一種膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng),由激光發(fā)射光源、光學(xué)系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)、可充電電池、微型打印機(jī)、液晶顯示屏以及配套的層析試紙條組成。本發(fā)明提供一種膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng),可以定性、定量的檢測(cè)試紙條信息,并記錄分析數(shù)據(jù)結(jié)果,可打印輸出。
【專利說明】 一種膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng)
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬生物【技術(shù)領(lǐng)域】,特別是涉及專用的免疫層析分析系統(tǒng)。
【背景技術(shù)】
[0002]PCT是一種蛋白質(zhì),當(dāng)嚴(yán)重細(xì)菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒癥和多臟器功能衰竭時(shí)它在血漿中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時(shí)PCT不會(huì)升高。局部有限的細(xì)菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會(huì)導(dǎo)致其升高。細(xì)菌內(nèi)毒素在誘導(dǎo)過程中擔(dān)任了至關(guān)重要的作用。
[0003]PCT反映了全身炎癥反應(yīng)的活躍程度。影響PCT水平的因素包括被感染器官的大小和類型、細(xì)菌的種類、炎癥的程度和免疫反應(yīng)的狀況。另外,PCT只是在少數(shù)患者的大型外科術(shù)后I?4d可以測(cè)到。
[0004]PCT水平的升高出現(xiàn)在嚴(yán)重休克、全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)和多器官功能紊亂綜合征(MODS),即使沒有細(xì)菌感染或細(xì)菌性病灶。但是,在這些病例中PCT水平通常低于那些有細(xì)菌性病灶的患者。從腸道釋放細(xì)胞因子或細(xì)菌移位可能引起誘導(dǎo)。
[0005]目前,檢測(cè)PCT的實(shí)驗(yàn)室方法有很多,不僅可以定性,亦可以定量。常用的方法有如下幾種:1.放射免疫學(xué)分析法:利用人工合成的多克隆抗體特異地識(shí)別和連接合成氨基酸降鈣素原。該方法能檢測(cè)正常人的血清PCT,可靠敏感度為4pm / mL,檢測(cè)的是游離PCT、結(jié)合型PCT和降鈣素基因相關(guān)肽前體的混合物,而不能區(qū)分上述三種物質(zhì)。該法檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)(19?22h),而且有放射性元素的污染使用受到限制。2.雙抗夾心免疫化學(xué)發(fā)光法(ILMA):運(yùn)用雙單克隆抗體,其中一個(gè)抗體為降鈣素抗體,另一個(gè)為抗鈣素抗體,分別結(jié)合到PCT分子的降鈣素和抗鈣素部位,可排除交叉反應(yīng)。其中一個(gè)抗體是光標(biāo)記的,另一個(gè)未標(biāo)記的抗體固定在試管的內(nèi)壁,反應(yīng)過程中兩個(gè)抗體與PCT分子結(jié)合而形成三明治復(fù)合體,發(fā)光部位于反應(yīng)管的表面。該法操作簡(jiǎn)便,特異性強(qiáng),敏感性高,測(cè)定的低限值為0.1ng/mL,2h可以出結(jié)果。3.膠體金比色法(B.R.A.H.M.S PCT-Q-半定量快速實(shí)驗(yàn)):采用膠體金技術(shù),包括膠體金標(biāo)記的抗抗鈣素的單克隆抗體和用作包被的抗降鈣素多克隆抗體,當(dāng)標(biāo)本(血清或血漿)加入標(biāo)本孔,金標(biāo)單克隆抗體與標(biāo)本中的PCT結(jié)合,形成金標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物。該復(fù)合物在反應(yīng)膜上移動(dòng),與固定在膜上的抗降鈣素抗體結(jié)合形成更大的復(fù)合物。當(dāng)PCT濃度超過0.5ng/mL,該復(fù)合物顯示紅色,紅色的深淺與PCT的濃度成正比,與標(biāo)準(zhǔn)比色板比較即可得出PCT的濃度范圍。結(jié)果分為四級(jí):正?!?.5ng / mL ;輕度升高>0.5ng/mL ;明顯升高>2ng/mL ;顯著升高>10ng / mL。該法具有快速簡(jiǎn)便,易觀察的特點(diǎn)。
