提取TLC6是紅蔥提取物三氯甲烷提取TLC圖
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細說明。實施例1紅蔥藥材性狀以及薄層鑒別性狀本品呈長圓狀卵形或長橢圓形。鱗莖長卵圓形，鱗片肥厚，紫紅色，無膜質(zhì)包被。根柔嫩，紅褐色。葉片卷曲，完整葉片展開后呈寬披針形或?qū)挆l形，長10-15cm，寬0.5-1.5cm，頂端漸尖，縱脈平行。氣微，味淡。結(jié)果見說明書附圖中的圖1。鑒別(I)取紅蔥藥材粉末1.5g，加60%こ醇溶液50ml，加熱回流提取I小時，濾過，濾液蒸至無醇味，用石油醚(30 60°C)振搖提取3次，毎次20ml，合并石油醚液，水液備用，石油醚液水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液3iU，點于硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_丙酮(9: 2)為展開劑(對槽放Iml甲酸)，預(yù)飽和10分鐘，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果見說明書附圖中的圖2。(2)取鑒別(I)項下水液，繼續(xù)用三氯甲烷振搖提取3次，毎次20ml，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液3 yl，點于硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C )_こ酸こ酯-丙酮-甲酸(6: 3: 0.5: 0.1)為展開齊U，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果見說明書附圖中的圖3。實施例2紅蔥提取物薄層鑒別取紅蔥，加8倍量70%こ醇提取二次，每次I小時，合并提取液，濾過，濾液回收こ醇，濃縮至相對密度為1.30 1.40 (600C )的稠膏，真空干燥(60 70°C，-0.08mpa)，干膏粉碎成細粉,即得。本方法所述的質(zhì)量控制方法包括:鑒別⑴取紅蔥提取物1.5g，研細，加60%こ醇溶液50ml，加熱回流I小時，濾過，濾液蒸至無醇味，用石油醚(30 60°C)振搖提取3次，毎次20ml，合并石油醚液，水液備用，石油醚液水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取紅蔥藥材1.5g，カロ60%こ醇溶液50ml，同法制成紅蔥對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各3 u 1，點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C)_丙酮(9: 2)為展開劑(對槽放Iml甲酸)，預(yù)飽和10分鐘，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸こ醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點。結(jié)果見說明書附圖中的圖5。(2)?、彭椣滤海^續(xù)用三氯甲烷振搖提取3次，毎次20ml，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取(I)項下紅蔥藥材水液，同法制成紅蔥對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各3 ii I,點于同一娃膠G薄層板上，以石油醚(60 90°C )-こ酸こ酯-丙酮-甲酸(6: 3: 0.5: 0.1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顔色的斑點。結(jié)果見說明書附圖中的圖6。實施例3紅蔥藥材含量測定1、儀器與試藥(I)儀器:島津UV-2550型紫外分光光度計。

(2)試藥:試劑均為析純。蘆丁對照品(批號:10080-200707)購于中國藥品生物制品檢定所。2、實驗條件(I)對照品溶液的制備精密稱取在120°C干燥至恒重的蘆丁對照品5mg，置50ml量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，即得。(2)樣品溶液的制備取紅蔥藥材粉末約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60 %こ醇溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流I小時，放冷，再稱定重量，用60%こ醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，吸取續(xù)濾液2ml，于蒸發(fā)皿中，加Ig聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去こ醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20ml甲苯洗脫，棄去甲苯液，后用甲醇洗脫，收集洗脫液，并用甲醇定容至25ml，搖勻，作為樣品溶液。(3)最大吸收波長的選擇取對照品溶液與樣品溶液在200-700nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果二者在360±2nm處有最大吸收。結(jié)果見說明書附圖中的圖4。(4)線性關(guān)系考察精密吸取(I)項下對照品溶液(每Iml 含蘆丁 0.1078mg)0.5、1、1.5、2、2.5,3ml,分別置于IOmL容量瓶中，分別加甲醇定容至刻度，搖勻。以甲醇為空白，按2010年版《中國藥典》(一部)附錄VA中紫外分光光度法，在360nm波長處測定吸收度。以吸收度(A)為縱坐標，濃度(C)為橫坐標做線性回歸，得回歸方程為=A = 0.02843-0.03108 (R2 = 0.99974)。結(jié)果表明，蘆丁在5.39 3 2 .34 ug* mL-1濃度范圍內(nèi)與吸收度呈良好線性關(guān)系。(5)精密度試驗取同一樣品溶液，重復(fù)測定吸光度6次，其RSD = 0.42 %，說明方法精密度良好。結(jié)果見表I。表I精密度試驗
權(quán)利要求
