專利名稱：食品中壬基酚的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食品中壬基酚的測定方法，特別是食品中壬基酚濃度的測定方法。
背景技術(shù)：
壬基酚是一種對人體有嚴(yán)重危害的一類環(huán)境污染物，目前被廣泛應(yīng)用于食品相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)中，如用作清潔劑、油漆和殺蟲劑等的原料，還可作為食品工業(yè)生產(chǎn)中的抗氧化齊U。我國目前壬基酚的年生產(chǎn)能力3萬噸，產(chǎn)量為2.6萬噸，近幾年我國壬基酚進(jìn)口量維持在年2萬噸左右。據(jù)統(tǒng)計，全世界每年約有50萬噸的壬基酚進(jìn)入水體或土壤。由于壬基酚的高度疏水性及化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，使得其易在水體下的淤泥中蓄積造成在環(huán)境中的廣泛分布，并能通過食物鏈進(jìn)行富集，從而通過食物對人類造成危害。研究發(fā)現(xiàn)壬基酚可以從牛奶加工過程中的PVC管以及包裝食品的塑料中滲出，這些壬基酚大部分直接進(jìn)入牛奶中，還有一部分釋放到環(huán)境中后，很難被降解掉，累積在污水污泥、流水沉積物、甚至一些飲用水中，水體中的壬基酚污染還可富集在水生動物中，通過食物鏈對人體產(chǎn)生作用。大量體內(nèi)、外試驗表明壬基酚作為一種環(huán)境雌激素，具有干擾內(nèi)分泌活性的作用，對哺乳動物與水生生物的生殖與發(fā)育造成了不同程度的影響，已經(jīng)引起了毒理學(xué)、生態(tài)學(xué)、環(huán)境流行病學(xué)等方面科學(xué)家的廣泛關(guān)注。目前相關(guān)研究主要集中在其環(huán)境行為及其可能的相關(guān)生態(tài)環(huán)境風(fēng)險方面，有關(guān)食品中壬基酚的檢測技術(shù)目前還比較缺乏。大量研究表明，這些化合物廣泛地存在于各種食品中，對人類有著長期的危險，與其他雌激素類物質(zhì)的協(xié)同效應(yīng)也是其嚴(yán)重危害后果之一。針對壬基酚的檢測，國內(nèi)外尚有對環(huán)境中壬基酚含量的檢測方法，但較少有具體在食品中的檢測。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種檢出限低、回收率高、重現(xiàn)性好、利用高效液相色譜法測定食品中壬基酚的方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種食品中壬基酚的測定方法，包括以下步驟:I)、試樣制備:將待測品制成待測樣品；2)、提取:稱取待測樣品2.0g加入離心管內(nèi)，加入18 22mL正己烷和丙酮混合溶劑，振蕩提取、超聲波提取、離心后，得首次上清液和沉淀；在沉淀中加入8 12mL正己烷和丙酮混合溶劑，重復(fù)上述振蕩提取、超聲波提取和離心；得再次上清液；
合并首次上清液和再次上清液，得合并上清液，取1/3體積的合并上清液45飛5°C(最佳為50°C)氮吹干(吹至近干)，二氯甲烷溶解，得待凈化提取液；正己烷和丙酮混合溶劑由正己烷和丙酮按照1:1的體積比混合而得；備注說明:上述二氯甲烷的用量為只需能溶解“被45飛5°C氮吹至近干的1/3體積的合并上清液”即可；一般為2 4ml，例如為3ml ；3)、凈化:取活化后的氨基固相萃取柱，轉(zhuǎn)移上述待凈化提取液上柱，先加入正己烷淋洗，吹干(近干)氨基固相萃取柱后，加入甲醇丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，將所收集的洗脫液于48^520C (最佳為50°C )氮氣吹干，用流動相溶解并定容至lmL，過0.45 μ m有機相濾膜，得樣品提取液；所述樣品提取液用于下述步驟的高效液相色譜儀測定；所述流動相同步驟4)中的高效液相色譜檢測用流動相；備注說明:過0.45 μ m有機相濾膜，幾乎不會導(dǎo)致體積的改變，S卩，所得的樣品提取液仍為I mL ；4)、將步驟3)所得的樣品提取液與壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)行高效液相色譜測定;高效液相色譜測定條 