一種海參多糖的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種海參多糖的檢測方法，包括如下步驟：（1）堿性蛋白酶酶解法制備海參供試液；（2）以天青Ⅰ試劑為染色劑、以海刺參粘多糖為標準物質(zhì)，制備海參多糖標準曲線；（3）以天青Ⅰ試劑為染色劑測定試樣，利用標準曲線方程計算出海參多糖相對應的質(zhì)量數(shù)，再計算供試液中海參多糖的濃度。本發(fā)明的方法靈敏、準確，可用在日常的產(chǎn)品監(jiān)測中。
【專利說明】一種海參多糖的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品化學分析領(lǐng)域，具體涉及一種海參多糖的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]海參市場的開發(fā)已經(jīng)初具規(guī)模，產(chǎn)品形式也多種多樣，但是在海參指標成分(例如海參多糖)的檢測上，尚沒有統(tǒng)一、靈敏的檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種針對海參多糖的檢測方法。
[0004]本發(fā)明的海參多糖的檢測方法包括如下步驟:
[0005]( I)制備海參供試液
[0006]稱取2g液體樣品或粉碎后的固體樣品置于500ml的塑料離心管中，加入IOOml去離子水，混合均勻，放入已恒溫105°C的干燥箱中加熱lh，取出冷卻至室溫后，加入0.2ml堿性蛋白酶，搖勻，室溫下酶解lh，放入100°C水浴鍋中，滅活酶IOmin后，12000r/min高速離心30min，將離心液全部倒入量器中量取體積，移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去離子水定容至刻度；
[0007](2)制備海參多糖標準曲線
[0008]準確稱取250mg天青I溶于250ml去離子水中，溶解搖勻，得到lmg/ml的天青I儲備液，將天青I儲備液與去離子水按體積比1:29混合均勻，調(diào)節(jié)使其最大吸光度A=2.1?2.2，置于冰箱中冷藏保存，得到天青I試液；
[0009]準確稱取0.4mg海刺參粘多糖標準物質(zhì)溶于2ml去離子水中，溶解搖勻，置于冰箱中冷藏保存，得到0.2mg/ml的標準試液；
[0010]在7個IOml試管中，分別加入標準試液O、5、10、20、30、40、50 μ I，將溶液體積不足50 μ I的試管補加入水,使每支試管中的溶液體積均為50 μ I,然后加入Iml天青I試液，混勻立即測定其吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I試液的吸光度為對照，平行做三組，取其算術(shù)平均值，以標準試液中海刺參粘多糖質(zhì)量μ g與其相應的吸光度做直線回歸，得到標準曲線；
[0011](3)測定試樣
[0012]移取海參供試液50 μ I于試管中，加入Iml天青I試液，混勻立即測定其吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I試液的吸光度為對照，利用標準曲線方程計算出海參多糖相對應的質(zhì)量數(shù)，再計算供試液中海參多糖的濃度。
[0013]本發(fā)明的原理如下:海參樣品經(jīng)酶解、離心分離后，酶解液用天青I試劑染色，其吸光度(510nm)在一定濃度范圍內(nèi)與多糖質(zhì)量成正比，以標準多糖溶液做對照，就可采用分光光度法測得供試品中多糖的含量。
[0014]本發(fā)明的方法靈敏、準確，可用在日常的產(chǎn)品監(jiān)測中?！揪唧w實施方式】
[0015]下面結(jié)合實施例說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。
[0016]1.試劑與標準物質(zhì)
[0017]⑴天青1:生物染色劑
[0018]⑵標準物質(zhì):海刺參粘多糖
[0019]⑶天青I儲備液(lmg/ml):稱取天青I 250mg (準確至0.0lmg)溶于250ml去離子水中，溶解搖勻，放入冰箱中冷藏保存。
[0020]⑷天青I試液:天青I儲備液與去離子水按1:29 (V/V)比例混合均勻，調(diào)節(jié)使其最大吸光度在A=2.1?2.2之間，置于冰箱中冷藏保存。
