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      使用峰曲線的生物電子結(jié)合測定的制作方法

      文檔序號:11160432閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種方法,其包括:

      使樣品與包含兩種或更多種電活性部分的混合物接觸以形成測定混合物,其中:

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少兩種具有不同的氧化還原電位E0,

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少兩種包含過渡金屬絡(luò)合物和錨定基團,且

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種包含捕獲配體,其配置成被靶標識別并結(jié)合;

      使所述測定混合物與電極在這樣的條件下接觸,其中所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種形成自組裝單層(SAM);以及

      檢測信號以確定電化學循環(huán)伏安法峰曲線。

      2.一種方法,其包括:

      使樣品與包含兩種或更多種電活性部分的混合物接觸以形成測定混合物,其中:

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少兩種具有不同的氧化還原電位E0,

      所述兩種或更多種電活性部分包含過渡金屬絡(luò)合物和錨定基團,且

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種包含能夠與所述靶標結(jié)合的捕獲配體;

      使所述測定混合物與電極在這樣的條件下接觸,其中所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種形成自組裝單層(SAM);以及

      檢測信號以確定電化學循環(huán)伏安法峰曲線作為所述樣品中所述靶標存在狀況的指示。

      3.檢測樣品中至少一種靶標分析物的方法,其包括:

      a)使所述樣品與以下接觸以形成夾心:

      包含特異性針對所述靶標的結(jié)合位點的第一捕獲配體,

      固體支持物,

      包含特異性針對所述靶標的結(jié)合位點的第二捕獲配體,其結(jié)合在與所述第一捕獲配體不同的位置,

      能夠與結(jié)合伴侶結(jié)合的標簽,和

      能夠與所述第二捕獲配體的探針和作為替代靶標的EAM結(jié)合的結(jié)合伴侶;

      b)分離所述夾心和未結(jié)合的結(jié)合伴侶;

      c)使來自步驟b)的所述夾心或所述未結(jié)合的結(jié)合伴侶與包含兩種或更多種電活性部分物質(zhì)的混合物接觸以形成測定混合物,其中:

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少兩種具有不同的氧化還原電位E0,

      所述兩種或更多種電活性部分包含過渡金屬絡(luò)合物和錨定基團,且

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種包含能夠與所述靶標結(jié)合的捕獲配體;

      d)使所述測定混合物與電極在其中EAM形成自組裝單層(SAM)的條件下接觸;以及

      e)檢測信號以確定電化學循環(huán)伏安法峰曲線作為所述樣品中所述靶標存在狀況的指示。

      4.檢測樣品中至少一種靶標分析物的方法,所述方法包括:

      提供包含電極的固體支持物,所述電極包含預(yù)形成的自組裝單層(SAM),所述預(yù)形成的自組裝單層包含兩種或更多種電活性部分物質(zhì),其中:

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少兩種具有不同的氧化還原電位E0,

      所述兩種或更多種電活性部分包含過渡金屬絡(luò)合物和錨定基團,且

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種包含能夠與所述靶標結(jié)合的捕獲配體;

      使所述電極與所述樣品接觸;以及

      檢測信號以確定電化學循環(huán)伏安法峰曲線作為所述樣品中所述靶標存在狀況的指示。

      5.檢測樣品中至少一種靶標分析物的方法,所述方法包括:

      a)提供包含電極的固體支持物,所述電極包含預(yù)形成的自組裝單層(SAM),所述預(yù)形成的自組裝單層包含兩種或更多種電活性部分物質(zhì),其中:

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少兩種具有不同的氧化還原電位E0,

      所述兩種或更多種電活性部分包含過渡金屬絡(luò)合物和錨定基團,且

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種包含能夠與所述靶標結(jié)合的捕獲配體;

      b)使所述樣品與以下接觸以形成夾心:

      包含特異性針對所述靶標的結(jié)合位點的第一捕獲配體,

      固體支持物,

      包含特異性針對所述靶標的結(jié)合位點的第二捕獲配體,其結(jié)合在與所述第一捕獲配體不同的位置,

      能夠與結(jié)合伴侶結(jié)合的標簽,和

      能夠與所述第二捕獲配體的探針和作為替代靶標的EAM結(jié)合的結(jié)合伴侶;

      c)分離所述夾心和未結(jié)合的結(jié)合伴侶;

      d)使來自步驟c)的所述夾心或所述未結(jié)合的結(jié)合伴侶與來自步驟a)的所述電極接觸;以及

      e)檢測信號以確定電化學(E-chem)循環(huán)伏安法峰曲線(CVPP)作為所述樣品中所述靶標存在狀況的指示。

      6.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述電化學循環(huán)伏安法峰曲線指示所述樣品中靶標的存在狀況。

