本發(fā)明涉及生物樣品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種血清樣品稀釋液及檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
生命體中的微量元素與化學(xué)、醫(yī)藥學(xué)、生物學(xué)、環(huán)境學(xué)、食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)等有著較為密切的關(guān)系，微量元素在人體中含量很少但在完成某些生理功能上發(fā)揮著重要的作用，各種微量元素在體內(nèi)部保持著一種相對(duì)平衡狀態(tài)，過(guò)多或過(guò)少均會(huì)引起疾病。
樣品的前處理是一個(gè)非常耗時(shí)、繁瑣且容易引入分析測(cè)定誤差的過(guò)程。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，分析技術(shù)和分析儀器不斷發(fā)展，對(duì)分析的靈敏度、精密度和自動(dòng)化程度要求越來(lái)越高。針對(duì)人血清等生物樣品基質(zhì)的復(fù)雜性?，F(xiàn)在人血清微量元素檢測(cè)的樣品前處理方法主要有濕法消解法、微波消解法和直接稀釋的方法。濕法消解法是用酸液或堿液在加熱條件下破壞樣品中的有機(jī)物或還原性物質(zhì)的方法，該方法需要消耗大量的消解試劑，給綠色環(huán)境帶來(lái)不利。微波消解法是在高溫高壓下降樣品徹底消解，可在密閉環(huán)境下避免易揮發(fā)元素的損失，但微波消解儀較為昂貴，樣品處理較為費(fèi)時(shí)，不適合大量樣本的處理。直接稀釋法是用稀釋劑稀釋樣品的前處理方法，操作簡(jiǎn)單，短時(shí)間內(nèi)可處理大量樣品，血清經(jīng)過(guò)稀釋劑稀釋后一般可直接進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)大大減少樣品外污染的可能。但直接稀釋法中基質(zhì)匹配問(wèn)題是需要關(guān)注的問(wèn)題。
本發(fā)明旨在樣品前處理環(huán)節(jié)提供一種環(huán)境適應(yīng)性好，測(cè)量精度高，操作簡(jiǎn)捷，適合于醫(yī)療單位大樣本檢測(cè)的人血清微量元素檢測(cè)樣品前處理的稀釋液及方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明旨在提供一種環(huán)境適應(yīng)性好、測(cè)量精度高，操作簡(jiǎn)捷，適合于醫(yī)療單位大樣本檢測(cè)的人血清微量元素檢測(cè)樣品前處理的稀釋液。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種血清樣品稀釋液，包括如下組分：0.3％-1.0％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.1％-0.5％v/v的曲通X-100、0.1％-1.2％w/v的EDTA、0.1％-0.5％w/v的硝酸銨，其余為超純水。
進(jìn)一步地，包括如下組分：0.5％-0.8％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.2％-0.4％v/v的曲通X-100、0.5％-1.0％w/v的EDTA、0.2％-0.4％w/v的硝酸銨，其余為超純水。
進(jìn)一步地，0.6％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.3％v/v的曲通X-100、0.8％w/v的EDTA、0.3％w/v的硝酸銨，其余為超純水。
進(jìn)一步地，所述稀釋液在室溫下的電導(dǎo)率為1800-2000μS/cm。
進(jìn)一步地，所述稀釋液的pH為7.0-7.5。
進(jìn)一步地，所用試劑純度至少為高純級(jí)。
本發(fā)明還提供了上述血清樣品稀釋液的制備方法，包括如下步驟：
(1)分別稱取固體EDTA和硝酸銨，并分別配制成一定濃度的EDTA溶液和硝酸銨溶液；
(2)用移液管準(zhǔn)確移取配方量的正四丁基氫氧化銨、曲通X-100、硝酸銨溶液和EDTA溶液，超聲分散于超純水中，混合均勻后，即得稀釋液。
