金黃色葡萄球菌腸毒素b的b細胞免疫優(yōu)勢表位肽及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽及其制備方法和應用，具體地，本發(fā)明提供一種金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：17、35和42所示。其對應的核心表位的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO：48、54和69所示。本發(fā)明用重疊肽結合滴定法鑒定金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞優(yōu)勢免疫表位，篩選方法簡便快速、準確無遺漏。所述免疫優(yōu)勢表位不含有不必要甚至有害的部分，從而降低由其所制備的疫苗的使用風險，具有較大的疫苗應用價值，可用于制備金黃色葡萄球菌腸毒素B表位疫苗和/或預防疫苗。
【專利說明】金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制藥領域，特別是涉及來自金黃色葡萄球菌腸毒素B的三個B細胞免疫優(yōu)勢表位、鑒定此B細胞免疫優(yōu)勢表位的方法以及其在醫(yī)藥生物【技術領域】的應用。
【背景技術】
[0002]金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S.aureus),作為革蘭氏陽性菌的代表，是一類在自然界廣泛存在的致病性球菌，也是引起醫(yī)院感染和社區(qū)感染的一種重要致病菌。調(diào)查研究表明，在美國，社區(qū)皮膚及軟組織感染最常見的病原菌為S.aureus (約占75%);在日本，膿皰病中S.aureus引發(fā)的大皰性膿包病占的92% ;在非洲，熱帶膿性肌炎病原體中S.aureus占55%~72% ;在中國，感染性心內(nèi)膜炎的頭號致病菌為S.aureus (占31%~34%)。此外，S.aureus感染以急性、化膿性為特征，局部可引起皮膚和軟組織等的化膿性感染，經(jīng)久不愈；全身可導致骨髓炎、膿毒性關節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎、膿毒血癥等嚴重感染及并發(fā)癥，死亡率高達20%。同時，金葡菌的外毒素還可引起食物中毒、燙傷樣皮膚綜合征和中毒性休克綜合征等全身致死性感染。
[0003]金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，在含有血液和葡萄糖的培養(yǎng)基中生長更佳，需氧或兼性厭氧。28°C~38°C均能生長，最適溫度為37°C，pH為
4.8~9.4，最適為7.4。耐鹽性強，在含10%~15%氯化鈉培養(yǎng)基中均能生長。在血脂平板上形成的菌落較大，菌落周圍形成明顯的全透明溶血環(huán)(3 -溶血)，溶血性菌株具有較強致病性。按照噬菌體分型，金黃色葡萄球菌可分為5群26個型。噬菌體分型在流行病學調(diào)查時追蹤傳染源及研究菌型與疾病種類間的關系上均有重要意義。腸毒素型食物中毒由III和IV群金黃色葡萄球菌引起，II`群菌對抗生素產(chǎn)生耐藥性的速度比I和IV群緩慢很多。造成醫(yī)院感染嚴重流行的是I群中的52、52A、80和81型菌株。引起皰疹性和剝脫性皮炎的菌株經(jīng)常是II群71型。
[0004]金黃色葡萄球菌耐熱性腸毒素(Staphylococcal enterotoxin, SE),是引起人類食物中毒、全身炎癥反應和膿毒癥休克的主要原因，也是金黃色葡萄球菌疫苗研究最重要的保護性抗原之一。SE因血清型差異SE分為SEA、SEB及SEC等多種型，每株臨床MRSA分離株可分泌1-2種腸毒素，其中SEB，SEC及TSST-1最豐富。每株金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生一型或兩型以上的腸毒素。近年發(fā)現(xiàn)，造成醫(yī)院感染的耐甲氧西林金葡菌，80%以上產(chǎn)生腸毒素 B (Staphylococcal enterotoxin B, SEB)。個別醫(yī)院分離株幾乎 100%產(chǎn) SEB。
[0005]金葡菌SEB屬于超抗原，不需要抗原呈遞細胞的加工處理，以完整的蛋白質(zhì)分子直接與在MHC II類分子的a I結構域和TCR的P鏈V區(qū)結合，從而刺激T細胞活化增殖，釋放大量細胞因子如IL-2、IFN-Y及TNF-a。由金葡菌SEB引起的中毒性休克綜合征的病死率可達50%，而與流感并發(fā)的金葡菌SEB感染其死亡率可達90%以上，因此，氣溶膠中的金葡菌SEB是一種潛在的生化武器。當SEB進入機體后，其超抗原的結合引起單個核細胞活化，導致廣泛的細胞因子釋放，而早期的TCR- a 細胞釋放的TNF- a對死亡的發(fā)生起了重要的作用。
