一種復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種中藥復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，該方法色譜條件：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相A為0.01mol/L～1mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～1mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1%～5%甲酸溶液或0.02%～5%磷酸溶液；B為乙腈或甲醇；梯度洗脫，流速為0.5～1.5ml/min、檢測波長為190～410nm，柱溫25～55℃。該方法精密度較高，穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，能更全面、有效的控制制劑的質(zhì)量。
【專利說明】一種復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量控制【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，本發(fā)明涉及一種復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]復(fù)方阿膠漿是一種補(bǔ)氣養(yǎng)血的中成藥，在我國以應(yīng)用多年。該制劑由下述原料藥制成，阿膠5份、紅參6份、熟地8份、黨參12份、山楂5份，將上述各組分制成本發(fā)明藥物的制備方法如下:
[0003]①按照上述用量稱取原料中藥材；
[0004]②上述原料中藥材加適量水提取、濃縮、過濾，備用；
[0005]③阿膠加適量水溶化，加入步驟②的藥液中，充分混勻，備用。
[0006]④在步驟③中加入適量的白糖，加熱使溶解，混勻，既得口服液。
[0007]步驟③所得混合溶液，加入藥學(xué)上可接受的輔料和/或賦形劑，采用現(xiàn)代工藝還可制成臨床可接受的任何劑型，如片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等。
[0008]目前，對該制劑的檢測，一般僅以Rgl、Re、Rbl、總氮為檢測指標(biāo)，但是它根本不能全面反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量，僅以此來控制中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量不是十分合理；如果用別的指標(biāo)進(jìn)行控制，一是含量成分較低，二是目前沒有現(xiàn)成的檢測方法和檢測條件，比較難于建立合適的檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法及其檢測指標(biāo)。
[0010]該復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，包括以下步驟:
[0011](I)供試品溶液的制備:精密稱取待測復(fù)方阿膠制劑，加水溶解，加0.5?3倍量乙酸乙酯、0.5?3倍量正丁醇提取，取上清液，慮過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0012](2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸用水或甲醇或乙醇溶解，定容，作為參照物溶液；
[0013](3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相A為0.0lmol/L?lmol/L磷酸二氫鈉溶液或0.0lmol/L?lmol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1%?5%甲酸溶液或0.02%?5%磷酸溶液；B為乙腈或甲醇；
[0014]梯度洗脫，流速為0.5?1.5ml/min、檢測波長為190?410nm,柱溫25?55°C ；
[0015](4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定:以上述方法作為制定以紅參、黨參、熟地黃、山楂一種或幾種成分為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其他共有色譜峰的相對保留時(shí)間，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過±20% ；
[0016](5)以(I)?(3)所述方法檢測待測復(fù)方阿膠制劑，制備待測樣品的指紋圖譜；
[0017](6)將待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求的部分或全部:
[0018]1.計(jì)算待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.8?
1.00 ；
[0019]I1.待測復(fù)方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的15% ；
[0020]II1.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20%。
[0021]優(yōu)選的，該復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法包括以下步驟:
[0022](I)供試品溶液的制備:精密稱取待測復(fù)方阿膠制劑，加水溶解，加四倍量配比為2:1的乙酸乙酯-正丁醇溶液提取，取上清液，用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0023](2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液；
[0024](3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相為A為
0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液；B為乙腈；梯度洗脫，溶劑比例為從O分鐘至10分鐘，流動相B比例為0，從10分鐘至33分鐘，流動相B的比例由O至12%，從33分鐘至51分鐘，流動相B的比例由12%升至16%，從51分鐘至68分鐘，流動相B的比例由16%升至30%,從68分鐘至80分鐘，流動相B的比例由30%升至50%,流速為1.0ml/min、檢測波長為203 +Inm,柱溫，35。。；
[0025](4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定:精密吸取參照物溶液與供試品溶液各15 μ 1，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定指紋圖譜，共有峰8?25個(gè)，以確定的參照物色譜峰保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其他共有色譜峰的相對保留時(shí)間，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過±10%;
[0026](5)以(I)?(3)所述方法作為待測復(fù)方阿膠制劑中紅參、黨參、熟地黃、山楂中一種或幾種成分為主的指紋圖譜測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；
[0027](6)將待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求的部分或全部:
[0028]1.計(jì)算待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.9?