件如下:所用色譜柱為EclipseXDB C18, 5 μ m, 150mmX 4.6mm 內(nèi)徑；高效液相色譜檢測用流動相由體積百分比70%的組分A和體積百分比30%的組分B,組分A為乙腈,組分B為水；分別測得樣品提取液和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的峰面積；利用壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的峰面積和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中壬基酚濃度獲知壬基酚濃度/峰面積的線性相關(guān)性關(guān)系，以及利用樣品提取液的峰面積，得知樣品提取液中壬基酚的濃度；再根據(jù)待測樣品與樣品提取液的比例關(guān)系，換算獲得待測樣品中壬基酚的濃度(即，待測品中壬基酚的濃度)。作為本發(fā)明的食品中壬基酚的測定方法的改進(jìn):壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中壬基酚的濃度為在Ing/mL 0.5mg/mL。作為本發(fā)明的食品中壬基酚的測定方法的進(jìn)一步改進(jìn):壬基酚濃度/峰面積的線性相關(guān)性關(guān)系:y=0.13x+0.41 ；y為峰面積；x為壬基酚濃度，單位ng/ml。作為本發(fā)明的食品中壬基酚的測定方法的進(jìn)一步改進(jìn):當(dāng)待測品為谷類時，將谷類制成過40目篩的粉末，作為待測樣品；當(dāng)待測品為魚類時，將待測品制成糜狀物(即魚肉糜)，作為待測樣品；當(dāng)待測品為蔬菜、蔬菜制品，將待測品勻漿，得漿液；加入無水硫酸鈉將漿液進(jìn)行濃縮處理，使?jié)饪s后的漿液=待測品的重量；濃縮后的漿液作為待測樣品。作為本發(fā)明的食品中壬基酚的測定方法的進(jìn)一步改進(jìn):步驟4)中的高效液相色譜中熒光檢測波長為激發(fā)波長222nm，發(fā)射波長305nm。作為本發(fā)明的食品中壬基酚的測定方法的進(jìn)一步改進(jìn):步驟2)中:在15 25mm震蕩幅度下的震蕩提取時間為15 25min ；
在3(Γ50ΚΗζ的超聲頻率和80 120W的功率下超聲波提取15 25min。離心的轉(zhuǎn)速為4000 6000r/min,離心時間8 12min。上述工藝參數(shù)較佳為:在20mm震蕩幅度下的震蕩提取時間為20min ；在40KHz的超聲頻率和99W的功率下超聲波提取20min。離心的轉(zhuǎn)速為5000r/min,離心時間lOmin。作為本發(fā)明的食品中壬基酚的測定方法的進(jìn)一步改進(jìn):步驟3)中甲醇丙酮混合液、正己烷體積均為rSmL，較佳均為6mL。作為本發(fā)明的食品中壬基酚的測定方法的進(jìn)一步改進(jìn):步驟2)中所用的離心管為具塞離心管。備注說明:將氨基固相萃取柱進(jìn)行活化 ，從而獲得活化后的氨基固相萃取柱，是一個公知技術(shù)；例如為:將氨基固相萃取柱安裝在SPE固相萃取裝置上，依次用甲醇丙酮混合液(甲醇和丙酮的體積比為1:1)和正己烷進(jìn)行淋洗，實現(xiàn)活化。在本發(fā)明的步驟4)中，高效液相色譜測定條件具體如下:a)色譜柱:EclipseXDB C18 柱，5 μ m(粒度)，150mmX4.6mm (內(nèi)徑)。b)流動相70% (體積比)A:乙腈30% (體積比)B:水c)流速:1.3mL/min。d)柱溫:30°C。e)激發(fā)波長:222nm。發(fā)射波長:305nm。f)進(jìn)樣量:10 μ L。在本發(fā)明中，壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中壬基酚的溶液在Ing/mL 0.5mg/mL內(nèi)，其濃度與峰面積有良好的相關(guān)性，回歸方程為y=0.13x+0.41 (x為壬基酚的濃度，單位ng/ml ；y為峰面積)，相關(guān)系數(shù)0.9995，能夠滿足定量分析的需要。按照常規(guī)理論:倘若樣品提取液的響應(yīng)值超出儀器檢測的線性范圍的上限，則對樣品提取液采取適當(dāng)?shù)南♂屘幚砗笤龠M(jìn)行檢測即可，稀釋倍數(shù)視響應(yīng)值而定。本發(fā)明具有如下優(yōu)點:(I)回收率高、重現(xiàn)性好:回收率可以達(dá)到78.2% 101.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差2.3%
