一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，特別涉及一種人絨毛膜促性腺激素（HCG）和細(xì)菌性陰道炎（BV）聯(lián)檢試劑盒，屬于檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。其包括HCG免疫層析檢測(cè)試紙條，以及pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中一種或多種，較佳地，免疫層析檢測(cè)試紙條的結(jié)合墊和層析膜上分別包被相應(yīng)的免疫標(biāo)記抗體和檢測(cè)抗體，免疫層析檢測(cè)試紙條與pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中一種或多種并列設(shè)置或置于底板的上下表面，本發(fā)明可以通過自我取樣，同時(shí)檢測(cè)HCG和細(xì)菌性陰道炎，其聯(lián)檢結(jié)果為優(yōu)生優(yōu)育提供有力證據(jù)，簡(jiǎn)單方便，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。
【專利說明】一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，特別涉及一種人絨毛膜促性腺激素(HCG)和細(xì)菌性陰道炎(BV)聯(lián)檢試劑盒，屬于檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]人絨毛膜促性腺激素(HCG)，是由胎盆合體滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的一種具有促進(jìn)性腺發(fā)育的糖蛋白激素，存在于孕婦的血液、尿液、初乳、羊水和胎兒體內(nèi)，在妊娠早期HCG分泌量增高極快，至妊娠8-10周時(shí)血清濃度達(dá)到高峰，在妊娠初期，規(guī)則HCG在血清中比例最高，其含量在血、尿中基本平行，HCG相關(guān)分子的測(cè)定在臨床上有廣泛應(yīng)用，包括:用于早期妊娠的診斷；提示異常妊娠的出現(xiàn)(如先兆流產(chǎn)、唐氏綜合征等)；診斷和監(jiān)測(cè)妊娠滋養(yǎng)層疾病(葡萄胎、絨癌等)等。
[0003]細(xì)菌性陰道炎(BV)是指一類在細(xì)菌學(xué)上表現(xiàn)為生殖道正常菌群(產(chǎn)H2O2的乳酸桿菌)數(shù)量減少，代之以一組厭氧群(類桿菌屬族、加德納菌、莫比倫氏菌屬、人型支原體屬和消化鏈球菌屬等)數(shù)量增加所致的臨床癥侯群。BV對(duì)母親和胎兒及嬰兒的健康可引起嚴(yán)重后果，如:宮腔感染，盆腔感染及絨毛羊膜感染，產(chǎn)后感染，先兆流產(chǎn)，早產(chǎn)，胎膜早破，低體重兒等，因而對(duì)其的準(zhǔn)確診斷具有非常重要的意義。臨床的標(biāo)準(zhǔn)是Amsel金標(biāo)準(zhǔn):①陰道分泌物呈乳液狀；②pH>4.5;③胺試驗(yàn)陽性；④陰道分泌物中檢出線索細(xì)胞(>20%)。如果④陰性，但涂片革蘭氏染色可見大量革蘭氏陰性球桿菌，無或偶見乳酸菌亦可判為BV陽性。上述方法均對(duì)檢驗(yàn)人員有經(jīng)驗(yàn)要求，診斷標(biāo)準(zhǔn)不易掌握，需要顯微鏡涂片，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不便于門診臨床快速檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，提供一種人絨毛膜促性腺激素(HCG)和細(xì)菌性陰道炎(BV)聯(lián)檢試劑盒，通過自我取樣，可以快速檢測(cè)細(xì)菌性陰道炎，同時(shí)可以準(zhǔn)確判別是否有早期妊娠。
[0005]按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板，在第一底板的一面上設(shè)置有層析膜，層析膜的前端設(shè)置不透明保護(hù)膜，不透明保護(hù)膜的前端設(shè)置箭頭；箭頭的前端設(shè)置結(jié)合墊；層析膜上還依次設(shè)置有檢測(cè)線和質(zhì)控線，層析膜后端設(shè)置有吸水墊。
[0006]還包括感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)。
[0007]所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)附著于第二底板上或復(fù)合于第一底板的任意一個(gè)表面上。
[0008]在第一底板的一面上設(shè)置有層析膜，層析膜的前端設(shè)置結(jié)合墊，結(jié)合墊的前方還設(shè)置樣品墊；層析膜上還依次設(shè)置有檢測(cè)線和質(zhì)控線，層析膜后端設(shè)置有吸水墊；第一底板的下表面上還設(shè)置有感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)。
[0009]所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)設(shè)置有pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中的一種或幾種。[0010]所述附著pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的第一底板或第二底板的材料為PET、PVC、PE、PP或PS中的一種，長(zhǎng)為10_300mm，寬 2-30mm,厚度為 0.1-1.5mm。
[0011]所述pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的基礎(chǔ)材料為纖維素濾紙，玻璃纖維濾紙，層析紙，聚酯膜或尼龍膜；所述試紙的形狀為正方形，長(zhǎng)方形，圓形，橢圓形，三角形，菱形或梯形；大小為長(zhǎng)1-30 mm;寬1-30 mm ;厚度
0.01-5 mm ;多種試紙之間的間距為1-30 mm。
[0012]所述結(jié)合墊(I)上包被有抗人絨毛膜促性腺激素HCG金標(biāo)記抗體。
[0013]所述層析膜(6)上包被有抗人絨毛膜促性腺激素HCG檢測(cè)抗體。
[0014]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明可以通過自我取樣，可以快速檢測(cè)細(xì)菌性陰道炎，同時(shí)可以準(zhǔn)確判別是否有早期妊娠，簡(jiǎn)單方便，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是實(shí)施例1第一底板10結(jié)構(gòu)示意圖。
[0016]圖2是實(shí)施例1第二底板11結(jié)構(gòu)示意圖。
[0017]圖3是實(shí)施例2結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018]圖4是實(shí)施例3結(jié)構(gòu)示意圖。
[0019]圖5是實(shí)施例4結(jié)構(gòu)示意圖。
[0020]圖6是實(shí)施例1感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
[0021]圖7是實(shí)施例2感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
[0022]圖8是實(shí)施例3感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
[0023]圖9是實(shí)施例4感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]實(shí)施例1
如圖1、2、5所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置不透明保護(hù)膜3，不透明保護(hù)膜3的前端設(shè)置箭頭2 ;箭頭2的前端設(shè)置結(jié)合墊I ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測(cè)線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7。
[0025]還包括感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8。所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8附著于第一底板10的上表面。