[0006]經(jīng)Blast比對證實，SEB在MRSA各菌株中序列保守，結構穩(wěn)定。在小鼠模型中的研究證實，SEB具有比其他抗原更好的體液應答優(yōu)勢，合成的人SEB單克隆抗體可預防MRSA感染常見的毒性休克綜合癥。但SEB本身為毒素，用于人體存在安全隱患，因此，失去毒性的突變體SEB是MRSA疫苗較好的保護性抗原。目前，SEB突變體疫苗用于SEB中毒及抗MRSA感染已在動物模型中獲得成功。
[0007]蛋白抗原發(fā)揮其功能主要通過表位來體現(xiàn)特異性。用SEB表位中的優(yōu)勢表位來制備疫苗，有利于去除不利成份，增強免疫效果。因此，SEB抗原中免疫優(yōu)勢應答的保護性表位的鑒定，是提升和優(yōu)化基于SEB抗原的S.aureus疫苗設計的重要前提。篩選SEB的多個免疫優(yōu)勢表位，將各抗原的表位進行串聯(lián)所得到多表位多肽疫苗可以激發(fā)更有效的免疫應答。目前的已知的SEB的B細胞表位有5個，所用的篩選方法主要是生物信息學預測和單克隆抗體篩選。用生物信息學預測抗原的B細胞表位準確率不高，預測出的表位僅局限于特定長度的肽段，無法預測免疫優(yōu)勢表位。研究也證實，實驗所得的B細胞表位與生物信息學軟件預測的結果并不一致。用單克隆抗體篩選抗原的B細胞表位步驟繁瑣，試驗周期長，所鑒定的抗原B細胞表位的不全，也無法鑒定免疫優(yōu)勢表位。因此，建立一種準確有效的篩選及鑒定B細胞免疫優(yōu)勢表位的方法顯得尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明提供一種 金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:17、35和42所示。其對應的核心表位的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:48、54和69所示。
[0009]本發(fā)明提供一種鑒定所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的方法，其主要包含步驟:
[0010]I)用金黃色葡萄球菌腸毒素B的突變體免疫小鼠獲得抗血清；
[0011]2)步移合成覆蓋金黃色葡萄球菌腸毒素B全長序列的重疊18肽；
[0012]3)用步驟I)所得的抗血清結合步驟2)所得的重疊18肽篩選金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽；
[0013]4)用步驟3)所篩得的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽與鑰孔血藍蛋白偶聯(lián)，所得偶聯(lián)物用于動物免疫，獲得免疫優(yōu)勢肽抗血清；所述免疫優(yōu)勢表位抗血清進行金黃色葡萄球菌腸毒素B的中和能力檢測，鑒定所述B細胞免疫優(yōu)勢表位肽為目標B細胞免疫優(yōu)勢表位肽。
[0014]進一步地，上述鑒定方法包含步驟:
[0015]5)針對步驟3)所得的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽序列，從N-端及C-端分別依次截斷2個氨基酸，合成各B細胞免疫優(yōu)勢表位肽所對應的截斷肽；
[0016]6)用步驟4)獲得的所述免疫優(yōu)勢肽抗血清結合步驟5)所述的截斷肽，來確定所述B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的最小表位；
[0017]7)用步驟6)所篩得的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的最小表位與鑰孔血藍蛋白蛋白偶聯(lián)，所得偶聯(lián)物用于動物免疫，獲得免疫優(yōu)勢表位抗血清；
[0018]8)用步驟7)獲得的所述免疫優(yōu)勢表位抗血清進行金黃色葡萄球菌腸毒素B的中和能力檢測；[0019]9)用生物信息學方法確定步驟6)所確定的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的最小表位在金黃色葡萄球菌各個菌株中的保守性，并明確其在金黃色葡萄球菌腸毒素B蛋白三維結構中的位置。
[0020]所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽具有高免疫原性，可引發(fā)強烈的免疫反應；用所述免疫優(yōu)勢表位免疫動物所獲的抗血清均具有特異性中和SEB毒素的作用。所述免疫優(yōu)勢表位不含有不必要甚至有害的部分，從而降低由其所制備的疫苗的使用風險，具有較大的疫苗應用價值，可用于制備金黃色葡萄球菌腸毒素B表位疫苗和/或預防疫苗。
[0021]本發(fā)明通過用SEB突變體(rSEB)免疫BALB/c小鼠獲得預防S.aureus (金黃色葡萄球菌)感染的抗血清，結合覆蓋SEB全長的42條重疊肽逐步篩選出了 SEB的B細胞三個免疫優(yōu)勢表位肽。用免疫優(yōu)勢表位肽一KLH(鑰孔血藍蛋白)偶聯(lián)物免疫動物，獲得的了可強烈結合SEB毒素的表位肽特異性抗血清。接著用分別覆蓋三個免疫優(yōu)勢表位肽的多個截斷重疊肽與該表位肽抗血清進行進一步篩選，明確了該免疫優(yōu)勢表位肽的核心序列即優(yōu)勢表位。在體外，鑒定的三個免疫優(yōu)勢表位均可中和天然SEB毒素的超抗原能力。本發(fā)明所提供的篩選和鑒定方法準確率高，可以避免漏篩和誤篩現(xiàn)象，可以區(qū)別抗原表位的免疫顯性和免疫亞顯性，并且所篩選出的抗原表位均能在動物體內(nèi)誘發(fā)高水平優(yōu)勢表位抗血清，并且該抗血清具有中和SEB毒素超抗原能力的功能，由此使得制備高效、低毒、高安全性的基于SEB的疫苗成為可能。