[0021](5)標準試液(0.2mg/ml):準確稱取海刺參粘多糖標準物質(zhì)0.4mg(準確至0.0OOlg)溶于2ml去離子水中，溶解后搖勻，置于冰箱中冷藏保存。
[0022]2.儀器
[0023]⑴紫外分光光度計(UV)
[0024](2)比色皿:ImmX Icm 或 IcmX Icm
[0025]⑶試管:10ml
[0026]⑷分析天平:感量0.lmg、0.0lmg
[0027](5)微量定量針:100 μ 1、50 μ 1、25 μ I
[0028](6)離心機:500ml 最大轉(zhuǎn)速為 12000r/min
[0029](7)水浴鍋
[0030]⑶恒溫干燥箱
[0031]3.試樣制備
[0032]3.1將樣品粉碎(液體除外)，稱取2g (精確至0.0Olg)置于500ml的塑料離心管中，加入IOOml去離子水，混合均勻，放入已恒溫105°C的干燥箱中加熱lh。取出冷卻至室溫，加入0.2ml堿性蛋白酶,搖勻，室溫下酶解Ih,放入100°C水浴鍋中，滅活酶IOmin后，12000r/min高速離心30min。將離心清液全部倒入量器中量取體積V。
[0033]3.2移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去離子水定容至刻度。
[0034]4.測定步驟
[0035]4.1標準曲線的制備
[0036]在7個IOml試管中，分別加入標準試液O、5、10、20、30、40、50 μ I，在溶液體積不足
50 μ I的試管中補加入水，使每支試管中的溶液體積相同。然后加入Iml天青I試液，混勻立即測定其吸光度值，以空白50μ I水加入Iml天青I試液的吸光度為對照，平行做三組，取其算術(shù)平均值，以標準試液中多糖質(zhì)量(μ g)與其相應的吸光度做直線回歸，相關(guān)系數(shù)不低于0.99。
[0037]4.2試樣的測定
[0038]移取試樣50 μ I于試管中，加入Iml天青I試液，混合均勻立即讀取吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I試液的吸光度為對照。利用回歸方程計算出相對應的質(zhì)量數(shù)，再計算樣品中海參粘多糖的含量。
【權(quán)利要求】
1.一種海參多糖的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)制備海參供試液 稱取2g液體樣品或粉碎后的固體樣品置于500ml的塑料離心管中，加入IOOml去離子水，混合均勻，放入已恒溫105°C的干燥箱中加熱lh，取出冷卻至室溫后，加入0.2ml堿性蛋白酶，搖勻，室溫下酶解lh，放入100°C水浴鍋中，滅活酶IOmin后，12000r/min高速離心30min，將離心液全部倒入量器中量取體積，移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去離子水定容至刻度； (2)制備海參多糖標準曲線 準確稱取250mg天青I溶于250ml去離子水中，溶解搖勻，得到lmg/ml的天青I儲備液，將天青I儲備液與去離子水按體積比1:29混合均勻，調(diào)節(jié)使其最大吸光度A=2.1~2.2，置于冰箱中冷藏保存，得到天青I試液； 準確稱取0.4mg海刺參粘多糖標準物質(zhì)溶于2ml去離子水中，溶解搖勻，置于冰箱中冷藏保存，得到0.2mg/ml的標準試液； 在7個IOml試管中，分別加入標準試液0、5、10、20、30、40、5μl，將溶液體積不足50 μ I的試管補加入水,使每支試管中的溶液體積均為50 μ I,然后加入Iml天青I試液,混勻立即測定其吸光度值，以空白50 μ I水加入Iml天青I試液的吸光度為對照，平行做三組，取其算術(shù)平均值，以標準試液中海刺參粘多糖質(zhì)量μ g與其相應的吸光度做直線回歸，得到標準曲線； (3)測定試樣 移取海參供試液50 μ I于試管中，加入Iml天青I試液，混勻立即測定其吸光度值，以空白50μ I水加入Iml天青I試液的吸光度為對照，利用標準曲線方程計算出海參多糖相對應的質(zhì)量數(shù)，再計算供試液中海參多糖的濃度。
【文檔編號】G01N21/78GK103454270SQ201310412043
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月11日
【發(fā)明者】焦健, 邵俊杰 申請人:大連海晏堂生物有限公司