17α-羥基黃體酮的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種17α-羥基黃體酮的檢測方法，該方法包括鑒別方法和/或含量測定方法，以17α-羥基黃體酮為對照品，以體積比為50～70∶30～50的乙腈-水為流動相，用高效液相色譜法進行鑒別和/或含量測定。本發(fā)明可以在制得粗品步驟及干燥步驟前就進行檢測，可以更好更全面的反映最終產(chǎn)品中17α-羥基黃體酮的含量，從而保證產(chǎn)品的質量。
【專利說明】17α-羥基黃體酮的檢測方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物中活性成份的檢測方法，具體涉及的是一種合成激素類藥物所需要的中間體17 a-羥基黃體酮的檢測方法，屬于醫(yī)藥【技術領域】。

【背景技術】
[0002]本發(fā)明具體涉及到的合成激素類藥物所需要的中間體即17 a -羥基黃體酮，由它可以合成倍他米松、氫化可的松、己酸孕酮、醋酸可的松、氯地孕酮等激素類藥物，在糖代謝，抗炎等方面有很好療效。
[0003]目前，17a -羥基黃體酮的制備工藝中主要涉及制備方法為:取4-雄烯二酮進行氰醇化反應，得到氰醇化物，然后再進行縮合反應得到縮酮，最后與格氏試劑反應得到17 a -羥基黃體酮。中國專利文件一種制備黃體酮的方法(CN103524588A)涉及一種制備黃體酮的方法，該方法以4-雄烯二酮(4AD)為原料，依次經(jīng)過羥氰化、脫水、保護、氫化、加成水解反應制得黃體酮。
[0004]經(jīng)過分析可以得知，目前制備方法的整個生產(chǎn)工藝中質量控制比較簡單，可能會因為生產(chǎn)批次的不一樣，或者就算是同一批次也會生產(chǎn)出含量各不相同，品質不均勻的產(chǎn)品。如果在精制步驟進行適當?shù)蔫b別和含量測定，這無疑會對產(chǎn)品的質量和療效穩(wěn)定起著至關重要的作用。
[0005]通過查詢目前國內(nèi)外的相關文獻發(fā)現(xiàn)，僅有17 a-羥基黃體酮合成工藝的報道，還沒有關于對17 a -羥基黃體酮檢測方法的相關報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種17 a-羥基黃體酮的檢測方法，可以全面鑒別及檢測該產(chǎn)品的質量，確保了該藥物的安全有效。
[0007]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的具體技術方案如下:
[0008]17 a -羥基黃體酮的檢測方法，包括鑒別方法和/或含量測定方法，以17 a -羥基黃體酮為對照品，以體積比為50?70: 30?50的乙腈-水為流動相，用高效液相色譜法進行鑒別和/或含量測定。
[0009]所述的高效液相色譜法的色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比50?70: 30?50的乙腈-水為流動相，檢測波長為235nm，理論板數(shù)按17 a -羥基黃體酮峰計算不低于4000。
[0010]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，上述方法中的流動相為體積比60:40的乙腈-水。
[0011]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的鑒別方法具體步驟如下:
[0012]A.對照品溶液的制備:精密稱取17 a -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.2-0.4mg的溶液；
[0013]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 a-羥基黃體酮10_20mg，置50ml容量瓶中，力口乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0014]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
[0015]進一步優(yōu)選的，所述的鑒別方法具體步驟如下:
[0016]Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0017]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0018]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
[0019]根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，所述的含量測定方法具體步驟如下:
[0020]Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.2-0.4mg的溶液；
[0021]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 α-羥基黃體酮10_20mg，置50ml容量瓶中，力口乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0022]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
[0023]進一步優(yōu)選的，所述的含量測定方法具體步驟如下:
[0024]Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0025]B.供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0026]C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
[0027]以上本發(fā)明方法中未特別說明的均按照現(xiàn)有技術。
[0028]下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。
[0029]實驗例1、17 α -羥基黃體酮的鑒別方法研究
[0030]方法:高效液相色譜法
[0031]1.儀器與實驗藥
[0032]島津高效液相色譜儀，LC-10AT型泵，STO-1OA型紫外檢測器，KQ2200B型超聲波清洗器。乙腈為色譜純，水為純化水。17α-羥基黃體酮對照品為山東眾誠藥業(yè)股份有限公司實驗室精制后標定的工作對照品。17 α-羥基黃體酮樣品為山東眾誠藥業(yè)股份有限公司合成實驗室提供。
[0033]2.方法與結果
[0034]2.1樣品和對照品處理方法如下:
[0035]對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液。