1.一種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:通過性狀鑒別、薄層鑒別紅蔥不同極性提取物、測定紅蔥及其紅蔥提取物中總黃酮、總蒽醌含量的方法，控制紅蔥及其提取物的質(zhì)量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種紅蔥的質(zhì)量檢測方法，其特征在于包括下列的性狀鑒另Ij:呈長圓狀卵形或長橢圓形。鱗莖長卵圓形，鱗片肥厚，紫紅色，無膜質(zhì)包被。根柔嫩，紅褐色。葉片卷曲，完整葉片展開后呈寬披針形或?qū)挆l形，長10-15cm，寬0.5-1.5cm,頂端漸尖，縱脈平行。氣微，味淡。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于包括下列的薄層鑒別方法: (1)取紅蔥及其提取物粉末，加30-90%こ醇加熱回流，過濾，濾液蒸至無醇味，用石油醚振搖提取1-3次，合并石油醚液，水液備用。石油醚液水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液點于硅膠G薄層板上，以比例為7 12: I 5的石油醚-丙酮展開，取出，晾干，噴以5-20%硫酸こ醇溶液，在90 120°C加熱至斑點顯色清晰。置365nm或254nm的紫外光燈下檢視，可呈現(xiàn)9個明顯的熒光斑點。
(2)取鑒別(I)項下水液，繼續(xù)用有機溶劑振搖提取1-3次，合并溶劑，水浴蒸干。殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。吸取上述溶液，點于硅膠G薄層板上，以比例為3 8:1 5: 0.2 0.8: 0.1 0.5的石油醚-こ酸こ酷-丙酮-甲酸展開,取出，晾干。置365nm或254nm的紫外光燈下檢視，可呈現(xiàn)6個明顯的熒光斑點。
4.根據(jù)權(quán)利要求書2所述的ー種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所用的石油醚為60 90°C或30 60°C或90 120°C的石油醚。
5.根據(jù)權(quán)利要求書2所述的ー種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于所用的有機溶劑選用三氯甲烷、ニ氯甲烷等低極性有機溶剤。
6.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的ー種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，測定紅蔥及其提取物中總黃酮的含量。
其內(nèi)容包括: 1)、對照品溶液的制備:取蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成蘆丁對照品溶液。
2)、供試品溶液的制備:取紅蔥或紅蔥提取物適量，精密稱定，置具塞容器中，加入30-95 %的こ醇溶液20-100ml，稱定重量，加熱回流0.5_3h，放冷，稱重，用溶劑補足重量。搖勻，取上清液l_5ml于蒸發(fā)皿中，加聚酰胺粉適量吸附，水浴揮去溶剤，井置于層析柱上。用甲苯洗脫，再用甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，定容，作為供試品。
3)、標準曲線的制備:精密量取一系列不同濃度的蘆丁標準品溶液，置于比色皿中，在波長200-700nm內(nèi)選擇吸收波長，測定吸光度，并以吸光度為縱坐標，溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
4)、精密量取供試品溶液，置于比色皿中測定吸光度值。根據(jù)標準曲線，計算紅蔥及/或紅蔥提取物中總黃酮含量。
7.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的ー種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于采用紫外分光光度法，以大黃酸為對照品，測定紅蔥及其提取物中總蒽醌的含量。其內(nèi)容包括: I)、對照品溶液的制備:取大黃酸對照品適量， 精密稱定，加95%こ醇溶解，制成大黃酸對照品溶液。
2)、供試品溶液的制備:取紅蔥或紅蔥提取物適量，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入30-95%的こ醇溶液20-100ml，加熱回流0.5_3h，放冷，過濾，用溶劑定容。
3)、標準曲線的制備:精密量取一系列不同濃度的大黃酸標準品溶液，加0.5%醋酸鎂-甲醇顯色，置于比色皿中，在波長200-700nm內(nèi)選擇吸收波長，測定吸光度，并以吸光度為縱坐標，溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
4)、精密量取供試品溶液，稀釋，加0.5%醋酸鎂-甲醇顯色，置于比色皿中測定吸光度值。根據(jù)標準曲線，計算紅蔥及/或紅蔥提取物中總蒽醌的含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的ー種紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法中所述的紅蔥提取物包括:紅蔥提取后，所得的提取物按常規(guī)的提取物エ藝制成臨床可接受的 任意劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種關(guān)于紅蔥及其提取物的質(zhì)量檢測方法，該方法包括紅蔥的性狀鑒別、紅蔥及其提取物的薄層鑒別和總黃酮、總蒽醌的含量測定方法。具體是(1)性狀紅蔥的性狀、顏色、大小、氣味等方面進行說明。(2)薄層鑒別對藥材及其提取物的不同極性部位進行提取，用不同的展開體系對極性部位在硅膠板上展開。(3)含量測定包括對紅蔥及其提取物中總黃酮、總蒽醌的含量測定方法。采用紫外分光光度法，分別以蘆丁、大黃酸為對照品，紅蔥或紅蔥提取物為供試品，測定供試品的含量。本發(fā)明的優(yōu)點是方法簡便快捷、檢測方法針對性強；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好；準確度高。本發(fā)明可用于藥材或提取物的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/90GK103091445SQ20121030268
公開日2013年5月8日 申請日期2012年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月23日
發(fā)明者嚴超群, 王紅星 申請人:廣州白云華南生物科技有限公司