1.0O ；
[0029]I1.待測復(fù)方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10% ；
[0030]II1.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10%。
[0031]該復(fù)方阿膠制劑可以為口服液、片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑等。
[0032]有益效果
[0033]該檢測方法包括該組方制劑中紅參、黨參、熟地黃、山楂的指紋圖譜測試方法及其主要代表成分人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸的含量測定方法，通過指紋圖譜得到量化參數(shù)，方法精密度較高，穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，能更全面、有效的控制制劑的質(zhì)量。本發(fā)明的測定方法與現(xiàn)有方法相比較，檢測更加準(zhǔn)確，操作更加簡便，有效的縮短了檢測時(shí)間?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0034]圖1，0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液作流動相的液相色譜圖
[0035]圖2，復(fù)方阿膠制劑在203nm下的液相色譜圖
[0036]圖3，復(fù)方阿膠制劑160分鐘色譜圖
[0037]圖4，復(fù)方阿膠制劑標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜
【具體實(shí)施方式】
[0038]實(shí)施例1:復(fù)方阿膠制劑指紋圖譜
[0039](I)實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品
[0040]對照品:人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花
[0041]糖昔、綠原Ife (中國藥品生物制品檢定研究院)
[0042]儀器:AgilentllOO型高效液相色譜儀
[0043](2)色譜系統(tǒng)及實(shí)應(yīng)性試驗(yàn)
[0044]①流動相的選擇
[0045]該復(fù)方阿膠制劑的主藥成分是紅參、黨參、山楂、熟地黃和阿膠的水提取物，成分復(fù)雜，有必要應(yīng)用梯度分離方法使主要成分在盡可能短的洗脫時(shí)間內(nèi)得到較好的分離，采用乙腈為流動相，是為了減少梯度洗脫過程中的基線漂移，有考慮到流動相中適量添加鹽可以改善分離效果，所以又考察了 0.025%磷酸鹽溶液、0.033%磷酸鹽溶液、0.5%甲酸溶液以及0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液作為流動相。結(jié)果，應(yīng)用0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相色譜峰分離度較好，確定應(yīng)用0.03mol/磷酸二氫鉀溶液為流動相。0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液作流動相的液相色譜圖見圖1.[0046]②波長選擇
[0047]該復(fù)方阿膠制劑中含有皂苷、黃酮、有機(jī)酸等有紫外吸收的成分，所以供選擇了203nm、215nm、254那么、280nm及350nm進(jìn)行對比試驗(yàn)，結(jié)果在350nm和280nm處吸收很弱，峰數(shù)較少；254nm和215nm處基線較平穩(wěn)，峰的數(shù)目也較多，但峰高比例差異較大；203nm下的色譜峰響應(yīng)值和各峰峰高比例也較合適，所有確定203nm為檢測波長。復(fù)方阿膠制劑在203nm下的液相色譜圖見圖2
[0048]③梯度時(shí)間的設(shè)定
[0049]考慮到該復(fù)方阿膠制劑成分復(fù)雜，不同成分極性差異較大，設(shè)定乙腈的起始濃度為0，O?80分鐘進(jìn)行梯度洗脫，是為了此段色譜峰盡可能的有效分離，在此條件下可使大部分色譜峰達(dá)到較好的分離，保留時(shí)間適中，且在80分鐘后無其他色譜峰。具體情況見圖3
[0050]④儀器及積分參數(shù)
[0051]儀器參數(shù):Agilentll00型高效液相色譜儀,Chemstation色譜工作站。柱溫35°C,流速1.0ml/min。積分參數(shù):最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的10%，最小峰高為S峰峰高的10%。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于1%)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
[0052]⑤供試品溶液的制備
[0053]供試品溶液的制備:取待測復(fù)方制劑，加四倍量乙酸乙酯:正丁醇(2:1)提取，取上清液，用微孔濾膜(0.45 μ m)慮過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。⑥參照物溶液的制備
[0054]人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb 1、人參皂苷Rd、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸適量，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液。
[0055]⑦指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)
[0056]根據(jù)16批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度在0.90?1.00之間。復(fù)方阿膠制劑標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜見圖4。
【權(quán)利要求】
1.一種復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:精密稱取待測復(fù)方阿膠制劑，加水溶解，加0.5~3倍量乙酸乙酯、0.5~3倍量正丁醇提取，取上清液，慮過，取續(xù)濾液作為供試品溶液； (2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸用水或甲醇或乙醇溶解，定容，作為參照物溶液； (3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相A為0.01mol/L~lmol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L~lmol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1%~5%甲酸溶液或0.02%~5%磷酸溶液；B為乙腈或甲醇； 梯度洗脫，流速為0.5~1.5ml/min、檢測波長為190~410nm，柱溫25~55°C ； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定:以上述方法作為制定以紅參、黨參、熟地黃、山楂一種或幾種成分為主的指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其他共有色譜峰的相對保留時(shí)間，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過±20% ； (5)以(I)~(3)所述方法檢測待測復(fù)方阿膠制劑，制備待測樣品的指紋圖譜； (6)將待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求的部分或全部: I.計(jì)算待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.8~1.00; II.待測復(fù)方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的15%; III.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±20%。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜檢測方法，其特征在于包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:精密稱取待測復(fù)方阿膠制劑，加水溶解，加四倍量配比為2:1的乙酸乙酯-正丁醇溶液提取，取上清液，用孔徑為0.45 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液； (2)對照品溶液的制備:分別精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re、黨參炔苷、毛蕊花糖苷、綠原酸，加甲醇制成每Iml含0.2mg的溶液，作為參照物溶液； (3)色譜條件:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑色譜柱；流動相為A為0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液為乙腈；梯度洗脫，溶劑比例為從O分鐘至10分鐘，流動相B比例為0，從10分鐘至33分鐘，流動相B的比例由O至12%，從33分鐘至51分鐘，流動相B的比例由12%升至16%，從51分鐘至68分鐘，流動相B的比例由16%升至30%,從68分鐘至80分鐘，流動相B的比例由30%升至50%，流速為1.0ml/min、檢測波長為203±lnm，柱溫，35°C ； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定:精密吸取參照物溶液與供試品溶液各15μ 1，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定指紋圖譜，共有峰8~25個(gè)，以確定的參照物色譜峰保留時(shí)間為基準(zhǔn)，計(jì)算其他共有色譜峰的相對保留時(shí)間，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過±10%; (5)以(I)~(3)所述方法作為待測復(fù)方阿膠制劑中紅參、黨參、熟地黃、山楂中一種或幾種成分為主的指紋圖譜測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜； (6)將待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，應(yīng)符合下列要求的部分或全部:I.計(jì)算待測復(fù)方阿膠制劑的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度，應(yīng)為0.9~1.0; II.待測復(fù)方阿膠制劑指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10%; II1.除參照物色譜峰之外的其他共有峰與參照物色譜峰的相對保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相比，相對偏差不得超過±10%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于，所述的復(fù)方阿膠制劑為口服液、片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑。
【文檔編號】G01N30/02GK103645251SQ201310491335
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年10月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月18日
【發(fā)明者】周祥山, 王春艷, 張淹, 李士棟, 陳慧慧, 張路 申請人:山東東阿阿膠股份有限公司