夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，采用超高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，包括以下步驟：供試品溶液的制備：將夏枯草粉碎，精密稱量，加60%-100%的甲醇溶液，超聲溶解，放涼，定容，搖勻，過(guò)濾，得濾液，作為供試品溶液；對(duì)照品溶液的制備：精密稱量迷迭香酸對(duì)照品，加60%-100%的甲醇溶液溶解，作為對(duì)照品溶液；分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入超高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定，得由15個(gè)峰構(gòu)成的夏枯草指紋圖譜。本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人的大量實(shí)驗(yàn)和研究，得出夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，并確定了制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，及超高效液相色譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)；所述檢測(cè)方法結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，且節(jié)約試劑。
【專利說(shuō)明】夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥材檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]夏枯草為唇形目唇形科植物，其性寒，味甘、辛、微苦，具有清泄肝火、散結(jié)消腫、清熱解毒、祛痰止咳、涼血止血的功效，適用于淋巴結(jié)核、甲狀腺腫、乳癰、頭目眩暈、口眼歪斜、筋骨疼痛、肺結(jié)核、血崩、帶下、急性傳染性黃疸型肝炎及細(xì)菌性痢疾等?，F(xiàn)代藥理研究表明，夏枯草還具有降低血壓的作用。
[0003]目前，市場(chǎng)中存在一些已經(jīng)喪失夏枯草原本形態(tài)的夏枯草粉末和種類繁多的含有夏枯草的復(fù)方藥，而現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)于檢測(cè)這些物質(zhì)是否為夏枯草或是否含有夏枯草的方法較為復(fù)雜，且結(jié)果誤差較大；另外，雖然夏枯草可全草使用，但果穗的藥效優(yōu)于其他部位，而目前對(duì)于區(qū)分果穗和其他部位的檢測(cè)方法卻相對(duì)較少。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于此，本發(fā)明的目的在于提供一種夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法。
[0005]解決上述技術(shù)問(wèn)題的具體技術(shù)方案如下:
[0006]一種夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，采用超高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，包括以下步驟:
[0007](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎，精密稱量，加體積分?jǐn)?shù)為60%_100%的甲醇水溶液，超聲溶解，放涼，定容，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，所述供試品溶液中夏枯草的濃度為0.005-0.2g/mL ；
[0008](2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對(duì)照品，加體積分?jǐn)?shù)為60%_100%的甲醇水溶液溶解，作為對(duì)照品溶液，所述對(duì)照品溶液中迷迭香酸的濃度為14-16 μ g/mL;
[0009](3)分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入超高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定，得由15個(gè)峰構(gòu)成的夏枯草指紋圖譜；
[0010]色譜條件為:色譜柱=C18柱，檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器，流速0.2-0.6mL.mirT1，檢測(cè)波長(zhǎng)250-380nm，柱溫20_40°C，進(jìn)樣量1_10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min，(5-6)%乙腈一(5-6)%乙腈，5 — 15min，(5-6)%乙腈—(14-16)% 乙臆，15 — 30min, (14-16)% 乙臆一(44-46)% 乙臆。
[0011]在其中一些實(shí)施例中，步驟⑶所述色譜條件中:流速0.25-0.6mL ?mirT1,檢測(cè)波長(zhǎng)250-260nm，柱溫20_40°C，進(jìn)樣量1_3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈,5 — 15min, 5%乙腈一15%乙腈，15 — 30min,15%乙腈一45%乙腈。
[0012]在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述甲醇水溶液中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為74-76%。
[0013]在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述超聲處理的功率為240-260W，頻率30-35kHz，時(shí)間為 25-35min。[0014]在其中一些實(shí)施例中，步驟(I)中所述供試品溶液中夏枯草的濃度為
0.005-0.01g/mL。
[0015]在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)中所述對(duì)照品溶液中迷迭香酸的濃度為15 μ g/
mLo
[0016]在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟⑴中所述粉碎的粒度為55-65目。
[0017]本發(fā)明所述夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果:
[0018]本發(fā)明經(jīng)發(fā)明人的大量實(shí)驗(yàn)和研究，以迷迭香酸為主要指標(biāo)得出夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，并確定了制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，及超高效液相色譜儀的色譜條件的最優(yōu)參數(shù)；所述檢測(cè)方法可快速準(zhǔn)確地鑒定出夏枯草，還可區(qū)分夏枯草果穗和其他部位，有效的防止了用夏枯草其他部位冒充果穗入藥；該方法結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，且節(jié)約試劑。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為實(shí)施例4中共有模式指紋圖譜；
[0020]圖2為實(shí)施例4中不同產(chǎn)地夏枯草的指紋圖譜；
[0021]圖3為實(shí)施例4中對(duì)照品溶液的色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022]以下將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0023]實(shí)施例1
[0024]一種夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，包括以下步驟:
[0025](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎過(guò)60目篩，精密稱量0.5g，置于IOOmL三角瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇水溶液，超聲溶解(功率250W，頻率33kHz)，30min，放涼，定容至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0026](2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對(duì)照品，加體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇溶液溶解，制成每ImL中含迷迭香酸15 μ g的溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0027](3)分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入超高效液相色譜儀中，測(cè)定，得夏枯草的指紋圖譜，(其15個(gè)共有峰，經(jīng)指認(rèn)7號(hào)峰為迷迭香酸)；