7.7%，現(xiàn)有技術(shù)的回收率為77.3% 90.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2% 6.5%，本發(fā)明平均回收率提高了 5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差大體相當(dāng)。(2)檢出限低:本方法檢出限為I μ g/kg,現(xiàn)有技術(shù)檢出限2.4 μ g/kg。


下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖1是濃度為0.25 μ g/mL壬基酚(Nonylphenol)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的液相色譜圖。
具體實施例方式標(biāo)準(zhǔn)品:壬基酚(Nonylphenol)分子式為C15H24O,純度大于99%。標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液:準(zhǔn)確稱取0.0500g壬基酚標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇定容至IOOmL,配制成濃度為500 μ g/mL的壬基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液，于一 18°C避光保存。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(0.25 μ g/mL):分別準(zhǔn)確吸取50 μ L壬基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液至IOOmL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成0.25 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。氨基固相萃取柱:500mg (填料量)，3mL (空柱管體積)，例如可選用天津博納艾杰爾科技有限公司生產(chǎn)的PA5003型號的氨基固相萃取柱；使用前依次使用6mL甲醇丙酮混合液(甲醇:丙酮=1:1的體積比)，6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的雜質(zhì)，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然過柱。高效液相色譜(HPLC)儀:配有熒光檢測器。實施例1、速食面樣品中壬基酚含量檢測(一)樣品處理I)試樣制備將速食面制成過40目篩的粉末，作為待測樣品。2)提取稱取待測樣品2.0Og加入50mL離心管(具塞離心管)內(nèi)，加入20mL正己烷和丙酮混合溶劑(正己燒:丙酮=1:1的體積比)，在20mm震蕩幅度下振蕩提取20min,在40KHz的超聲頻率和99W的功率下超聲波提取20min，5000r/min離心lOmin，得首次上清液和沉淀；將所得的首次上清液轉(zhuǎn)移至另一個50mL離心管中。在沉淀中加入IOmL正己烷和丙酮混合溶劑(正己烷:丙酮=1:1的體積比)重復(fù)提取一遍，即，在20mm震蕩幅度下振蕩提取20min，在40KHz的超聲頻率和99W的功率下超聲波提取20min, 5000r/min離心lOmin,得再次上清液。將首次上清液和再次上清液進(jìn)行合并，共得到約30mL的上清液。取1/3體積(SP約IOmL)上清液50°C氮氣吹至近干，然后用3mL 二氯甲烷溶解，得待凈化提取液。3)凈化將氨基固相萃取柱安裝在SPE固相萃取裝置上，依次用6mL甲醇丙酮混合液(甲醇:丙酮=1:1的體積比)和6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的雜質(zhì)，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然過柱。