[0026]所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8設(shè)置有所述pH試紙。所述的HCG免疫層析檢測(cè)試紙條，以及泌尿系統(tǒng)感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)，包括所述PH試紙，以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板10的上表面。
[0027]實(shí)施例2
如圖3、7所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置不透明保護(hù)膜3，不透明保護(hù)膜3的前端設(shè)置箭頭2 ;箭頭2的前端設(shè)置結(jié)合墊I ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測(cè)線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7。
[0028]還包括感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8。所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8附著于第二底板11上。[0029]所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8設(shè)置有唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，。以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板的上表面，且與HCG免疫層析檢測(cè)試紙條并列設(shè)置于卡槽上。
[0030]實(shí)施例3
如圖4、8所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置結(jié)合墊1，結(jié)合墊I的前方還設(shè)置樣品墊9 ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測(cè)線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7 ;第一底板10的下表面上還設(shè)置有感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8。
[0031]所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8附著于第一底板10的下表面上。
[0032]所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8設(shè)置有唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙，以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板的表面，且與HCG免疫層析檢測(cè)試紙分別置于底板的上下表面。
[0033]實(shí)施例4
如圖5、9所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置不透明保護(hù)膜3，不透明保護(hù)膜3的前端設(shè)置箭頭2 ;箭頭2的前端設(shè)置結(jié)合墊I ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測(cè)線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7。所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8附著于第二底板11上。
[0034]在實(shí)施例1-4中，所述HCG免疫標(biāo)記抗體是抗人HCG膠體金免疫標(biāo)記抗體,所述HCG檢測(cè)抗體是抗人HCG檢測(cè)抗體，其中的抗人HCG膠體金免疫標(biāo)記抗體和抗人HCG檢測(cè)抗體結(jié)合人HCG的不同部位；
所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)8設(shè)置有唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙，以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板的上表面，且與HCG免疫層析檢測(cè)試紙置于可拆卸的卡槽上。
[0035]所述pH試紙為將空白濾紙?jiān)诩谆群弯寮追泳G組成的溶液中浸泡后干燥處理，所述甲基橙在溶液中的濃度為10-600 mg/L，所述溴甲酚綠在溶液中的濃度為10-300 mg/L ；
所述唾液酸酶檢測(cè)試紙為將空白濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酰基神經(jīng)氨酸鹽，氯化硝基四氮唑藍(lán)，海藻糖和PBS緩沖液組成的溶液中浸泡后干燥處理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽在溶液中的濃度為5-200 mg/L,所述氯化硝基四氮唑藍(lán)在溶液中的濃度為10-500 mg/L，所述海藻糖在在溶液中的濃度為200-10000 mg/L，所述PBS的pH值為6.5，摩爾濃度為0.01-1 M ；
所述白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙為將空白濾紙?jiān)?-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽和蔗糖組成的溶液中浸泡后干燥處理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽在溶液中的濃度為40-1000 mg/L，所述蔗糖在溶液中的濃度為200-10000 mg/L ；
所述過氧化氫檢測(cè)試紙為將空白濾紙?jiān)谶^氧化物酶，表面活性劑和四甲基聯(lián)苯胺(TMB)組成的酶溶液中浸泡后干燥處理，所述過氧化物酶在溶液中的濃度為1.0-3.0X IO5U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.1-10%, TMB在酶溶液中的濃度為200-1000mg/L ；所述胺試紙為將空白濾紙?jiān)跉溲趸浫芤褐薪莺蟾稍锾幚淼脑噭KA粘貼于在溴甲酚綠和Triton X-100溶液中浸泡后干燥處理的試劑塊B，其中A試劑塊中氫氧化鉀濃度為 400-10000 mg/L，B 試劑塊中溴甲酚綠濃度為 100-1000，Triton X-100 為 0.1-10 %。
[0036]樣本稀釋液為0.9 % NaCl。
[0037]應(yīng)用實(shí)施例1
使用本發(fā)明人絨毛膜促性腺激素(HCG)和細(xì)菌性陰道炎(BV)聯(lián)檢試劑盒的操作步驟如下:
(1)用棉簽從陰道后穹窿取分泌物先直接涂在PH試紙上；
(2)再用棉簽從陰道后穹窿取分泌物，加入300^500μ L的樣本稀釋液稀釋分泌物；
(3)分別在HCG免疫層析檢測(cè)試紙條，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙上滴加適量的稀釋的分泌物。
[0038](4)將試紙條在室溫下靜置10分鐘左右或在37°C恒溫箱中靜置10分鐘左右后目視比色。
[0039]判讀結(jié)果:檢測(cè)時(shí)如果HCG免疫層析檢測(cè)試紙條C區(qū)出現(xiàn)條帶，則T區(qū)出現(xiàn)條帶即表示樣品為陽性，未出現(xiàn)條帶則表示陰性；如果C區(qū)未出現(xiàn)條帶，則表示試紙條失效。pH試紙出現(xiàn)紅色或淺綠表示正常，出現(xiàn)深綠色表示不正常。唾液酸酶檢測(cè)試紙不顯色表示正常，出現(xiàn)紫色或褐色表示不正常。白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙不顯色表示正常，出現(xiàn)藍(lán)色或綠色表示不正常。過氧化氫檢測(cè)試紙出現(xiàn)藍(lán)色表示正常，不顯色表示不正常。胺試紙不顯色表示正常，出現(xiàn)綠色表示不正常。
[0040]制備實(shí)施例1