[0028]色譜條件為:色譜柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器，流速0.4mL.min—1，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm,柱溫30°C，進(jìn)樣量I μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5 — 15min, 5%乙腈—15% 乙臆，15 — 30min, 15% 乙臆一45% 乙臆。
[0029]實(shí)施例2
[0030]一種夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0031](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎過(guò)55目篩，精密稱量lg，置于IOOmL三角瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為60%的甲醇水溶液，超聲溶解(功率240W，頻率30kHz)，25min,放涼，定容，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0032](2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對(duì)照品，加體積分?jǐn)?shù)為60%的甲醇溶液溶解，制成每ImL中含迷迭香酸14 μ g的溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0033](3)分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入超高效液相色譜儀中，測(cè)定，得夏枯草的指紋圖譜(其15個(gè)共有峰，經(jīng)指認(rèn)7號(hào)峰為迷迭香酸)；
[0034]色譜條件為:色譜柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器，流速0.2mL.min—1，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm,柱溫20°C，進(jìn)樣量3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5 — 15min, 5%乙腈—14% 乙臆，15 — 30min, 14% 乙臆一44% 乙臆。
[0035]實(shí)施例3
[0036]一種夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0037](I)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎過(guò)65目篩，精密稱量2g，置于IOmL三角瓶中，加甲醇，超聲溶解(功率240W，頻率30kHz)，35min,放涼，定容，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；
[0038](2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對(duì)照品，加甲醇溶解，制成每ImL中含迷迭香酸16 μ g的溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0039](3)分別精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入超高效液相色譜儀中，測(cè)定，得夏枯草的指紋圖譜(其15個(gè)共有峰，經(jīng)指認(rèn)7號(hào)峰為迷迭香酸)；
[0040]色譜條件為:色譜柱:ACQUITYUPLC BEH C18 (2.1mmX 50mm, 1.7 μ m)，檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器，流速0.6mL.mirT1,檢測(cè)波長(zhǎng)380nm，柱溫40°C，進(jìn)樣量10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 6%乙腈一6%乙腈，5 — 15min, 6%乙腈—16% 乙臆，15 — 30min, 16% 乙臆一46% 乙臆。
[0041]實(shí)施例4夏枯草指紋圖譜的構(gòu)建方法
[0042]一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br> [0043]夏枯草指紋圖譜的構(gòu)建方法。
[0044]二、實(shí)驗(yàn)方法
[0045]1、實(shí)驗(yàn)試劑盒藥材
[0046]甲醇(色譜純，TEDIA公司)，乙腈(色譜純，TEDIA公司)，水為哇哈哈純凈水，磷酸(色譜純，北京化工廠)。
[0047]對(duì)照品迷迭香酸(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):111871-201102)；
[0048]不同產(chǎn)地的夏枯草藥材13批，均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室潘清平教授鑒定夏枯草為唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。
[0049]表I夏枯草藥材來(lái)源
[0050]
【權(quán)利要求】
1.一種夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，采用超高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，包括以下步驟: (1)供試品溶液的制備:將夏枯草粉碎，精密稱量，加體積分?jǐn)?shù)為60%-100%的甲醇水溶液溶解，超聲處理，放涼，定容，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，所述供試品溶液中夏枯草的濃度為0.005-0.2g/mL ； (2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱量迷迭香酸對(duì)照品，加體積分?jǐn)?shù)為60%-100%的甲醇水溶液溶解，作為對(duì)照品溶液，所述對(duì)照品溶液中迷迭香酸的濃度為14-16 μ g/mL ； (3)分別精密吸取步驟(I)所述供試品溶液和步驟(2)所述對(duì)照品溶液，注入超高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定； 色譜條件為:色譜柱=C18柱，檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器，流速0.2-0.6mL.mirT1，檢測(cè)波長(zhǎng)250-380nm，柱溫20_40°C，進(jìn)樣量1_10 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min，(5-6)%乙腈一(5-6)%乙腈，5 — 15min，(5-6)%乙腈—(14-16)% 乙臆，15 — 30min, (14-16)% 乙臆一(44-46)% 乙臆。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)所述色譜條件中:流速0.25-0.6mL.min—1，檢測(cè)波長(zhǎng)250_260nm，柱溫20-40°C，進(jìn)樣量1-3 μ L，以乙腈-0.2%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，所述梯度洗脫為:0 — 5min, 5%乙腈一5%乙腈，5— 15min, 5% 乙臆一15% 乙臆，15 — 30min, 15% 乙臆一45% 乙臆。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中所述甲醇水溶液中甲醇的體積分?jǐn)?shù)為74-76%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中所述供試品溶液中夏枯草的濃度為0.005-0.01g/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)中所述對(duì)照品溶液中迷迭香酸的濃度為15μ g/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中所述超聲處理的功率為240-260W，頻率30-35kHz，時(shí)間為25_35min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏枯草指紋圖譜的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(I)中所述粉碎的粒度為55-65目。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103926344SQ201410158067
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月18日
【發(fā)明者】蔣莉娟, 姚江雄, 許招懂, 方鐵錚, 林麗美, 黎志堅(jiān) 申請(qǐng)人:廣州白云山星群(藥業(yè))股份有限公司