4.透射免疫濁度法:樣品中的PCT與試劑中的PCT單克隆抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng),使反應(yīng)液濁度增加,并在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液濁度與所加人抗原的量呈線性關(guān)系,可使用生化分析儀或其它光學(xué)檢測(cè)儀器在600nm波長(zhǎng)處測(cè)定反應(yīng)液吸光度值,反應(yīng)液吸光度值與所測(cè)PCT濃度成正比。該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速,可自動(dòng)化,適合于批量檢測(cè)。2005年國(guó)內(nèi)已有研制開發(fā)的PCT免疫比濁試劑盒供應(yīng),為PCT的廣泛應(yīng)用提供了方便條件,但免疫透射比濁的方法學(xué)及臨床應(yīng)用尚需做進(jìn)一步的驗(yàn)證。[0006]免疫層析方法是20世紀(jì)90年代興起的一種將免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)相結(jié)合的固相膜免疫分析方法,由這一技術(shù)開發(fā)出來的膠體金免疫層析試紙現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、食品安全監(jiān)測(cè)、出入境檢驗(yàn)檢疫等領(lǐng)域。但現(xiàn)有的膠體金免疫層析診斷試劑多用于定性測(cè)定,不能滿足臨床對(duì)某些指標(biāo)量化的要求。
[0007]因此,本研究開發(fā)的膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng),研制出PCT免疫層析快速定量檢測(cè)系統(tǒng)。該檢測(cè)系統(tǒng)以特定波長(zhǎng)的激光器為光源,通過測(cè)量試劑檢測(cè)帶和質(zhì)控帶對(duì)特定波長(zhǎng)光線的吸收光密度來實(shí)現(xiàn)對(duì)試劑的定量測(cè)定。其內(nèi)部集成了光學(xué)系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)、可充電電池、微型打印機(jī)和液晶顯示屏等部件,是一種便攜式的快速檢測(cè)儀器。具有在15min內(nèi)完成對(duì)PCT的快速定量測(cè)定;該檢測(cè)系統(tǒng)具有簡(jiǎn)便、快速、便攜等特點(diǎn),可有效用于評(píng)價(jià)嚴(yán)重炎癥性疾病臨床進(jìn)程及預(yù)后、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)菌性感染伴隨系統(tǒng)性炎癥反應(yīng),彌補(bǔ)了臨床現(xiàn)有方法的不足,適合于各級(jí)醫(yī)院及基層、社區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用,具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008]本發(fā)明通過提供一種膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng)。
[0009]本發(fā)明提供的膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng),該系統(tǒng)包括激光發(fā)射光源、光學(xué)系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)、可充電電池、微型打印機(jī)、液晶顯示屏以及配套的層析試紙條。另外,作為可選配置,所述的免疫層析分析儀還包括實(shí)時(shí)存儲(chǔ)器和打印部件。此外,免疫層析分析儀還包括一套軟件系統(tǒng),使檢測(cè)結(jié)果在較寬的檢測(cè)范圍內(nèi)保持線性。同時(shí)可有效排除檢測(cè)試劑本身造成的誤差,使結(jié)果更為準(zhǔn)確、可靠。
[0010]本發(fā)明的工作流程為:
[0011]1、降鈣素原(PCT)定量免疫層析試紙條的制作
[0012]將PCT單克隆抗體標(biāo)記于制備好的膠體金顆粒表面,并固定于膠金墊上,相應(yīng)的另一抗體及羊抗鼠IgG分別噴涂在硝酸纖維膜(NC膜)上形成檢測(cè)線(T)和質(zhì)控線(C)。根據(jù)免疫層析的基本原理,將吸水紙、分析膜、膠金墊、樣品墊依次貼在帶有PVC底板上,切割并裝卡。
[0013]2、定量檢測(cè)系統(tǒng)的建立