用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金標(biāo)記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入`0.25 mL, 6.6 mg/mL待標(biāo)記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 mindfl2.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0041]用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金墊的噴點(diǎn)方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為8 μ L /cm ;1號(hào)管道為噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將金標(biāo)墊按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的金標(biāo)墊，噴點(diǎn)的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)金標(biāo)墊的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片金標(biāo)墊，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點(diǎn)一次(一片)；噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的金標(biāo)墊置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0042]用于HCG檢測(cè)的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記T標(biāo)志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記C標(biāo)志；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為I μ L/cm, I號(hào)管道為檢測(cè)帶噴點(diǎn)通道，2號(hào)管道為對(duì)照帶噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于檢測(cè)帶溶液中，將2號(hào)管道置于對(duì)照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的層析膜，檢測(cè)帶和對(duì)照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)層析膜的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“GO”鍵為噴點(diǎn)一次(一片);噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的層析膜置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0043]將底板上較寬部分的保護(hù)紙除去，沿上面保護(hù)紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護(hù)紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護(hù)紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機(jī)電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機(jī)平臺(tái)軌道中，正面朝上，按操作面板上“G0”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。
[0044]pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0045]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
唾液酸酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍(lán)濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的pH值為6.5，摩爾濃度為0.01 M的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300 mg/L，蔗糖濃度為2000 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
過氧化氫檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-100為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
分別將PH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入方式粘貼固定于透明的PVC片上，各試紙間距為5 mm,切成邊長(zhǎng)為4 mm的試紙條即成。
[0046]制備實(shí)施例2
用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金標(biāo)記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入0.25 mL ,6.6 mg/mL待標(biāo)記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min;將12.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000 g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0047]用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金墊的噴點(diǎn)方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為8 μ L/cm ;1號(hào)管道為噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將金標(biāo)墊按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的金標(biāo)墊，噴點(diǎn)的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)金標(biāo)墊的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片金標(biāo)墊，按一次控制面板上的“GO”鍵為噴點(diǎn)一次(一片)；噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的金標(biāo)墊置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0048]用于HCG檢測(cè)的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug,加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記T標(biāo)志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記C標(biāo)志；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為I μ L/cm, I號(hào)管道為檢測(cè)帶噴點(diǎn)通道，2號(hào)管道為對(duì)照帶噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于檢測(cè)帶溶液中，將2號(hào)管道置于對(duì)照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的層析膜，檢測(cè)帶和對(duì)照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)層析膜的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點(diǎn)一次(一片);噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的層析膜置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0049]將底板上較寬部分的保護(hù)紙除去，沿上面保護(hù)紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護(hù)紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護(hù)紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機(jī)電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機(jī)平臺(tái)軌道中，正面朝上，按操作面板上“G0”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。