轉(zhuǎn)移步驟2)所得的待凈化提取液上柱，再加入6mL正己烷淋洗(流速為一秒一滴)，50°C氮氣吹氨基固相萃取柱近干，加入6mL甲醇丙酮混合液洗脫(流速為一秒一滴，甲醇:丙酮=1:1的體積比)，收集洗脫液，50°C氮氣吹干，流動相(即高效液相色譜檢測用流動相:體積百分比70%乙腈和30%水組成的混合溶液)溶解并定容至lmL，過0.45 μ m有機相濾膜，得ImL樣品提取液，供高效液相色譜儀測定。(二)測定條件a)色譜柱:EclipseXDB C18 柱，5 μ m(粒度)，150mmX4.6mm (內(nèi)徑)。b)流動相70% (體積比)A:乙腈30% (體積比)B:水
c)流速:1.3mL/min。d)柱溫:30°C。e)激發(fā)波長:222nm。發(fā)射波長:305nm。f)進(jìn)樣量:10 μ L。(三)色譜分析注入10 μ L壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣品提取液于高效液相色譜儀進(jìn)樣器中，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間定性，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見圖1。由于壬基酹標(biāo)準(zhǔn)溶液在Ing/mL 0.5mg/mL內(nèi)，其濃度與峰面積有良好的線性相關(guān)性，回歸方程:y=0.13x+0.41，根據(jù)峰面積y=l.7295，可得樣品提取液中壬基酚濃度為10.15 ng/ml。再根據(jù)最初選用的取待測樣品2.0Og與樣品提取液用量比的換算關(guān)系:
X=C*V*N/mX-樣品中壬基酚殘留量，mg/kg ；C——樣品提取液中壬基酚濃度，μ g/mL;V 樣品提取液最終定容體積，mL ;N-稀釋倍數(shù)；m-樣品質(zhì)量，g。其中樣品提取液的體積V為ImL ;樣品質(zhì)量m為2g ;稀釋倍數(shù)N為3 (根據(jù)2)步驟中取1/3體積的上清液，可知此處N為3)。根據(jù)取樣的檢測結(jié)果，速食面中壬基酚的濃度為15.2 ng/g。由于壬基酚廣泛存在于環(huán)境中，生產(chǎn)速食面的原材料可能被壬基酚污染。實施例2:中國大白菜樣品中壬基酚含量檢測(一)樣品處理1)試樣制備將中國大白菜切碎，勻漿，得漿液，加入適量無水硫酸鈉將漿液進(jìn)行濃縮處理，使?jié)饪s后的漿液的重量=原始的中國大白菜的重量；該濃縮后的漿液作為待測樣品。2)提取稱取待測樣品2.0(^加入5011^離心管(具塞離心管)內(nèi)，加入20mL正己烷和丙酮混合溶劑(正己燒:丙酮=1:1的體積比)，在20mm震蕩幅度下振蕩提取20min,在40KHz的超聲頻率和99W的功率下聲波提取20min，5000r/min離心lOmin，得首次上清液和沉淀。將所得的首次上清液轉(zhuǎn)移至另一個50mL離心管中。在沉淀中加入IOmL正己烷和丙酮混合溶劑(正己燒:丙麗=1: I的體積比)重復(fù)提取一遍，即，在20mm震蕩幅度下振蕩提取20min,在40KHz的超聲頻率和99W的功率下聲波提取20min，5000r/min離心lOmin，得再次上清液。將首次上清液和再次上清液進(jìn)行合并，共得到約30mL的上清液。取1/3體積(SP約IOmL)上清液50°C氮吹至近干，然后用3mL 二氯甲烷溶解，得待凈化提取液。3)凈化
將氨基固相萃取柱安裝在SPE固相萃取裝置上，依次用6mL甲醇丙酮混合液(甲醇:丙酮=1:1的體積比)和6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的雜質(zhì)，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然過柱。轉(zhuǎn)移步驟2)所得的待凈化提取液上柱，再加入6mL正己烷淋洗(流速為一秒一滴)，吹氨基固相萃取柱近干，加入6mL甲醇丙酮混合液洗脫(流速為一秒一滴)，收集洗脫液，50°C氮氣吹干，流動相(即高效液相色譜檢測用流動相:體積百分比70%乙腈和30%水的混合溶液)溶解并定容至lmL，過0.45 μ m有機相濾膜，得樣品提取液lmL，供高效液相色譜儀測定。(二)測定條件a) 色譜柱:EclipseXDB Cl8 柱，5 μ m(粒度)，I5OmmX 4.6mm (內(nèi)徑)。