[0022]本發(fā)明用覆蓋抗原蛋白全長的多組重疊肽結合ELISA法篩選金黃色葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢B細胞表位肽，進一步用覆蓋優(yōu)勢表位肽全長的截斷重疊肽結合ELISA法來明確該優(yōu)勢表位肽的核心序列，方法簡便快速，表位無遺漏，獲得了金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞的三個免疫優(yōu)勢表位。該免疫優(yōu)勢表位均具有較強的免疫原性，用該優(yōu)勢表位免疫動物，免疫制劑無無關成分或有害成分，可獲得高水平的優(yōu)勢表位抗血清，并且，該抗血清可強烈中和SEB毒素的超抗原能力。以該優(yōu)勢表位為活性成分的疫苗比SEB全蛋白突變體疫苗具有更好的預防`和中和誘發(fā)的SEB毒素的作用，由于優(yōu)勢表位SEB97_112及SEB207^222在多種S.aureus菌株中序列保守,提示其對其他S.aureus感染也具有良好的應用前景。
[0023]為讓本發(fā)明的上述和其它目的、特征和優(yōu)點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，并配合附圖，作詳細說明如下。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1為金黃色葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢表位肽的篩選。
[0025]圖2為金黃色葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢表位肽抗血清與天然SEB的結合檢測。
[0026]圖3Ai至圖3Cii為金黃色葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢表位的最小表位確定；其中
[0027]圖3Ai為SEB97_112的最小表位確定；
[0028]圖3Bi為SEB2(I7_222的最小表位確定；
[0029]圖3Ci為SEB247_257的最小表位確定；[0030]圖3Aii，圖 3Bii 及圖 3Cii 分別是亞優(yōu)勢表位肽 SEB31_48，SEB133^50 及 SEB193_21(I 的核心序列。
[0031]圖4A至圖4D為金黃色葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢最小表位抗血清對該毒素的中和能力的檢測；其中
[0032]圖4A為免疫優(yōu)勢最小表位抗血清中和了金黃色葡萄球菌腸毒素B誘導的T細胞增殖；
[0033]圖4B為免疫優(yōu)勢最小表位抗血清阻斷了金黃色葡萄球菌腸毒素B誘導的IL-2的分泌；
[0034]圖4C為免疫優(yōu)勢最小表位抗血清阻斷了金黃色葡萄球菌腸毒素B誘導的IFN- y的分泌；
[0035]圖4D為免疫優(yōu)勢最小表位抗血清阻斷了金黃色葡萄球菌腸毒素B誘導的TNF- a的分泌。
[0036]圖5A至圖5B為金黃色葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢表位保守性分析及其在SEB全蛋白三維結構中的定位；其中
[0037]圖5A為金黃色葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢表位保守性分析；
[0038]圖5B為金黃色 葡萄球菌腸毒素B的免疫優(yōu)勢表位保守性分析在SEB全蛋白三維結構中的定位。
【具體實施方式】
[0039]下面結合具體實例，進一步闡述本發(fā)明，應理解的是，這些實例僅用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構思前提下對本發(fā)明制備方法的簡單改進，及對本發(fā)明表位肽的利用都屬本發(fā)明要求保護的范圍。