[0014]吸取待測(cè)樣品垂直滴加至加樣孔中,15min后通過免疫層析分析儀判讀結(jié)果。實(shí)驗(yàn)和理論均證明,膠體金顆粒對(duì)綠光具有較強(qiáng)的吸收特性。免疫層析分析儀通過測(cè)量免疫層析試劑檢測(cè)區(qū)膠體金顆粒的漫反射光,分別計(jì)算出其上檢測(cè)線吸收光密度值和質(zhì)控線吸收光密度值,通過標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,計(jì)算出被檢樣品中目標(biāo)被檢物的濃度。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015]以下結(jié)合附圖進(jìn)一步說明本發(fā)明的結(jié)構(gòu)特征及目的
[0016]圖1為PCT定量檢測(cè)系統(tǒng)不意圖。光電掃描處理系統(tǒng)由光機(jī)模組和光電電路兩部分組成,發(fā)光二極管通過勻光玻璃照射到PCT免疫層析定量檢測(cè)試劑的色帶區(qū)上,兩條色帶反射的光經(jīng)聚光片、透鏡聚焦到傳感器件上,從而實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)采集和光電信號(hào)的轉(zhuǎn)換。主板電路負(fù)責(zé)將光電掃描處理系統(tǒng)收集的光電信號(hào)進(jìn)行數(shù)字處理及計(jì)算,最后將處理的一些結(jié)果通過液晶屏顯示出來,即可實(shí)現(xiàn)對(duì)PCT的定量測(cè)定。圖2為本發(fā)明PCT定量檢測(cè)免疫層析試紙條的剖面結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017]膠體金-PCT抗體復(fù)合物的制備
[0018]采用經(jīng)典的Frens法制備粒徑均一且高度分散的膠體金。將制備好的膠體金用
0.1mol / L K2CO3調(diào)節(jié)pH至9.0,加入PCT單克隆抗體,渦旋反應(yīng)lOmin,加入10% BSA封閉,IOmin后將制備的金標(biāo)抗體復(fù)合物離心、重懸,濃縮至原體積的I / 25,4°C保存。
[0019]PCT免疫層析試紙條的研制
[0020]1、樣品墊的制備:選用玻璃纖維素膜作為樣品墊材料,將其放入樣品墊處理液
[0021](0.01mOl / L PBS (ΡΗ=7.4),含有 I % BSA,0.5% Triton X-100)中浸泡,37°C烘干備用。
[0022]2、膠金墊的制備:選用玻璃纖維素膜作為膠金墊材料,將上述制備的膠體金-PCT抗體復(fù)合物重新分散于0.05mol / L Tris-HCl緩沖液(PH=8.0,含5%蔗糖,1% BSA)中,并噴于膠金墊上,37°C烘干。
[0023]3、分析膜的制備:用劃膜儀在硝酸纖維素膜(NC膜)的不同位置分別噴點(diǎn)PCT單抗(T線)及羊抗鼠IgG抗體(C線),37°C烘干。
[0024]4、組裝:將吸水紙、分析膜、膠金墊、樣品墊依次貼在PVC底板上,并切成4_寬的試紙條,裝卡。
[0025]檢測(cè)系統(tǒng)的研制`
[0026]光電掃描處理系統(tǒng)由光機(jī)模組和光電電路兩部分組成,發(fā)光二極管通過勻光玻璃照射到PCT免疫層析定量檢測(cè)試劑的色帶區(qū)上,兩條色帶反射的光經(jīng)聚光片、透鏡聚焦到傳感器件上,從而實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)采集和光電信號(hào)的轉(zhuǎn)換。主板電路負(fù)責(zé)將光電掃描處理系統(tǒng)收集的光電信號(hào)進(jìn)行數(shù)字處理及計(jì)算,最后將處理的一些結(jié)果通過液晶屏顯示出來,即可實(shí)現(xiàn)對(duì)PCT的定量測(cè)定。
【權(quán)利要求】
1.一種膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng),其特征在于:該系統(tǒng)由激光發(fā)射光源、光學(xué)系統(tǒng)、計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)、可充電電池、微型打印機(jī)、液晶顯示屏以及配套的層析試紙條組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金免疫層析試紙檢測(cè)系統(tǒng),其特征在于,所述的檢測(cè)系統(tǒng)還包括實(shí)時(shí)存儲(chǔ)器和打印裝置。
【文檔編號(hào)】G01N21/78GK103698323SQ201310381330
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年8月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月24日
【發(fā)明者】管義東 申請(qǐng)人:管義東