一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種同時(shí)分析總黃酮和綠原酸含量的簡(jiǎn)便方法，該方法分別用蘆丁和綠原酸對(duì)照品配成梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，用氯化鈷溶液顯色反應(yīng)后，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液在256nm和330nm波長(zhǎng)處的吸光度；確定在同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中上述二個(gè)波長(zhǎng)處蘆丁和綠原酸吸光度的比值關(guān)系，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。再測(cè)定經(jīng)氯化鈷顯色反應(yīng)后的待測(cè)樣品溶液分別在上述二個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度，根據(jù)公式計(jì)算扣除干擾組份在目標(biāo)吸收峰上的吸光度后，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算得到綠原酸和黃酮的含量。本發(fā)明有效地避免了黃酮和綠原酸對(duì)吸光度的相互影響，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)便快速，重復(fù)性好?？捎糜谕瑫r(shí)測(cè)定金銀花及其提純物或者其它類似植物草藥中總黃酮與綠原酸的含量，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制和監(jiān)測(cè)。
【專利說(shuō)明】一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分光光度計(jì)檢測(cè)技術(shù)，涉及一種采用扣除干擾的紫外可見分光光度計(jì)檢測(cè)方法，此法同時(shí)測(cè)定樣品中兩類主要化合物的含量；具體是一種同時(shí)分析總黃酮和綠原酸含量的簡(jiǎn)便方法，特別是一種同時(shí)分析金銀花及其提取液、提純物或者其它類似植物草藥中的總黃酮與綠原酸含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]綠原酸和黃酮在植物中分布很廣，其中黃酮一般以幾種結(jié)構(gòu)相似或相近的成分共存于植物中，其總量稱為總黃酮含量。綠原酸具有利膽、抗菌、抗病毒、降壓、消炎及升高白細(xì)胞、止血、縮短血凝和出血時(shí)間及興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理功能，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)綠原酸還具有抗HIV病毒和抗腫瘤等作用。黃酮類化合物具有軟化血管，降血糖，降低心肌耗氧量，抗心律不齊，降血脂等作用，同時(shí)還具有抗衰老和增加機(jī)體免疫力功能。因?yàn)閮烧呔哂歇?dú)特的生物活性，在醫(yī)藥、食品和日用化工等領(lǐng)域有著越來(lái)越廣泛的應(yīng)用前景。
[0003]金銀花是我國(guó)民間一種常用的中草藥，其中同時(shí)含有黃酮類化合物和綠原酸等生物活性成分，對(duì)金銀花及其提取液、提純物中總黃酮與綠原酸含量的準(zhǔn)確分析一直沒(méi)有得到很好的解決。分析綠原酸和總黃酮含量的方法較多，應(yīng)用最多的是紫外分光光度法，當(dāng)用傳統(tǒng)的NaNO2-Al (NO3)3-NaOH顯色方法來(lái)測(cè)定金銀花及其提取和提純產(chǎn)品中的黃酮含量時(shí)，因?yàn)樵诓ㄩL(zhǎng)510nm處綠原酸等多酚類物質(zhì)也有顯色紅移作用(見附圖1)，分析誤差很大。用直接法測(cè)定總黃酮含量時(shí)，一般選擇波長(zhǎng)368nm處最大吸收峰進(jìn)行分析，但因?yàn)榫G原酸在波長(zhǎng)368nm處有一定的吸光作用(見附圖2)，測(cè)定結(jié)果明顯偏高。而對(duì)于綠原酸的測(cè)定，傳統(tǒng)采用在330nm波長(zhǎng)處的直接法測(cè)定，從附圖2可知在330nm波長(zhǎng)處蘆丁對(duì)照品的吸光值較高，結(jié)果使得綠原酸的含量嚴(yán)重偏大。
[0004]綜上所述，金銀花中同時(shí)含有綠原酸和黃酮，由于兩者之間互相干擾，使現(xiàn)有的紫外分光光度法的分析結(jié)果誤差大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，目的在于解決目前分析誤差大，分析過(guò)程復(fù)雜，兩類化合物不能同時(shí)檢測(cè)等問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)對(duì)黃酮與綠原酸含量進(jìn)行準(zhǔn)確、快捷分析。
[0006]本發(fā)明提供的一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，該方法包括下述步驟:
[0007]第I步采用與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的方式對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行氯化鈷顯色處理；
[0008]第2步測(cè)定經(jīng)氯化鈷顯色反應(yīng)后的待測(cè)樣品溶液分別在256nm、330nm波長(zhǎng)處的吸
光度！256、1330 ;
[0009]第3步計(jì)算樣品溶液中綠原酸在330nm波長(zhǎng)處已扣除黃酮干擾的吸光度，以及黃酮在256nm波長(zhǎng)處已扣除綠原酸干擾的吸為UIr56，即:
【權(quán)利要求】
1.一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，該方法包括下述步驟: 第I步采用與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的方式對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行氯化鈷顯色處理； 第2步測(cè)定經(jīng)氯化鈷顯色反應(yīng)后的待測(cè)樣品溶液分別在256nm、330nm波長(zhǎng)處的吸光度T T.丄256Λ 丄330 ? 第3步計(jì)算樣品溶液中綠原酸在330nm波長(zhǎng)處已扣除黃酮干擾的吸光度，以及黃酮在256nm波長(zhǎng)處已扣除綠原酸干擾的吸光度/&，即:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，其特征在于，該方法用于金銀花及其提取液，綠原酸固體產(chǎn)品，或者其它類似植物草藥中的黃酮與綠原酸含量的測(cè)定。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，其特征在于，制作綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線和蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線的過(guò)程為: 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線:精密稱取一定量的綠原酸對(duì)照品，用蒸餾水溶解并定容，即得到綠原酸對(duì)照品溶液；分別精確量取一定量綠原酸對(duì)照品溶液和氯化鈷溶液，置于容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，即得到一組不同濃度的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液；另外以相同體積的氯化鈷溶液經(jīng)乙醇溶液定容的溶液為空白，依次取上述綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別測(cè)定綠原酸不同濃度的溶液在256nm波長(zhǎng)和330nm波長(zhǎng)處的吸光度；由所得數(shù)值確定在同一濃度的溶液中綠原 酸在256nm波長(zhǎng)和330nm波長(zhǎng)處吸光度的比值關(guān)系為
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，其特征在于，所述采用的顯色體系是濃度為0.05~0.25mol/L的氯化鈷水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，其特征在于，A=3.008，B = 0.812。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK103645149SQ201310672040
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月11日
【發(fā)明者】朱康玲, 陳晶, 王定官, 田乾位, 葛志鵬, 于飛 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)