[0040]本發(fā)明的思路如下:以本教研室已經(jīng)制備的金黃色葡萄球菌腸毒素B突變體為基礎(突變體制備參考文獻:0ral Vaccine Formulations Stimulate Mucosal and SystemicAntibody Responses against Staphylococcal Enterotoxin B in a Piglet Model.Clinical and Vaccine Immunology, 2010 (17) 8:1163-1169)，以 BALB/c 小鼠為動物模型，制備了在以BALB/c小鼠動物模型上研究MRSA的嵌合表位疫苗。本發(fā)明用步移合成法，合成了覆蓋SEB全長的42條重疊肽。其后，用免疫優(yōu)勢表位肽-KLH(鑰孔血藍蛋白)偶聯(lián)物免疫動物，獲得優(yōu)勢表位肽特異性抗血清。針對各個免疫優(yōu)勢表位肽序列，從N-端及C-端分別依次截斷2個氨基酸，合成覆蓋各免疫優(yōu)勢表位肽全長的對應的截斷肽。用優(yōu)勢表位肽特異性抗血清結合其對應的截斷肽，篩選優(yōu)勢表位肽的核心序列，并用抗血清滴定法進一步驗證該核心表位。用該核心表位_KLH(鑰孔血藍蛋白)偶聯(lián)物免疫動物，獲得優(yōu)勢表位特異性抗血清。用優(yōu)勢表位特異性抗血清阻斷SEB毒素的超抗原活性。最后，用生物信息學方法確定優(yōu)勢表位在金黃色葡萄球菌各個菌株中的保守性，并明確其在金黃色葡萄球菌腸毒素B蛋白三維結構中的位置，分析其在預防不同金黃色葡萄球菌菌株感染所致的SEB中毒的通用性。
[0041]材料的準備:
[0042]1.金黃色葡萄球菌腸毒素B突變體為 申請人:制備。
[0043]2.實驗動物:BALB/c小鼠:6_8周玲，SPF級，雌性，體重18_22g，購自第三軍醫(yī)大學動物房。
[0044]3.合成多肽:由上海強耀公司合成，多肽干粉用二價亞砜(DMSO)溶解成0.5mg/mL的濃度，-70°C保存。臨用時依據(jù)使用濃度用磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋。
[0045]4.弗式佐劑:弗式完全佐劑:石蠟油(1份)+羊毛脂(1份)+滅活卡介苗I支，弗式不完全佐劑:石蠟油(1份)+羊毛脂(1份)
[0046]5.?85緩沖液(？117.2)恥2冊04 14mmol, NaH2P04 6mmol, NaCl 9g，加蒸餾水到 IL
[0047]6.ELISA試劑的配制
[0048]I)包被稀釋液 0.05mol/L PH9.6 碳酸鹽緩沖液:Na2C03 1.6g, NaHC032.9g, NaN30.2g，加蒸餾水至1000ml。
[0049]2)樣本稀釋液/抗體稀釋液:Tween-20溶解于PBS中體積比為0.5%。3)封閉液:PBS中加入1%BSA (質(zhì)量體積比)及Tween200.5%。(體積體積比)
[0050]3)洗滌液:Tween-20溶解于PBS中體積比為0.5%0
[0051]4) TMB底物液:中國天根公司
[0052]7.BSA (小牛血清白蛋白):中國B10SHARP公司。
[0053]8.SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X):中國碧云天公司。 [0054]9.預染 Marker:中國 MBI 公司。
[0055]10.脫脂奶粉:中國博士德公司。
[0056]11.96孔可拆酶標板及96孔平底細胞培養(yǎng)板:美國Corning公司。
[0057]12.1PTG:中國鼎國公司。
[0058]13.二甲基亞諷(DMSO):Sigma 公司。
[0059]14.3H-胸腺嘧啶核苷:第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院核醫(yī)學科。
[0060]15.1L-2, IFN-Y及TNF-a ?細胞因子檢測試劑盒(Dakewe公司)
[0061]16.小鼠淋巴細胞分離液:中國天津灝洋公司。
[0062]17.R-1640細胞培養(yǎng)液及胎牛血清=Hyclone公司。
[0063]18.HRP-羊抗小鼠IgG:中國中杉金橋公司。
[0064]實施例1步移重疊含18個氨基酸短肽的合成
[0065]SEB是金黃色葡萄球菌腸毒素B，在各菌株之間序列是保守的，全長261個氨基酸，其中，1-27氨基酸為信號肽。重組構建的重疊肽為1-261之間的18肽，來源于MRSA252國際標準菌株。是在UniProt蛋白數(shù)據(jù)庫中檢索金黃色葡萄球菌MRSA252來源的SEB蛋白序列(編號P57839)，從第I號氨基酸開始合成步移重疊18個氨基酸短肽(由上海強耀公司協(xié)助合成)，共42條，純度均大于90%。合成肽信息見表1。將合成的肽段用DMSO溶解至0.5mg/mL的儲存濃度，分裝后_70°C保存。
[0066]UniProt 蛋白數(shù)據(jù)庫檢索網(wǎng)址:http:1Iwm.uniprot.0rg/uniprot/P57839
[0067]SEB的1-260位的氨基酸序列如下(共261個氨基酸):
[0068]MKLFAFIFICVKSCSLLFMLNGNPKPEQLNKASEFTGLMDNMRYLYDDKHVSEINIKAQEKFLQHDLLFKINGSKIDGSKILKTEFNNNSLSDKYKNKNIDLFGTNYYYQCYFSADNMELNDGRLIEKTCMYGGVTEHDGNQIDKNNSTDNSHNILIKVFENERNSLSFDIPTNKKNITAQEIDYKVRNYLLKHKNLYEFNSSPYETGYIKFIEGNGHSFWYDMMPESGEKFYPTKYLLIYNDNKTVESKSINVEVHLTKK
[0069]表1:覆蓋金黃色葡萄球菌腸毒素B全長序列的重疊18肽氨基酸序列信息(依次對應序列表中的SEQ ID No:1-42)
