專利名稱：脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
脊髓灰質(zhì)炎病毒M I型IgG抗體檢測卡技術(shù)領(lǐng)域[0001]本實用新型屬于免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于快速檢測接種脊髓灰質(zhì)炎 疫苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗脊髓灰質(zhì)炎病毒的IgG抗體的脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢 測卡。
背景技術(shù)：
[0002]目前用于檢測接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗 體多采用酶聯(lián)免疫法(市售試劑盒，脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體測定試劑盒(酶聯(lián)免疫法)), 該方法是將免疫接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗的人血清進行稀釋后，加到包被脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原 的微孔板中，37°C孵育I小時后，洗滌數(shù)次，加抗人IgG酶標記物，再經(jīng)過洗滌、加底物顯色， 根據(jù)樣品OD值的大小，判斷是人血清中是否含有抗脊髓灰質(zhì)炎病毒的IgG抗體。[0003]該方法存在的技術(shù)問題1、操作繁瑣試驗步驟較多。待檢血清或血漿需進行稀 釋，前兩個反應(yīng)步驟需進行數(shù)次洗滌，最后酶標儀讀取OD值；2、耗時長試驗過程中三個步 驟(加樣品、酶標物、底物)均需37°C孵育，加上洗滌時間，整個試驗需要耗時3小時。實用新型內(nèi)容[0004]本實用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測 卡，它能快速檢測接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗 體,檢測操作簡便,生產(chǎn)成本低。[0005]本實用新型解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種脊髓灰質(zhì)炎病毒III型 IgG抗體檢測卡，包括襯墊、樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊；所述樣品墊、玻璃纖維 墊、層析膜和吸收墊以水平方向順序相接并固定在所述襯墊上；并且所述玻璃纖維墊上噴 涂有帶標記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜上設(shè)置由III型脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原構(gòu)成的試驗 線、以及與所述試驗線平行的對照線；并且所述試驗線位于樣品墊和對照線之間。[0006]脊髓灰質(zhì)炎(poliomyelitis)是由脊髓灰質(zhì)炎病毒(poliovirus)感染所引起的 一類急性傳染病。脊髓灰質(zhì)炎病毒有三個不同的血清型，即I型、II型及III型，而每個型 別又具有不同的病毒株。脊髓灰質(zhì)炎疫苗是用三個型別的代表毒株經(jīng)過減毒制成的混合活 疫苗。[0007]所述試驗線是將純化的III型脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原固定在所述層析膜上形成。[0008]上述技術(shù)方案中，所述樣品墊和吸收墊均采用具有吸水性能的材料制備而成，可 以均為市售的濾紙制成，優(yōu)選吸水性能較強的定性濾紙，這樣利于檢測，增加檢測速度。所 述層析膜為市售硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜又稱NC膜，在膠體金試紙中用做C/T線的承 載體，同時也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。米用的硝酸纖維素膜型號135s、170s或180s (以秒為 單位的定義每4cm膜，水的層析時間是多少秒)。玻璃纖維墊是玻璃纖維制品的一種。玻 璃纖維是一種性能優(yōu)異的無機非金屬材料。英文原名為Glassfiber，成分為二氧化硅、氧 化鋁、氧化鈣、氧化硼、氧化鎂、氧化鈉等。它是以玻璃球或廢舊玻璃為原料經(jīng)高溫熔制、拉絲、絡(luò)紗、織布等工藝，最后形成各類產(chǎn)品，玻璃纖維單絲直徑從幾個微米到二十幾個微米， 相當于一根頭發(fā)絲的1/20-1/50，每束纖維原絲都有數(shù)百根甚至上千根單絲組成，通常作為 復(fù)材料中的增強材料、電絕緣材料和絕熱保溫材料，電路基板等，廣泛用于國民經(jīng)濟各個領(lǐng) 域。[0009]所述玻璃纖維墊上均勻噴涂有帶標記的彩色膠乳顆粒，彩色膠乳顆粒一般采用紅 色的膠乳顆粒，這樣顯色明顯；膠乳顆粒上進行標記的方法在本領(lǐng)域為常規(guī)技術(shù)手段，發(fā)明 人在此不做贅述。彩色膠乳顆粒帶的標記可以與人血清中的IgG抗體結(jié)合，試驗線上是抗原。[0010]作為優(yōu)選，本實用新型脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，還包括殼體，所述 襯墊置于殼體內(nèi)；所述殼體的頂部對應(yīng)于層析膜的位置設(shè)有觀察窗，對應(yīng)于樣品墊的位置 設(shè)有加樣孔。[0011]作為優(yōu)選，所述殼體為硬質(zhì)塑料。[0012]作為優(yōu)選，所述觀察窗為方形孔或者透明片。[0013]作為優(yōu)選,所述玻璃纖維墊為噴涂有帶金黃色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊。金黃色葡萄球菌A蛋白是一種從金黃 色葡萄球菌細胞壁分離的蛋白質(zhì)。由于SPA能與人、鼠、兔等的IgG的Fe端結(jié)合，成為免疫 學(xué)上一種極為有用的工具。所述對照線是將SPA固定在層析膜上形成的對照線。所述對照 線與標記物對應(yīng)。