[0050]pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0051]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
唾液酸酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍(lán)濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的pH值為6.5，摩爾濃度為0.01 M的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300 mg/L，蔗糖濃度為2000 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
過氧化氫檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-100為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
將切割好的PH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入的方式置于透明PVC底板上，且與HCG免疫層析檢測(cè)試紙條并列設(shè)置于卡槽上。
[0052]制備實(shí)施例3
用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金標(biāo)記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入0.25 mL ,6.6 mg/mL待標(biāo)記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ;將12.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000 g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0053]用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金墊的噴點(diǎn)方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為8 μ L/cm ;1號(hào)管道為噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將金標(biāo)墊按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的金標(biāo)墊，噴點(diǎn)的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)金標(biāo)墊的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片金標(biāo)墊，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點(diǎn)一次(一片)；噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的金標(biāo)墊置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0054]用于HCG檢測(cè)的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug,加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記T標(biāo)志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記C標(biāo)志；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為I μ L/cm, I號(hào)管道為檢測(cè)帶噴點(diǎn)通道，2號(hào)管道為對(duì)照帶噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于檢測(cè)帶溶液中，將2號(hào)管道置于對(duì)照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的層析膜，檢測(cè)帶和對(duì)照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)層析膜的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點(diǎn)一次(一片);噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的層析膜置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0055]將底板上較寬部分的保護(hù)紙除去，沿上面保護(hù)紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護(hù)紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護(hù)紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機(jī)電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機(jī)平臺(tái)軌道中，正面朝上，按操作面板上“G0”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。
[0056]pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0057]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
唾液酸酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍(lán)濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的pH值為6.5，摩爾濃度為0.01 M的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300 mg/L，蔗糖濃度為2000 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
過氧化氫檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-100為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
將切割好的PH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入的方式置于透明PVC底板上，且與HCG免疫層析檢測(cè)試紙條分別置于底板的上下表面。
[0058]制備實(shí)施例4
用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金標(biāo)記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入0.25 mL ,6.6 mg/mL待標(biāo)記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ;將12.