[0070]
【權利要求】
1.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO:17所示。
2.根據(jù)權利要求1所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其特征在于，所述B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的核心表位的氨基酸序列如SEQ ID N0:48所示。
3.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO:35所示。
4.根據(jù)權利要求3所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其特征在于，所述B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的核心表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:54所示。
5.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO:42所示。
6.根據(jù)權利要求5所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽，其特征在于，所述B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的核心表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示。
7.一種鑒定權利要求1-6任一項所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的方法，其特征在于，包含步驟: 1)用金黃色葡萄球菌腸毒素B的突變體免疫小鼠獲得抗血清； 2)步移合成覆蓋金黃色葡萄球菌腸毒素B全長序列的重疊18肽； 3)用步驟I)所 得的抗血清結合步驟2)所得的重疊18肽篩選金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽； 4)用步驟3)所篩得的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽與鑰孔血藍蛋白偶聯(lián)，所得偶聯(lián)物用于動物免疫，獲得免疫優(yōu)勢肽抗血清；所述免疫優(yōu)勢表位抗血清進行金黃色葡萄球菌腸毒素B的中和能力檢測，鑒定所述B細胞免疫優(yōu)勢表位肽為目標B細胞免疫優(yōu)勢表位肽。
8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于，進一步包含步驟: 5)針對步驟3)所得的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽序列，從N-端及C-端分別依次截斷2個氨基酸，合成各B細胞免疫優(yōu)勢表位肽所對應的截斷肽； 6)用步驟4)獲得的所述免疫優(yōu)勢肽抗血清結合步驟5)所述的截斷肽，來確定所述B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的最小表位； 7)用步驟6)所篩得的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的最小表位與鑰孔血藍蛋白蛋白偶聯(lián)，所得偶聯(lián)物用于動物免疫，獲得免疫優(yōu)勢表位抗血清； 8)用步驟7)獲得的所述免疫優(yōu)勢表位抗血清進行金黃色葡萄球菌腸毒素B的中和能力檢測； 9)用生物信息學方法確定步驟6)所確定的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽的最小表位在金黃色葡萄球菌各個菌株中的保守性，并明確其在金黃色葡萄球菌腸毒素B蛋白三維結構中的位置。
9.權利要求1-6任一項所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽在制備金黃色葡萄球菌腸毒素B表位疫苗和/或預防疫苗中的應用。
10.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B表位疫苗和/或預防疫苗，其特征在于，含有權利要求1-6任一項所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽。
【文檔編號】G01N33/68GK103772493SQ201410032033
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月23日 優(yōu)先權日:2014年1月23日
【發(fā)明者】吳超, 趙 卓, 鄒全明, 李濱, 孫合強, 陳立, 章金勇, 魏姍姍, 胡健, 曾浩, 王逸麟 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學