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      一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑的制作方法

      文檔序號:6249923閱讀:493來源:國知局
      一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑的制作方法
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7-10g,磷酸氫二鈉16-20g,過硼酸鈉0.1-0.5g,甘油20-30ml,酶底物5-40mg,10-30mL乙醇,所述抗干擾單組份酶底物顯色試劑的pH值為4.0-6.0。本發(fā)明通過將抗干擾單組份酶底物顯色試劑的pH設(shè)置為4.0-6.0,使抗干擾單組份酶底物顯色試劑用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段時,具有較好的穩(wěn)定性、且具有較小的顯色背景;且單組份的顯色液避免了酶底物顯色試劑在使用之間需要將A、B液混合的步驟,減少了操作時間,提高了效率,避免了酶底物顯色試劑的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變,進而提高了酶底物顯色試劑的靈敏度。
      【專利說明】一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑

      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001] 本發(fā)明涉及酶底物顯色試劑領(lǐng)域,具體地,涉及一種抗干擾單組份酶底物顯色試 劑。

      【背景技術(shù)】
      [0002] 酶底物即TMB,用于ELISA反應(yīng)。底物產(chǎn)生一種可溶性淡藍色的末端產(chǎn)物,可在370 或635nm在分光光度計上讀取。其適用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段的定量和定性分析。 其檢驗的原理是:當(dāng)標(biāo)記在抗體或抗原上的酶與顯色液中的酶底物、雙氧水等反應(yīng),加入終 止液后溶液由無色變成黃色,黃色深淺反應(yīng)ELISA體系中抗原抗體結(jié)合的多少,從而判斷 某種抗原或抗體的多少。在通過酶標(biāo)儀測度吸光值,判斷免疫反應(yīng)的程度。
      [0003] 現(xiàn)有市售的酶聯(lián)免疫試劑盒所采用酶底物顯色劑液大多為雙組份,分A液和B液, 使用之前需要先混勻,在使用上存在缺點一是不夠方便,二是在包裝材料上存在成本提高 和資源浪費;三是使用中的混合過程容易造成批間質(zhì)量不均一;四是還存在穩(wěn)定性差、保 存時間短、顯色背景高、靈敏度低等的缺點。
      [0004] 現(xiàn)有技術(shù)的酶底物顯色試劑及其制備方法,由A液和B液等體積混合后得到,所 述A液各組分的摩爾濃度為:檸檬酸0? 01-0. 5mol/L,磷酸氫二鈉0? 01-0. 5mol/L,過氧化氫 0. 01-0. 5mol/L,EDTA0. 1-lmmol/L;所述B液包括酶底物、HC1和聚乙烯吡咯烷酮,所述酶底 物的摩爾濃度為〇.l-lmm〇l/L,所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L,所述聚乙烯吡咯烷 酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為〇. 1-10%。