b)流動相70% (體積比)A:乙腈30% (體積比)B:水c)流速:1.3mL/min。d)柱溫:30°C。e)激發(fā)波長:222nm。發(fā)射波長:305nm。f)進(jìn)樣量:10 μ L。(三)色譜分析注入10 μ L壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣品提取液于高效液相色譜儀進(jìn)樣器中，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間定性，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見圖1。由于壬基酹標(biāo)準(zhǔn)溶液在Ing/mL 0.5mg/mL內(nèi)，其濃度與峰面積有良好的線性相關(guān)性，回歸方程:y=0.13x+0.41，根據(jù)峰面積y=l.6398，可得樣品提取液壬基酚濃度為9.46ng/ml。再根據(jù)最初選用的取待測樣品2.0Og與樣品提取液用量比的換算關(guān)系:
CXVXN
X =-
mX-樣品中壬基酚殘留量，mg/kg ；C——樣品提取液中壬基酚濃度，μ g/mL ;V 樣品提取液最終定容體積，mL ;N-稀釋倍數(shù)；m——樣品質(zhì)量，g。其中樣品提取液體積V為ImL ;樣品質(zhì)量m為2g ;稀釋倍數(shù)N為3。根據(jù)取樣的檢測結(jié)果，中國大白菜中壬基酚的濃度為14.2 ng/g。由于壬基酚廣泛存在于各種環(huán)境介質(zhì)中，可能通過各種途徑在植物體內(nèi)富集。實施例3:鯽魚樣品中壬基酚含量檢測(一)樣品處理I)試樣制備將鯽魚肉制成糜狀物(魚肉糜),作為待測樣品。
2)提取稱取待測樣品2.0Og加入50mL離心管(具塞離心管)內(nèi)，加入20mL正己烷和丙酮混合溶劑(正己燒:丙酮=1:1的體積比)，在20mm震蕩幅度下振蕩提取20min,在40KHz的超聲頻率和99W的功率下聲波提取20min，5000r/min離心lOmin，得首次上清液和沉淀；將所得的首次上清液轉(zhuǎn)移至另一個50mL離心管中。在沉淀中加入IOmL正己烷和丙酮混合溶劑(正己燒:丙麗=1: I的體積比)重復(fù)提取一遍，即，在20mm震蕩幅度下振蕩提取20min,在40KHz的超聲頻率和99W的功率下聲波提取20min，5000r/min離心lOmin，得再次上清液。將首次上清液和再次上清液進(jìn)行合并，共得到約30mL的上清液。取1/3體積(SP，約IOmL)的上清液50°C氮吹至近干，然后用3mL 二氯甲烷溶解，得待凈化提取液。3)凈化將氨基固相萃取柱安裝在SPE固相萃取裝置上，依次用6mL甲醇丙酮混合液(甲醇:丙酮=1:1的體積比)和6mL正己烷活化，活化即除去氨基固相萃取柱中的雜質(zhì)，甲醇丙酮混合液和正己烷依靠重力自然過柱。轉(zhuǎn)移步驟2)所得的待凈化提取液上柱，再加入6mL正己烷淋洗(流速為一秒一滴)，吹氨基固相萃取柱近干，加入6mL甲醇丙酮混合液洗脫(流速為一秒一滴)，收集洗脫液，50°C氮氣吹干，流動相(即高效液相色譜檢測用流動相:體積百分比70%乙腈和30%水的混合溶液)溶解并定容至lmL，過0.45 μ m有機相濾膜，得樣品提取液，供高效液相色譜儀測定。(二)測定條件a)色譜柱:EclipseXDB Cl8 柱，5 μ m(粒度)，I5OmmX 4.6mm (內(nèi)徑)。

b)流動相70% (體積比)A:乙腈30% (體積比)B:水c)流速:1.3mL/min。d)柱溫:30°C。e)激發(fā)波長:222nm。發(fā)射波長:305nm。f)進(jìn)樣量:10 μ L。(三)色譜分析注入10 μ L壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣品提取液于高效液相色譜儀進(jìn)樣器中，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間定性，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附圖1。由于壬基酹標(biāo)準(zhǔn)溶液在Ing/mL 0.5mg/mL內(nèi)，其濃度與峰面積有良好的線性相關(guān)性，回歸方程:y=0.13x+0.41，根據(jù)峰面積y=2.5198，可得樣品提取液壬基酚濃度為16.23 ng/ml。再根據(jù)最初選用的取待測樣品2.0Og與樣品提取液用量比的換算關(guān)系:
Γ ^ CxFxNX =-
mX-樣品中壬基酚殘留量，mg/kg ；
C——樣品提取液中壬基酚濃度，μ g/mL;V 樣品提取液最終定容體積，mL ;N—稀釋倍數(shù)；m——樣品質(zhì)量，g。其中樣品提取液最終定容體積V為ImL ;樣品質(zhì)量m為2g ;稀釋倍數(shù)N為3。根據(jù)取樣的檢測結(jié)果，鯽魚中壬基酚的濃度為24.3 ng/g。造成鯽魚體內(nèi)的壬基酚含量濃度較高是由于樣品取自可能受環(huán)境污染的東海沿海養(yǎng)殖場。驗證例1、將事先已知不含壬基酚的速食面制成過40目篩的粉末，然后添加適量的壬基酚，從而制成壬基酚濃度為30ng/g的速食面粉末作為待測樣品。將上述待測樣品按照實施例1所述的方法進(jìn)行檢測，得峰面積y=2.7785，根據(jù)y=0.13x+0.41，得樣品提取液壬基酚濃度為18.22 ng/ml ;最終的待測樣品中壬基酚的濃度為 27.33 ng/g ο對比例1、將實施例1中的步驟3) “凈化”中的“收集洗脫液，50°C氮氣吹干”改成“收集洗脫液，70°C氮氣吹干”，其余同實施例1。將完全同驗證例I中的待測樣品按照對比例I的方法進(jìn)行檢測，得峰面積I二2.619，根據(jù)y=0.13x+0.41，得樣品提取液壬基酚濃度為16.99 ng/ml ;最終的待測樣品中壬基酚的濃度為25.49 ng/g。驗證例2、將事先已知不含壬基酚的速食面制成過40目篩的粉末，然后添加適量的壬基酚，從而制成壬基酚濃度為1.5ng/g的速食面粉末作為待測樣品。將上述待測樣品按照實施例1所述的方法進(jìn)行檢測，得峰面積y=0.5284，根據(jù)y=0.13x+0.41，得樣品提取液壬基酚濃度為0.91 ng/ml ;最終的待測樣品中壬基酚的濃度為 1.36 ng/g ο驗證例3、將事先已知不含壬基酚的鯽魚肉制成糜狀物(魚肉糜)，然后添加適量的壬基酚，從而制成壬基酹濃度為15ng/g的糜狀物(魚肉糜)作為待測樣品。將上述待測樣品按照實施例3所述的方法進(jìn)行檢測，得峰面積y=l.588，根據(jù)y=0.13x+0.41，得樣品提取液壬基酚濃度為9.07 ng/ml ;最終的待測樣品中壬基酚的濃度為 13.6ng/g。最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.食品中壬基酚的測定方法，其特征是包括以下步驟: 1)、試樣制備: 將待測品制成待測樣品； 2)、提取: 稱取待測樣品2.0g加入離心管內(nèi)，加入18 22mL正己烷和丙酮混合溶劑，振蕩提取、超聲波提取、離心后，得首次上清液和沉淀； 在沉淀中加入8 12mL正己烷和丙酮混合溶劑，重復(fù)上述振蕩提取、超聲波提取和離心；得再次上清液； 合并首次上清液和再次上清液，得合并上清液，取1/3體積的合并上清液45 55°C氮吹干，二氯甲烷溶解，得待凈化提取液； 所述正己烷和丙酮混合溶劑由正己烷和丙酮按照1:1的體積比混合而得； 3)、凈化: 取活化后的氨基固相萃取柱，轉(zhuǎn)移上述待凈化提取液上柱，先加入正己烷淋洗，吹干氨基固相萃取柱后，加入甲醇丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，將所收集的洗脫液于48飛2°C氮氣吹干，用流動相溶解并定容至lmL，過0.45 μ m有機相濾膜，得樣品提取液；所述樣品提取液用于下述步驟的高效液相色譜儀測定； 所述流動相同步驟4)中的高效液相色譜檢測用流動相； 4)、將步驟3)所得的樣品提取液與壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)行高效液相色譜測定； 高效液相色譜測定條件如下:所用色譜柱為 EclipseXDB C18, 5 μ m, 1 50mmX 4.6mm 內(nèi)徑； 高效液相色譜檢測用流動相由體積百分比70%的組分A和體積百分比30%的組分B，所述組分A為乙腈，所述組分B為水； 分別測得樣品提取液和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的峰面積； 