[0014]作為優(yōu)選，所述玻璃纖維墊為噴涂有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆 粒的玻璃纖維墊。鼠抗人IgG單克隆抗體是一種較好的標記物。所述對照線是將羊抗鼠 IgG抗體固定在層析膜上形成的對照線。羊抗鼠IgG抗體又稱羊抗鼠IgG多克隆抗體。羊 抗鼠IgG (免疫球蛋白)多克隆抗體在膠體金法快速抗體診斷產(chǎn)品中用來固定于硝酸纖維 素膜上，與膠體金標記的單克隆抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)并顯示一定的顏色，形成對照線 進行免疫診斷。[0015]本實用新型的檢測原理是本實用新型的檢測是在層析作用的推動下完成的。當 血清樣品被添加至樣品墊上后，通過層析作用到達玻璃纖維墊，血清樣品中的IgG抗體與 標記的彩色膠乳顆粒結(jié)合形成結(jié)合顆粒，然后進一步至層析膜上，在層析膜的層析作用下， 結(jié)合顆粒向前移動，如血清中含有抗脊髓灰質(zhì)炎病毒的抗體時(即接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗后 應(yīng)產(chǎn)生此抗體)，與相應(yīng)的試驗線結(jié)合，呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，未結(jié)合的顆粒會繼續(xù)向前移 動，與對照線結(jié)合呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，即顯示試驗線和對照線兩條顏色線；如血清中不含 有抗脊髓灰質(zhì)炎病毒的抗體時，顆粒與相應(yīng)的試驗線的抗原無法結(jié)合，試驗線不顯色，為結(jié) 合的顆粒會繼續(xù)向前移動，與對照線結(jié)合呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，即只顯示對照線一條顏色 線。[0016]因膜層析速度較快，幾分鐘內(nèi)帶標記彩色膠乳顆粒即可移動完整個層析膜條，立 刻可以判讀結(jié)果，如試驗線和對照線均顯色，血清抗體為陽性；只有對照線一條線顯色，血 清抗體為陰性。[0017]綜上所述，本實用新型的有益效果是[0018](I)抗脊髓灰質(zhì)炎病毒IgG抗體是接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗后人體內(nèi)產(chǎn)生的一種特異 性保護抗體。人體內(nèi)只有具有這種特異性保護抗體時，才能在人體接觸到脊髓灰質(zhì)炎病毒時將病毒中和殺死不被感染。本實用新型脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡解決了現(xiàn) 有用于檢測接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體的酶 聯(lián)免疫法操作繁瑣、耗時長的缺陷；同時它能快速、有效地檢測接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗后人體 內(nèi)是否產(chǎn)生抗脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體，檢測操作簡便，生產(chǎn)成本低。[0019](2)本實用新型使用時，只需將待檢樣品用生理鹽水1:1稀釋，直接加到本實用新 型的樣品墊上即可，操作十分簡便；樣品加到本實用新型樣品墊上，10分鐘肉眼即可觀測 檢測結(jié)果，進行判定，整個檢測耗時約15分鐘，耗時短。[0020](3)本實用新型襯墊、樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊的主體部分均置于殼 體內(nèi)。所述殼體能發(fā)揮保護襯墊的作用，使本實用新型產(chǎn)品更加耐用。


[0021]圖1是實施例1的俯視圖；[0022]圖2是實施例1的剖視圖。[0023]圖3是實施例5的剖視圖。[0024]圖中標記相對應(yīng)的部件名稱是1-樣品墊，2-玻璃纖維墊，3-試驗線，4-對照線， 5-層析膜，6-吸收墊，7-襯墊，8-殼體，9-觀察窗，10-加樣孔。 。
具體實施方式
[0025]下面通過具體實施例，并結(jié)合附圖，對本實用新型的技術(shù)方案作進一步的具體說 明。[0026]實施例1[0027]如圖1和2所示，一種脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，包括襯墊7，襯墊 7的主體為塑料墊，塑料墊的表面涂覆有不干膠，所述襯墊7上沿水平方向依次固定具有吸 水性能的樣品墊I (濾紙，上海金標生物技術(shù)有限公司)、玻璃纖維墊2 (Ahlstrom 8964玻 纖，上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號JY-J101)、層析膜5(硝酸纖維素膜，Millipore公司， 型號135s)和具有吸水性能的吸收墊6 (濾紙，上海金標生物技術(shù)有限公司)。[0028]所述玻璃纖維墊2為均勻噴涂有帶SPA標記的紅色膠乳顆粒(紅色聚苯乙烯膠乳 顆粒，上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號PSR030N)的玻璃纖維墊，膠乳顆粒進行標記的方法 為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不作贅述。[0029]所述層析膜5上設(shè)置試驗線3和對照線4，所述試驗線3和對照線4平行；并且試 驗線3位于樣品墊I和對照線3之間。[0030]所述試驗線3是將滅活的純化的III型脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原(北京生物制品研究 所有限責任公司)固定在層析膜5上形成。[0031]所述對照線4是將SPA (市售，鄭州百基生物技術(shù)有限公司)固定在層析膜5上形 成。純化III型脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原、SPA固定方法均為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不作贅述。[0032]本實用新型中，所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6以水平方向順序 相接。