[0036]供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。
[0037]測定法:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
[0038]2.2色譜條件:
[0039]色譜柱:月旭C18 (150mmX 4.6mm, 5 μ m)
[0040]流動相:乙腈-水(體積比60:40)
[0041]檢測波長:235nm
[0042]流速:1.0ml/min
[0043]結果:在擬定的條件下，樣品中有與對照品保留時間一致的色譜峰。
[0044]實驗例2、17 α -羥基黃體酮的含量測定方法研究
[0045]方法:高效液相色譜法
[0046]1.儀器與實驗藥
[0047]島津高效液相色譜儀，LC-1OAT型泵，STO-1OA型紫外檢測器，KQ2200B型超聲波清洗器。乙腈為色譜純，水為純化水。17α-羥基黃體酮對照品為山東眾誠藥業(yè)股份有限公司實驗室精制后標定的工作對照品。17 α-羥基黃體酮樣品為山東眾誠藥業(yè)股份有限公司合成實驗室提供。
[0048]2.方法與結果
[0049]2.1色譜條件:
[0050]色譜柱:月旭C18 (150mmX 4.6mm, 5 μ m)
[0051 ] 流動相:乙腈-水(體積比60:40)
[0052]檢測波長:235nm
[0053]流速:1.0ml/min
[0054]2.2溶液的制備
[0055]對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每Iml中含0.3mg的溶液；
[0056]供試品溶液的制備:精密稱定17 α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0057]2.3系統(tǒng)適用性試驗:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖(見圖1)，結果17 α -羥基黃體酮的保留時間為9.223min,17 α -羥基黃體酮峰與前后色譜峰的分離度均大于1.5，理論板數(shù)以17 α _羥基黃體酮峰計算為16632。
[0058]2.4線性關系:精密稱取17α-羥基黃體酮對照品31.4mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液，分別精密最取母液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml置1ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為線性測定溶液。分別精密量取線性測定溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值Y對溶液濃度X (mg/ml)進行線性回歸，結果如下表I所示:
[0059]表1: 17 α -羥基黃體酮線性關系試驗結果
[0060]

【權利要求】
1.17 α-羥基黃體酮的檢測方法，包括鑒別方法和/或含量測定方法，以17 α-羥基黃體酮為對照品，以體積比為50~70: 30~50的乙腈-水為流動相，用高效液相色譜法進行鑒別和/或含量測定。
2.根據(jù)權利要求1所述的17α-羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于:所述的高效液相色譜法的色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比50~70: 30~50的乙腈-水為流動相，檢測波長為235nm，理論板數(shù)按17 α -羥基黃體酮峰計算不低于4000。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的17α -羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述鑒別方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17α-羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.2-0.4mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α-羥基黃體酮10-20mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
4.根據(jù)權利要求3所述的17α-羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述鑒別方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.3mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的17α -羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述的含量測定方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α-羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.2-0.4mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α-羥基黃體酮10-20mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中，檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
6.根據(jù)權利要求5所述的17α-羥基黃體酮的檢測方法，其特征在于，所述的含量測定方法具體步驟如下: Α.對照品溶液的制備:精密稱取17 α -羥基黃體酮對照品適量，用乙腈制成每1ml中含0.3mg的溶液； B.供試品溶液的制備:精密稱定17α -羥基黃體酮15mg，置50ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液； C.液相色譜測定色譜峰:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀中， 檢測出供試品色譜中與對照品色譜峰保留時間相一致的色譜峰，按外標法以峰面積計算其含量。
【文檔編號】G01N30/06GK104076103SQ201410332429
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月11日 優(yōu)先權日:2014年7月11日
【發(fā)明者】高英涵, 李義, 李新山 申請人:山東眾誠藥業(yè)股份有限公司