利用壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的峰面積和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中壬基酚濃度獲知壬基酚濃度/峰面積的線性相關(guān)性關(guān)系，以及利用樣品提取液的峰面積，得知樣品提取液中壬基酚的濃度；再根據(jù)待測樣品與樣品提取液的比例關(guān)系，換算獲得待測樣品中壬基酚的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的食品中壬基酚的測定方法，其特征是: 壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中壬基酚的濃度為在Ing/mL 0.5mg/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的食品中壬基酚的測定方法，其特征是: 壬基酚濃度/峰面積的線性相關(guān)性關(guān)系:y=0.13x+0.41 ； 所述I為峰面積，X為壬基酹濃度，單位ng/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的食品中壬基酚的測定方法，其特征是: 當(dāng)待測品為谷類時，將谷類制成過40目篩的粉末，作為待測樣品； 當(dāng)待測品為魚類時，將待測品制成糜狀物，作為待測樣品； 當(dāng)待測品為蔬菜、蔬菜制品，將待測品勻漿，得漿液；加入無水硫酸鈉將漿液進(jìn)行濃縮處理，使?jié)饪s后的漿液=待測品的重量；所述濃縮后的漿液作為待測樣品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的食品中壬基酚的測定方法，其特征是: 所述步驟4)中的高效液相色譜中熒光檢測波長為激發(fā)波長222nm，發(fā)射波長305nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的食品中壬基酚的測定方法，其特征是:所述步驟2)中: 在15 25_震蕩幅度下的震蕩提取時間為15 25min ； 在3(Γ50ΚΗζ的超聲頻率和8(Tl20W的功率下超聲波提取15 25min。
離心的轉(zhuǎn)速為4000 6000r/min,離心時間8 12min。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的食品中壬基酚的測定方法，其特征是:步驟3)中甲醇丙酮混合液、正己烷體積均為4~8mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的食品中壬基酚的測定方法，其特征是:所述步驟2)中所用的離心管為具塞離心管。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種食品中壬基酚的測定方法，包括以下步驟 1)將待測品制成待測樣品；2)提取將取待測樣品制成待凈化提取液；3)凈化取活化后的氨基固相萃取柱，轉(zhuǎn)移待凈化提取液上柱，先加入正己烷淋洗，吹干氨基固相萃取柱后，加入甲醇丙酮混合液洗脫，收集洗脫液，吹干，用流動相溶解并定容至1mL，得樣品提取液；4)樣品提取液與壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)行高效液相色譜測定；利用壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的峰面積和壬基酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中壬基酚濃度獲知壬基酚濃度/峰面積的線性相關(guān)性關(guān)系，以及利用樣品提取液的峰面積，得知樣品提取液中壬基酚的濃度；最終根據(jù)比例關(guān)系換算獲得待測樣品中壬基酚的濃度。
文檔編號G01N30/14GK103115983SQ201310039869
公開日2013年5月22日 申請日期2013年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月29日
發(fā)明者關(guān)榮發(fā), 郝云彬, 駱曉波, 劉 英, 許亞新, 蔣晗, 劉明啟 申請人:中國計量學(xué)院, 杭州市余杭區(qū)質(zhì)量計量監(jiān)測中心