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000 g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0059]用于HCG檢測(cè)的抗體膠體金墊的噴點(diǎn)方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為8 μ L/cm ;1號(hào)管道為噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將金標(biāo)墊按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的金標(biāo)墊，噴點(diǎn)的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)金標(biāo)墊的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片金標(biāo)墊，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點(diǎn)一次(一片)；噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的金標(biāo)墊置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0060]用于HCG檢測(cè)的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug,加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記T標(biāo)志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標(biāo)記C標(biāo)志；開啟點(diǎn)膜儀的電源，設(shè)定噴點(diǎn)程序，噴點(diǎn)量為I μ L/cm, I號(hào)管道為檢測(cè)帶噴點(diǎn)通道，2號(hào)管道為對(duì)照帶噴點(diǎn)通道；將I號(hào)管道置于檢測(cè)帶溶液中，將2號(hào)管道置于對(duì)照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個(gè)循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點(diǎn)膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點(diǎn)，點(diǎn)完后取下，檢查噴點(diǎn)好的層析膜，檢測(cè)帶和對(duì)照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個(gè)層析膜的直線為合格噴點(diǎn)品，兩條直線中出現(xiàn)斷點(diǎn)為不合格噴點(diǎn)品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點(diǎn)一次(一片);噴點(diǎn)結(jié)束，將噴點(diǎn)的層析膜置于室溫中自然干燥I個(gè)小時(shí)，膜上應(yīng)看不到噴點(diǎn)痕跡。
[0061]將底板上較寬部分的保護(hù)紙除去，沿上面保護(hù)紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護(hù)紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護(hù)紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機(jī)電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機(jī)平臺(tái)軌道中，正面朝上，按操作面板上“G0”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。[0062]pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0063]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
唾液酸酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍(lán)濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的pH值為6.5，摩爾濃度為0.01 M的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300 mg/L，蔗糖濃度為2000 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
過氧化氫檢測(cè)試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-100為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機(jī)切成邊長(zhǎng)為4 mm的正方形；
將切割好的PH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入的方式置于透明PVC底板上，且與HCG免疫層析檢測(cè)試紙條設(shè)置于可拆卸的卡槽上。
【權(quán)利要求】
1.一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板(10)，其特征是:在第一底板(10)的一面上設(shè)置有層析膜(6)，層析膜(6)的前端設(shè)置不透明保護(hù)膜(3)，不透明保護(hù)膜(3)的前端設(shè)置箭頭(2);箭頭(2)的前端設(shè)置結(jié)合墊(I);層析膜(6)上還依次設(shè)置有檢測(cè)線(4)和質(zhì)控線(5)，層析膜(6)后端設(shè)置有吸水墊(7)。
2.如權(quán)利要求1所述人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，其特征是:還包括感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)(8 )。
3.如權(quán)利要求2所述人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，其特征是:所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)(8 )附著于第二底板(11)上或復(fù)合于第一底板(10 )的任意一個(gè)表面上。
4.一種人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板(10)，其特征是:在第一底板(10)的一面上設(shè)置有層析膜(6)，層析膜(6)的前端設(shè)置結(jié)合墊(1)，結(jié)合墊(I)的前方還設(shè)置樣品墊(9);層析膜(6)上還依次設(shè)置有檢測(cè)線(4)和質(zhì)控線(5)，層析膜(6)后端設(shè)置有吸水墊(7);第一底板(10)的下表面上還設(shè)置有感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)(8)。
5.如權(quán)利要求2或4所述人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，其特征是:所述感染指標(biāo)檢測(cè)區(qū)(8)設(shè)置有pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙中的一種或幾種。
6.如權(quán)利要求5所述人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，其特征是:所述附著PH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的第一底板(10)或第二底板(11)的材料為PET、PVC、PE、PP或PS中的一種，長(zhǎng)為10_300mm，寬 2-30mm,厚度為 0.1-1.5mm。
7.如權(quán)利要求5所述人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，其特征是:所述pH試紙，唾液酸酶檢測(cè)試紙，白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試紙，過氧化氫檢測(cè)試紙和胺試紙的基礎(chǔ)材料為纖維素濾紙，玻璃纖維濾紙，層析紙，聚酯膜或尼龍膜；所述試紙的形狀為正方形，長(zhǎng)方形，圓形，橢圓形，三角形，菱形或梯形；大小為長(zhǎng)1-30 mm;寬1-30 mm ;厚度0.01_5 mm;多種試紙之間的間距為1-30 mm。
8.如權(quán)利要求1或4所述人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，其特征是:所述結(jié)合墊(I)上包被有抗人絨毛膜促性腺激素HCG金標(biāo)記抗體。
9.如權(quán)利要求1或4所述人絨毛膜促性腺激素和細(xì)菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，其特征是:所述層析膜(6)上包被有抗人絨毛膜促性腺激素HCG檢測(cè)抗體。
【文檔編號(hào)】G01N33/76GK103558401SQ201310538905
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】陸月, 時(shí)振華, 胡越, 韋彥余 申請(qǐng)人:無錫博慧斯生物醫(yī)藥科技有限公司