本發(fā)明還提供了上述血清樣品稀釋液作為檢測(cè)血清中微量元素的稀釋液的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了上述血清樣品稀釋液對(duì)血清中微量元素進(jìn)行檢測(cè)的方法：采用所述稀釋液將血清稀釋至原濃度的1/10，靜置后將稀釋后的血清樣品上多元素同時(shí)測(cè)量電感耦合等離子質(zhì)譜裝置進(jìn)行檢測(cè)。
本發(fā)明還提供了包含上述血清樣品稀釋液的檢測(cè)試劑盒。
相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢(shì)：
(1)本發(fā)明旨在樣品前處理環(huán)節(jié)提供一種環(huán)境適應(yīng)性好，測(cè)量精度高，操作簡(jiǎn)捷，適合于醫(yī)療單位大樣本檢測(cè)的人血清微量元素檢測(cè)樣品前處理的稀釋液及方法。
(2)血清成分相對(duì)復(fù)雜、粘度大，含有各種蛋白、多肽以及無(wú)機(jī)鹽成分等，如果直接進(jìn)樣，可能會(huì)堵塞管路。本發(fā)明的稀釋液對(duì)血清進(jìn)行一定程度的稀釋，盡量保證能夠準(zhǔn)確檢測(cè)血清中的微量元素含量，又不影響血清中各組分存在狀態(tài)，達(dá)到基質(zhì)匹配和穩(wěn)定血清中微量元素的雙重目的。
本發(fā)明中各組分的功能：
正四丁基氫氧化銨：堿性有機(jī)溶劑，為血清樣品檢測(cè)提供碳源；
曲通X-100：表面活性劑，增加脂膜的溶解性和分散性，穩(wěn)定蛋白不沉淀；
硝酸銨：除去血清中的氯化鈉，氯離子與銨根離子結(jié)合生成氯化銨，硝酸根離子與鈉離子生成硝酸鈉，生成兩種較易電離的化合物，從而有效的減少了檢測(cè)過(guò)程中的積鹽效應(yīng)；
EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)：作為一種金屬離子穩(wěn)定劑，可以有效的穩(wěn)定血清中的金屬離子。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例一
一種血清樣品稀釋液，包括如下組分：0.6％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.3％v/v的曲通X-100、0.8％w/v的EDTA、0.3％w/v的硝酸銨，其余為超純水，所用試劑純度至少為高純級(jí)，稀釋液在室溫下的電導(dǎo)率為1800μS/cm，pH為7.0。
上述血清樣品稀釋液的制備方法，包括如下步驟：
(1)分別稱取固體EDTA和硝酸銨，并分別配制成一定濃度的EDTA溶液和硝酸銨溶液；
(2)用移液管準(zhǔn)確移取配方量的正四丁基氫氧化銨、曲通X-100、硝酸銨溶液和EDTA溶液，超聲分散于超純水中，混合均勻后，即得稀釋液。
上述血清樣品稀釋液對(duì)血清中微量元素進(jìn)行檢測(cè)的方法：采用所述稀釋液將血清稀釋至原濃度的1/10，靜置后將稀釋后的血清樣品上多元素同時(shí)測(cè)量電感耦合等離子質(zhì)譜裝置進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)施例二
一種血清樣品稀釋液，包括如下組分：0.5％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.2％v/v的曲通X-100、0.5％w/v的EDTA、0.4％w/v的硝酸銨，其余為超純水，所用試劑純度至少為高純級(jí)，稀釋液在室溫下的電導(dǎo)率為1900μS/cm，pH為7.1。
上述血清樣品稀釋液的制備方法，包括如下步驟：
(1)分別稱取固體EDTA和硝酸銨，并分別配制成一定濃度的EDTA溶液和硝酸銨溶液；
(2)用移液管準(zhǔn)確移取配方量的正四丁基氫氧化銨、曲通X-100、硝酸銨溶液和EDTA溶液，超聲分散于超純水中，混合均勻后，即得稀釋液。
上述血清樣品稀釋液對(duì)血清中微量元素進(jìn)行檢測(cè)的方法：采用所述稀釋液將血清稀釋至原濃度的1/10，靜置后將稀釋后的血清樣品上多元素同時(shí)測(cè)量電感耦合等離子質(zhì)譜裝置進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)施例三
