堿性磷酸酶的酶促化學(xué)發(fā)光底物液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種堿性磷酸酶的酶促化學(xué)發(fā)光底物液，含有0.4mg/mL的9,10-二氫吖啶衍生物，0.05mol/L的三羥基甲烷和0.5%的十二烷基磺酸鈉。本發(fā)明的酶促化學(xué)發(fā)光底物液發(fā)光快，強(qiáng)度高，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，可達(dá)30～60分鐘，可完全滿足臨床檢測(cè)的需要，其主要性能指標(biāo)達(dá)到了國(guó)外產(chǎn)品水平，大大降低了發(fā)光底物的成本。本發(fā)明的酶促化學(xué)發(fā)光底物液本底值相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度不高于3000，AP濃度在0.1U/mL時(shí)，發(fā)光強(qiáng)度RLU值可達(dá)315000±65000，信號(hào)強(qiáng)，靈敏度高，特異性強(qiáng)。
【專利說明】堿性磷酸酶的酶促化學(xué)發(fā)光底物液
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，涉及堿性磷酸酶的酶促化學(xué)發(fā)光底物液。
【背景技術(shù)】
[0002]酶促化學(xué)發(fā)光底物液屬于免疫診斷【技術(shù)領(lǐng)域】。本世紀(jì)70年代中期Arakawe首次報(bào)道用發(fā)光信號(hào)進(jìn)行酶免疫分析，利用發(fā)光的化學(xué)反應(yīng)分析超微量物質(zhì)，特別是用于臨床免疫分析中檢驗(yàn)超微量活性物質(zhì)。目前，這一技術(shù)已成為臨床醫(yī)學(xué)的常規(guī)檢測(cè)手段?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)是將化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。其檢測(cè)原理與放射免疫(RIA)和酶免疫(EIA)相似，不同之處是以發(fā)光物質(zhì)代替放射性核素或酶作為標(biāo)記物，并借助其自身的發(fā)光強(qiáng)度直接進(jìn)行測(cè)定。
[0003]化學(xué)發(fā)光免疫分析既具有放射免疫的高靈敏度，又具有酶聯(lián)免疫的操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，易于標(biāo)準(zhǔn)化操作。且測(cè)試中不使用有毒有害的試劑，試劑保持期長(zhǎng)，應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究和臨床實(shí)驗(yàn)診斷工作，成為非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。
[0004]化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)的原理在于免疫反應(yīng)中的酶作用于發(fā)光底物。發(fā)光底物在酶的作用下，底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)其回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)，可同時(shí)發(fā)射出光子。利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器即可測(cè)量光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與樣品中的待測(cè)物質(zhì)的量成正比。由此可以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的含量。
[0005]與放射免疫試劑(RIA)相比，化學(xué)發(fā)光避免了放射性核素的污染以及對(duì)操作人員的傷害，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)兼具高靈敏度的優(yōu)勢(shì)。
[0006]與酶免(ELISA)產(chǎn)品相比，靈敏度與可測(cè)范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于酶免產(chǎn)品，兼具ELISA法簡(jiǎn)便的操作方法與較短的反應(yīng)時(shí)間。
[0007]與進(jìn)口全自動(dòng)發(fā)光相比，試劑成本遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于進(jìn)口全自動(dòng)發(fā)光試劑，為開放體系，也可適用其他發(fā)光檢測(cè)儀器檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供堿性磷酸酶的酶促化學(xué)發(fā)光底物液。
[0009]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的堿性磷酸酶(AP)的酶促化學(xué)發(fā)光底物液，含有0.05-1.0mg/mL的9，10- 二氫吖啶衍生物，0.01-0.2mol/L的三羥基甲烷(Tris)和5g/L的十二烷基磺酸鈉(SDS)。
[0010]優(yōu)選地，所述底物液中含有0.4mg/mL的9，10- 二氫吖啶衍生物，0.05mol/L的三羥基甲烷和5g/L的十二烷基磺酸鈉。
[0011]其中，所述9，10- 二氫吖啶衍生物的分子式如下:
[0012]
【權(quán)利要求】
1.堿性磷酸酶的酶促化學(xué)發(fā)光底物液，其特征在于，含有0.05-1.0mg/mL的9，10-二氫吖啶衍生物，0.01-0.2mol/L的三羥基甲烷和0.05_10g/L的十二烷基磺酸鈉； 其中，所述9，10-二氫吖啶衍生物的分子式如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的底物液，其特征在于，含有0.4mg/mL的9，10- 二氫吖啶衍生物，0.05mol/L的三羥基甲烷和5g/L的十二烷基磺酸鈉。
3.權(quán)利要求1所述底物液的制備方法，其特征在于，先配制0.01-0.2mol/L的三羥基甲烷溶液，其中含有0.05-10g/L的十二烷基磺酸鈉，調(diào)節(jié)pH值后，加入9，10- 二氫吖啶衍生物，攪拌均勻，避光保存。
4.權(quán)利要求1或2所述底物液在化學(xué)發(fā)光免疫分析中的應(yīng)用，其特征在于，在180C -26°C溫度范圍內(nèi)pH值為9.3±0.2，相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度RLU ( 3000，堿性磷酸酶濃度為.0.lU/mL 時(shí)，發(fā)光強(qiáng)度 RLU 值達(dá) 315000±65000。
【文檔編號(hào)】G01N21/76GK103868913SQ201410047286
【公開日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年2月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月11日
【發(fā)明者】張志棟, 趙文姬, 陳志強(qiáng), 高芬, 陳歡 申請(qǐng)人:中生北控生物科技股份有限公司