具體地，所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6順序相接的方式是部分重 疊的，即樣品墊I的尾端搭接在玻璃纖維墊2上，玻璃纖維墊2的尾端搭接在層析膜5的 首端上，吸收墊6的首端搭接在層析膜5的尾端上。[0033]實施例2[0034]本實施例與實施例1基本相同，其不同部分僅在于所述玻璃纖維墊2為均勻噴涂 有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊，所述對照線4為將羊抗鼠 IgG抗體固定在層析膜5上形成。[0035]實施例3[0036]本實施例與實施例1基本相同，其不同部分僅在于所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、 層析膜5和吸收墊6的順序相接的方式是首尾連接并且沒有重疊的。[0037]實施例4[0038]本實施例與實施例3基本相同，其不同部分僅在于所述玻璃纖維墊2為噴涂有帶 鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊，所述對照線4為將羊抗鼠IgG 抗體固定在層析膜5上形成。[0039]本實用新型使用時，只需將待檢樣品用生理鹽水1:1稀釋，直接加到本實用新型 的樣品墊上即可，操作十分簡便；樣品加到本實用新型樣品墊上，10分鐘肉眼即可觀測檢 測結(jié)果，進行判定，如試驗線3和對照線4均顯色，血清抗體為陽性；只有對照線4 一條線顯 色，血清抗體為陰性。整個檢測耗時約15分鐘，耗時短。[0040]實施例5[0041]如圖3所示，本實施例與實施例1基本相同，其不同部分僅在于本實用新型還包 括殼體8，所述襯墊7、樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6均置于殼體8內(nèi)，所述 殼體8的頂部對應(yīng)于層析膜5的位置設(shè)有觀察窗9，對應(yīng)于樣品墊I的位置設(shè)有加樣孔10。 并且所述殼體為硬質(zhì)塑料，所述觀察窗為方形孔或者透明片。使用時通過加樣孔10將樣品 加到樣品墊I上。[0042]以上所述的實施例只是本實用新型的一種較佳的實施方案，并非對本實用新型任 何形式上的限制，在不超過權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體以及改型。
權(quán)利要求1.一種脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，包括襯墊(7)，其特征在于，還包括樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊￠);所述樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)以水平方向順序相接并固定在所述襯墊(7)上；并且所述玻璃纖維墊(2)上噴涂有帶標記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜(5)上設(shè)置由III型脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原構(gòu)成的試驗線(3)、以及與所述試驗線平行的對照線(4);并且所述試驗線(3)位于樣品墊(I)和對照線⑷之間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，其特征在于，還包括殼體(8)，所述襯墊(7)置于殼體(8)內(nèi)；所述殼體(8)的頂部對應(yīng)于層析膜(5)的位置設(shè)有觀察窗(9)，對應(yīng)于樣品墊⑴的位置設(shè)有加樣孔(10)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述殼體(8)為硬質(zhì)塑料。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述觀察窗(9)為方形孔或者透明片。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述玻璃纖維墊(2)為噴涂有帶SPA標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊(2)，所述對照線(4)為SPA固定在層析膜(5)上形成的對照線。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述玻璃纖維墊(2)為噴涂有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊(2)，所述對照線(4)為羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜(5)上形成的對照線(4)。
專利摘要本實用新型公開了一種脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡，包括襯墊(7)、樣品墊(1)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)；所述樣品墊(1)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)以水平方向順序相接并固定在所述襯墊(7)上；并且所述玻璃纖維墊(2)上噴涂有帶標記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜(5)上設(shè)置由III型脊髓灰質(zhì)炎病毒抗原構(gòu)成的試驗線(3)、以及與所述試驗線平行的對照線(4)；并且所述試驗線(3)位于樣品墊(1)和對照線(4)之間。本實用新型脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體檢測卡能快速、有效地檢測接種脊髓灰質(zhì)炎疫苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗脊髓灰質(zhì)炎病毒III型IgG抗體，檢測操作簡便，生產(chǎn)成本低。
文檔編號G01N33/569GK202870096SQ20122059198
公開日2013年4月10日 申請日期2012年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月9日
發(fā)明者范亞民, 李曉霞 申請人:寧波天潤生物藥業(yè)有限公司