一種血清樣品稀釋液，包括如下組分：0.8％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.4％v/v的曲通X-100、1.0％w/v的EDTA、0.2％w/v的硝酸銨，其余為超純水，所用試劑純度至少為高純級(jí)，稀釋液在室溫下的電導(dǎo)率為1950μS/cm，pH為7.2。
上述血清樣品稀釋液的制備方法，包括如下步驟：
(1)分別稱取固體EDTA和硝酸銨，并分別配制成一定濃度的EDTA溶液和硝酸銨溶液；
(2)用移液管準(zhǔn)確移取配方量的正四丁基氫氧化銨、曲通X-100、硝酸銨溶液和EDTA溶液，超聲分散于超純水中，混合均勻后，即得稀釋液。
上述血清樣品稀釋液對(duì)血清中微量元素進(jìn)行檢測(cè)的方法：采用所述稀釋液將血清稀釋至原濃度的1/10，靜置后將稀釋后的血清樣品上多元素同時(shí)測(cè)量電感耦合等離子質(zhì)譜裝置進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)施例四
一種血清樣品稀釋液，包括如下組分：0.3％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.5％v/v的曲通X-100、0.1％w/v的EDTA、0.5％w/v的硝酸銨，其余為超純水，所用試劑純度至少為高純級(jí)，稀釋液在室溫下的電導(dǎo)率為2000μS/cm，pH為7.3。
上述血清樣品稀釋液的制備方法，包括如下步驟：
(1)分別稱取固體EDTA和硝酸銨，并分別配制成一定濃度的EDTA溶液和硝酸銨溶液；
(2)用移液管準(zhǔn)確移取配方量的正四丁基氫氧化銨、曲通X-100、硝酸銨溶液和EDTA溶液，超聲分散于超純水中，混合均勻后，即得稀釋液。
上述血清樣品稀釋液對(duì)血清中微量元素進(jìn)行檢測(cè)的方法：采用所述稀釋液將血清稀釋至原濃度的1/10，靜置后將稀釋后的血清樣品上多元素同時(shí)測(cè)量電感耦合等離子質(zhì)譜裝置進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)施例五
一種血清樣品稀釋液，包括如下組分：1.0％v/v的正四丁基氫氧化銨、0.1％v/v的曲通X-100、1.2％w/v的EDTA、0.1％w/v的硝酸銨，其余為超純水，所用試劑純度至少為高純級(jí)，稀釋液在室溫下的電導(dǎo)率為1850μS/cm，pH為7.5。
上述血清樣品稀釋液的制備方法，包括如下步驟：
(1)分別稱取固體EDTA和硝酸銨，并分別配制成一定濃度的EDTA溶液和硝酸銨溶液；
(2)用移液管準(zhǔn)確移取配方量的正四丁基氫氧化銨、曲通X-100、硝酸銨溶液和EDTA溶液，超聲分散于超純水中，混合均勻后，即得稀釋液。
上述血清樣品稀釋液對(duì)血清中微量元素進(jìn)行檢測(cè)的方法：采用所述稀釋液將血清稀釋至原濃度的1/10，靜置后將稀釋后的血清樣品上多元素同時(shí)測(cè)量電感耦合等離子質(zhì)譜裝置進(jìn)行檢測(cè)。
對(duì)比例
用五種不同的稀釋劑對(duì)微量元素進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)數(shù)據(jù)如表1和表2所示。其中稀釋劑5即本發(fā)明實(shí)施例一中所選擇的稀釋劑。
表1比較不同稀釋劑的加標(biāo)回收率
表2不同稀釋劑對(duì)-Serum control level II的檢測(cè)值
注：稀釋劑1：硝酸(HNO3)
稀釋劑2：HNO3+曲通X-100
稀釋劑3：正四丁基氫氧化銨(Tetra-n-butylammonium hydroxide)
稀釋劑4：正四丁基氫氧化銨+曲通X-100
稀釋劑5：正四丁基氫氧化銨+曲通X-100+乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)+硝酸銨(NH4NO3)
-Serum control level II：一種濃度已知的標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)
結(jié)論：由表1和表2可知，采用稀釋劑5的檢測(cè)結(jié)果最接近于參考值，可見(jiàn)，其檢測(cè)結(jié)果最佳。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。