一種配合飼料中纖維素酶的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種配合飼料中纖維素酶的檢測方法，是通過透析袋透析對配合飼料中纖維素酶進行濃縮從而實現(xiàn)測定的方法。本方法實現(xiàn)了對配合飼料種纖維素酶的準確控制。
【專利說明】 一種配合飼料中纖維素酶的檢測方法
所屬【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種配合飼料中纖維素酶酶活的檢測技術，具體涉及利用透析袋對配合飼料中添加的纖維素酶進行濃縮然后利用分光光度計進行檢測。
【背景技術】
[0002]纖維素酶是降解纖維素為葡萄糖的一類酶總稱，其測定方法主要有還原糖測定法、粘度法和底物染色法等。還原糖測定法簡便準確，且結果重復性好，是廣泛使用的一種纖維素酶酶活測定方法。農業(yè)部在2004年頒布了飼料添加劑纖維素酶酶活測定方法《飼料添加劑纖維素酶活力的測定》(NY/T912-2004)。此標準適用于飼料添加劑用的飼料酶制劑產(chǎn)品，也適用于添加有纖維素酶的濃縮飼料和添加劑預混合飼料。
[0003]但該方法測定配合飼料中纖維素酶活力時存在著一些問題。首先配合飼料中的纖維素酶活力遠低于飼料添加劑中的酶活力，因此需加大稱樣量增加酶液中的酶活力。同時配合飼料中含有多種碳水化合物，如淀粉、木聚糖、纖維素等。這些碳水化合物含有大量的還原性醛基，在煮沸條件下均可與DNS顯色劑發(fā)生顯色反應，導致測定過程中背景值過高(呈咖啡色)，檢測誤差較大。此外制粒、膨化等加工過程中，原料中的一些不可溶或溶解性較差的多糖也可能在高溫高壓的作用下裂解，增加酶液中碳水化合物的變異度。因此檢測前就需要將酶液中的寡糖和單糖去除以減少檢測誤差。本文針對此問題，提出了用透析袋進行前處理，從而為還原糖法測定飼料中的纖維素酶活力提供參考。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于:針對配合飼料中的纖維素酶活力遠低于飼料添加劑中的酶活力，故不能依據(jù)NY/T912-2004來測定配合飼料中纖維素酶存在的問題，提供一種飼料中的纖維素酶活快速檢測方法。
[0005]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術方案:
[0006]一種檢測配合飼料中的纖維素酶活力的快速檢測法，其特征是準確稱取IOg飼料試樣后，加40mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液。磁力攪拌30min，再用緩沖溶液定容至100mL。3000r/min離心IOmin,取上清15mL放入透析袋中(透析袋MD34, USA,截留分子量25000)透析，透析袋放在乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，緩沖液每隔8h換一次。4°C條件下避光透析24h后待測，酶活力高于標準曲線范圍(0.10mg/mL?0.70mg/mL葡萄糖標準溶液)時可用緩沖液做適當稀釋，稀釋后的待測酶液中纖維素酶活力控制在0.02U/mL?0.12U/mL之間。
[0007]本發(fā)明解決了配合飼料中纖維酶因為含量低難以檢測的問題，摸索了一套適合于纖維素酶的檢測體系，包括反應條件、試劑、儀器等；使配合飼料中纖維素酶的含量得以準確測定，本發(fā)明的特別之處在于利用透析袋對樣品進行濃縮，此方法國內外文獻中未見報道。
[0008]檢測對象:本發(fā)明針對配合飼料中的纖維素酶酶活進行檢測。
[0009]檢測范圍:本發(fā)明主要應用于配合飼料?！揪唧w實施方式】
[0010]取上海市飼料生產(chǎn)企業(yè)的3份樣品，分別按下述操作過程進行分析檢測。
[0011]準確稱取IOg飼料試樣后，加40mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液(0.lmol/L,pH5.5)。磁力攪拌30min,再用緩沖溶液定容至100mL。3000r/min離心IOmin,取上清15mL (若有顆粒懸浮，可先將上清過濾)放入透析袋中(透析袋MD34，USA，截留分子量25000)透析，透析袋放在乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，緩沖液每隔8h換一次。4°C條件下避光透析24h后待測，酶活力高于標準曲線范圍(0.10mg/mL~0.70mg/mL葡萄糖標準溶液)時可用緩沖液做適當稀釋，稀釋后的待測酶液中纖維素酶活力控制在0.02U/mL~0.12U/mL之間。
[0012]吸取2.0OmL酶液(37°C平衡IOmin)，加入到刻度試管中，再加入5mL DNS試劑，電磁振蕩3s。加入2mL β -葡聚糖溶液(37°C平衡20min)，37°C保溫30min，沸水浴加熱5min。用自來水冷卻至室溫，加水定容至25mL，電磁振蕩3s。以標準空白樣為空白對照，在540nm處測定吸光度AB。
[0013]吸取2.0OmL酶液(37°C平衡IOmin)到刻度試管中，加入2mL β -葡聚糖溶液(37°C平衡20min)，電磁振蕩3s。37°C精確保溫30min (秒表計時)。加入5mL DNS試劑，電磁振蕩3s，以終止酶解反應。沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，加水定容至25mL，電磁振蕩3s。以標準空白樣為空白對照，在540nm處測定吸光度Ae。
[0014]試樣酶活力按式(I)、式(2)計算
【權利要求】
1.一種配合飼料中纖維素酶的檢測方法，其特征在于:依次包括如下步驟，準確稱取IOg飼料試樣后，加40mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液；磁力攪拌30min，再用緩沖溶液定容至100mL。3000r/min離心IOmin,取上清15mL放入透析袋中透析,透析袋放在乙酸-乙酸鈉緩沖溶液中，緩沖液每隔8h換一次。4°C條件下避光透析24h后待測，酶活力高于標準曲線范圍(0.10mg/mL~0.70mg/mL葡萄糖標準溶液)時可用緩沖液做適當稀釋,稀釋后的待測酶液中纖維素酶活力控制在0.02U/mL~0.12U/mL之間； 吸取2.0OmL酶液(37°C平衡IOmin)，加入到刻度試管中，再加入5mL DNS試劑，電磁振蕩3s。加入2mLi3-葡聚糖溶液(37°C平衡20min)，37°C保溫30min，沸水浴加熱5min。用自來水冷卻至室溫，加水定容至25mL，電磁振蕩3s。以標準空白樣為空白對照，在540nm處測定吸光度Ab。 吸取2.0OmL酶液(37°C平衡IOmin)到刻度試管中，加入2mL^-葡聚糖溶液(37°C平衡20min)，電磁振蕩3s。37°C精確保溫30min (秒表計時)。加入5mL DNS試劑，電磁振蕩3s,以終止酶解反應。沸水浴加熱5min，用自來水冷卻至室溫，加水定容至25mL，電磁振蕩3s。以標準空白樣為空白對照，在540nm處測定吸光度Ae。 試樣酶活力按式(I)、式(2)計算
2.根據(jù)權利要求1所述的配合飼料中纖維素酶的檢測方法，其特征在于:使用透析袋對配合飼料進行濃縮，所用透析袋為MD34，USA，截留分子量25000。
【文檔編號】G01N21/31GK103776779SQ201410039950
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月24日 優(yōu)先權日:2014年1月24日
【發(fā)明者】楊海鋒, 趙志輝, 宋衛(wèi)國, 姚春霞, 楊俊花, 林淼 申請人:上海市農業(yè)科學院