      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,以克服現(xiàn) 有顯色液顯色背景高、穩(wěn)定性差、靈敏度低的問題。
      [0006] 此外,本發(fā)明還包括上述抗干擾單組份酶底物顯色試劑的應(yīng)用。
      [0007] 本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是:一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑, 每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7-10g,磷酸氫二鈉16-20g,過硼酸鈉0. 1-0. 5g, 甘油20-30ml,酶底物5-40mg,10-30mL乙醇,所述單組份酶底物顯色試劑的PH值為 4. 0_6. 0〇
      [0008] 現(xiàn)有的酶底物顯色試劑為雙組份顯色液,在使用前需要將兩種組分混勻后才能進 行顯色測試,該過程不僅浪費時間,操作麻煩,且會導(dǎo)致在混合兩種組分時顯色液的有效成 分揮發(fā),從而導(dǎo)致酶底物顯色試劑的靈敏度降低;且現(xiàn)有的顯色液沒有對其pH進行限定, 使得現(xiàn)有顯色液在顯色過程中顯色背景較高,且穩(wěn)定性差;本發(fā)明將酶底物顯色試劑設(shè)置 為單組份,且將其顯色液的pH值設(shè)置為4. 0-6. 0,此外,本發(fā)明的抗干擾單組份酶底物顯色 試劑中將傳統(tǒng)的過氧化氫過氧化脲替換成過硼酸鈉,其具有更好的氧化性。
      [0009] 實驗證明,抗干擾單組份酶底物顯色試劑在pH置為4. 0-6. 0之間具有較好的穩(wěn)定 性,且在顯色過程中具有顯小的顯色背景。
      [0010]進一步地,PH值為 4. 5-5. 0。
      [0011] 實驗證明,酶底物顯色試劑在pH置為4. 5-5. 0為抗干擾單組份酶底物顯色試劑穩(wěn) 定性最好的pH值,且具有最小的顯色背景。
      [0012] 進一步地,檸檬酸為9-10g,磷酸氫二鈉18-20g。
      [0013] 實驗證明,檸檬酸為9-10g,磷酸氫二鈉18_20g的抗干擾單組份酶底物顯色試劑 具有更好的穩(wěn)定性。
      [0014] 進一步地,酶底物的質(zhì)量設(shè)置為10_30mg。
      [0015] 將酶底物的質(zhì)量設(shè)置為10_30mg能有效的提高顯色效果,提高顯色的靈敏度。
      [0016] 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑的應(yīng)用,將所述的單組份酶底物顯色試劑應(yīng)用 到酶聯(lián)免疫試劑盒。
      [0017] 綜上,本發(fā)明的有益效果是: 1、 通過將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的抗干擾單組份酶底物顯色試劑用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的 顯色階段,避免了酶底物顯色試劑在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟,簡化操作流 程,減少了操作時間,提高了效率,同時避免了因A、B液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色 劑的顯色效果;避免了酶底物顯色試劑的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變,進而提高了酶底 物顯色試劑的靈敏度 2、 通過將抗干擾單組份酶底物顯色試劑的pH設(shè)置為4. 0-6. 0,使抗干擾單組份酶底物 顯色試劑用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段時,具有較好的穩(wěn)定性、且具有較小的顯色背景。

      【具體實施方式】
      [0018] 下面結(jié)合實施例,對發(fā)明作進一步地的詳細說明,但本發(fā)明的實施方式不限于此。
      [0019] 實施例1 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷 酸氫二鈉16g,過硼酸鈉0.lg,甘油20ml,酶底物5mg,10mL乙醇,所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為4.0。
      [0020] 實施例2 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷 酸氫二鈉16g,過硼酸鈉0.lg,甘油20ml,酶底物5mg,10mL乙醇,所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為4. 5。
      [0021] 實施例3: 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷 酸氫二鈉16g,過硼酸鈉0.lg,甘油20ml,酶底物5mg,10mL乙醇,所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為5.0。
      [0022] 實施例4 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷 酸氫二鈉16g,過硼酸鈉0.lg,甘油20ml,酶底物5mg,10mL乙醇,所述單組份酶底物顯色試 劑的PH值為6.0。
      [0023] 實施例5: 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每lOOOmL的顯色液包括以下組分:檸檬酸10g,磷 酸氫二鈉20g,過硼酸鈉0. 5g,甘油30ml,酶底物40mg,30mL乙醇,所述單組份酶底物顯色 試劑的PH值為5.0。
      [0024] 實施例6 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸9g,磷 酸氫二鈉18g,過硼酸鈉0. 2g,甘油25ml,酶底物10mg,20mL乙醇,所述單組份酶底物顯色 試劑的PH值為5.0。
      [0025] 實施例7 : 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸9g,磷 酸氫二鈉18g,過硼酸鈉0. 2g,甘油25ml,酶底物30mg,20mL乙醇,所述單組份酶底物顯色 試劑的PH值為5.0。

      【權(quán)利要求】
      1. 一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,其特征在于,每lOOOmL的顯色液包括以下組 分:檸檬酸7-10g,磷酸氫二鈉16-20g,過硼酸鈉0? 1-0. 5g,甘油20-30ml,酶底物5-40mg, 10-30mL乙醇,所述抗干擾單組份酶底物顯色試劑的PH值為4. 0-6. 0。
      2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,其特征在于,所述PH值 為 4. 5-5. 0。
      3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,其特征在于,所述檸 檬酸為9-10g,磷酸氫二鈉18-20g。
      4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種抗干擾單組份酶底物顯色試劑,其特征在于,所述酶 底物的質(zhì)量設(shè)置為10_30mg。
      5. -種如權(quán)利要求1或2所述的抗干擾單組份酶底物顯色試劑的應(yīng)用,其特征在于,將 所述的單組份酶底物顯色試劑應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑盒。
      【文檔編號】G01N33/558GK104459114SQ201410685367
      【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
      【發(fā)明者】葉正義, 張志新, 何遠立, 陶家春 申請人:成都威爾諾生物科技有限公司
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