      7.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述混合物包含在溶液中的第一電活性部分(EAM1)和第二電活性部分(EAM2),其中EAM1包含配置成被所述靶標結(jié)合的捕獲配體。

      8.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述靶標通過所述捕獲配體直接與所述EAM1結(jié)合,并且其中與所述靶標結(jié)合的所述EAM1的至少一部分不存在于所述SAM中。

      9.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中在所述靶標存在下的所述電化學循環(huán)伏安法峰曲線與在所述靶標不存在下的所述電化學循環(huán)伏安法峰曲線不同。

      10.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中在所述靶標存在下所述SAM中的EAM1和EAM2的比例與在所述靶標不存在下的電化學循環(huán)伏安法峰曲線不同。

      11.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述電化學循環(huán)伏安法峰曲線與所述靶標的量成比例。

      12.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述靶標結(jié)合在(i)與固體支持物結(jié)合的第一捕獲分子和(ii)包含與結(jié)合伴侶結(jié)合的探針的第二捕獲分子之間,所述結(jié)合伴侶能夠與EAM1結(jié)合。

      13.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述靶標結(jié)合在(i)與固體支持物結(jié)合的第一捕獲分子和(ii)具有與結(jié)合伴侶結(jié)合的探針的第二捕獲分子之間,并被移除。

      14.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中將樣品引入包含EAM1和EAM2的預(yù)形成SAM。

      15.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中靶標與EAM1結(jié)合,引起能量的重組;從而導致E10變?yōu)镋1'0,其進而改變CVPP(E10、E1'0和E20)。

      16.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述捕獲配體和捕獲分子獨立地選自:單克隆抗體、單克隆抗體片段、多克隆抗體、多克隆抗體片段、蛋白質(zhì)、肽、適配體、核酸、或小分子。

      17.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述過渡金屬絡(luò)合物包括選自鐵、釕和鋨的過渡金屬。

      18.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述過渡金屬絡(luò)合物包括二茂鐵和經(jīng)取代的二茂鐵。

      19.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述錨定基團包括硫、胺、硅、吡啶基、或與電極相互作用的其他基團。

      20.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述電化學循環(huán)伏安法法峰曲線與存在于所述混合物中未結(jié)合的替代靶標的量成比例,并且所述替代靶標的量與所述樣品中所述靶標的量成反比。

      21.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其包括具有E10的第一電活性部分(EAM1)和具有E20的第二電活性部分(EAM2),其中EAM1還包含可被所述靶標或所述替代靶標識別并結(jié)合的所述捕獲配體。

      22.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述靶標或所述替代靶標通過所述捕獲配體與EAM1結(jié)合。

      23.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述靶標或替代靶標如果結(jié)合,則在空間上阻礙所述EAM1形成所述SAM。

      24.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述靶標或替代靶標與EAM1結(jié)合,引起能量的重組。

      25.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中所述捕獲配體獨立地選自:單克隆抗體、單克隆抗體片段、多克隆抗體、多克隆抗體片段、蛋白質(zhì)、肽、適配體、核酸、和小分子。

      26.前述權(quán)利要求中任一項所述的方法,其中至少一個清洗步驟作為夾心分離和分開過程的一部分進行。

      27.在電極上產(chǎn)生單層的方法,其包括進行前述權(quán)利要求中任一項所述的方法。

      28.組合物,其通過前述權(quán)利要求中任一項的方法形成。

      29.組合物,其包含:

      電極,其包含自組裝單層(SAM),所述自組裝單層包含兩種或更多種電活性部分物質(zhì),其中:

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少兩種具有不同的氧化還原電位E0

      所述兩種或更多種電活性部分包含過渡金屬絡(luò)合物和錨定基團,且

      所述兩種或更多種電活性部分中的至少一種包含捕獲配體,其配置成被所述靶標或替代靶標識別并結(jié)合。

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