一種九節(jié)茶提取物及其制劑的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥材提取物及其制劑的檢測分析方法，具體涉及一種九節(jié)茶提 取物及其制劑的檢測方法，屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 九節(jié)茶又名接骨金粟蘭、九節(jié)花、九節(jié)風(fēng)等，為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb. )Nakai的干燥地上部分，主要分布于我國長江以南的廣東、廣西、江西、福 建、湖南、浙江等省區(qū)，為多年生常綠草本或亞灌木植物。九節(jié)茶的藥用歷史悠久，歷代醫(yī)書 都有記載其廣泛的藥用價值。它具有清熱涼血、消炎止痛、活血消斑、祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)等 功效，用于流行性感冒、風(fēng)熱感冒、咽喉炎、肺炎、菌痢、急性胃腸炎、闌尾炎、瘡瘍膿腫、蜂窩 織炎等。
[0003] 九節(jié)茶含酚類、鞣質(zhì)、黃酮苷、香豆素、有機酸、內(nèi)酯等成分，其中鞣質(zhì)（tannins) 又稱單寧，是廣泛存在于植物體內(nèi)一類結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的多元酚類化合物。以前對鞣質(zhì)的研 宄較少，多認(rèn)為是無用的雜質(zhì)將其去除，近年來，隨著分析、分離手段的進步，逐步發(fā)現(xiàn)鞣質(zhì) 具有抑制脂質(zhì)過氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理活性，使其在臨床應(yīng)用中日益受到 重視，并且對鞣質(zhì)的含量測定方法提出了更高的要求。目前，關(guān)于九節(jié)茶相關(guān)制劑中異嗪皮 啶、迷迭香酸等成分的含量測定有較多報道，雖也有關(guān)于該制劑中鞣質(zhì)含量測定的文獻報 道，但采用的多是《中國藥典》2010年版一部收載的鞣質(zhì)含量測定方法。鞣質(zhì)的含量測定方 法有干酪素法、皮粉法、高錳酸鉀法、絡(luò)合滴定法等，其中最常用的是干酪素法。干酪素法是 《中國藥典》2010年版一部收載的鞣質(zhì)的含量測定方法，但該測定法中對所使用的試劑"干 酪素"未作明確規(guī)定，不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的干酪素以及同一廠家生產(chǎn)的不同批次的干酪素 均對鞣質(zhì)的含量測定結(jié)果的影響很大，導(dǎo)致測定結(jié)果的重復(fù)性差、準(zhǔn)確度低，從而影響到產(chǎn) 品的質(zhì)量可控性。此外，該測定方法中供試品溶液制備時需放置過夜，操作用時長，鞣質(zhì)提 取不完全，也影響到測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的旨在提供一種九節(jié)茶提取物及其制劑的檢測 方法，上述檢測方法具有可操作性強、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、操作用時短的特點，上述檢測方 法能很好地控制九節(jié)茶提取物及其制劑的質(zhì)量，進一步提高了其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，保證其質(zhì) 量的穩(wěn)定、均一、可控。同時，該方法進一步提高了鞣質(zhì)的提取效率和結(jié)果的準(zhǔn)確度，節(jié)省了 檢驗工時。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] 一種九節(jié)茶提取物及其制劑的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟（以下步驟 應(yīng)避光操作）：
[0007] 1)對照品溶液的制備：精密稱取沒食子酸對照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水 溶解并稀釋至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品 溶液，每lml對照品溶液中含沒食子酸0. 05mg;
[0008]2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對照品溶液0. 5ml、1.0ml、2. 0ml、3. 0ml、4. 0ml、 5. 0ml，分別置25ml棕色量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液lml，再分別加水11. 5ml、1lml、10ml、 9ml、8ml、7ml，用濃度為29 %的碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘以相應(yīng)的試劑為 空白，按照紫外-可見分光光度法，在760nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0009] 3)供試品溶液的制備：取定量的九節(jié)茶提取物或以九節(jié)茶提取物制成的固體制 劑粉末，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水250ml，稱定重量，經(jīng)過提取，放冷，再稱定重量， 用水補足減失的重量，搖勻，靜置使固體物沉淀，濾過，棄去初濾液50ml，精密量取續(xù)濾液 20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
[0010] 4)供試品溶液中總酚的測定：精密量取供試品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入 磷鉬鎢酸試液lml，加水10ml，用濃度為29%的碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘 以相應(yīng)的試劑為空白，按照紫外-可見分光光度法，在760nm的波長處測定吸光度，由步驟 2)的標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量（mg)，計算，即得總酚的含量；
[0011] 5)供試品溶液中不被吸附的多酚的測定：精密量取供試品溶液25ml，加至已盛有 〇. 6g干酪素極細粉的100ml具塞錐形瓶中，密塞，置30°C水浴中保溫1小時，時時振搖，取 出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入磷鉬鎢酸 試液lml，加水10ml，用濃度為29 %的碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勾，放置30分鐘以相應(yīng)的 試劑為空白，按照紫外-可見分光光度法，在760nm的波長處測定吸光度，由步驟2)的標(biāo)準(zhǔn) 曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量（mg)，計算，即得不被吸附的多酚的含量；
[0012] 6)供試品中鞣質(zhì)含量的計算：根據(jù)供試品溶液稀釋倍數(shù)分別計算出供試品中的 總酚量和不被吸附的多酚量，再按下式計算供試品中鞣質(zhì)的含量：鞣質(zhì)含量=總酚量一不 被吸附的多酚量。
[0013] 所述九節(jié)茶提取物或以九節(jié)茶提取物制成的固體制劑粉末是指以金粟蘭科植物 草珊瑚Sarcandraglabra(Thunb. )Nakai的干燥地上部分為原料，經(jīng)水提乙醇沉淀、干燥后 得到的提取物，或所得提取物通過加入一些輔料制成顆粒劑、膠囊劑、片劑等固體制劑經(jīng)粉 碎后得到的粉末。
[0014] 實現(xiàn)本發(fā)明的目的還可以通過采取如下技術(shù)方案達到：
[0015] 作為優(yōu)選，在步驟5)中，所述的干酪素極細粉是指能全部通過八號篩，并含能通 過九號篩不少于95%的干酪素粉末。
[0016] 作為優(yōu)選，在步驟3)中，所述的九節(jié)茶提取物及其制劑的檢測方法粉末取樣量為 0. 25g〇
[0017] 作為優(yōu)選，在步驟3)中，所述的提取方法為加熱回流提取或加熱超聲處理。
[0018] 作為優(yōu)選，在步驟3)中，加熱回流提取的時間為0. 5-1小時。
[0019]作為優(yōu)選，在步驟3)中，加熱超聲處理的時間為1-2小時。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0021] 1.本發(fā)明首次建立了一種能準(zhǔn)確測定九節(jié)茶提取物及其制劑中鞣質(zhì)的含量測定 方法，該方法能很好地控制九節(jié)茶提取物及其制劑的質(zhì)量，進一步提高了其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)， 保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一、可控。
[0022] 2.《中國藥典》2010年版一部收載的鞣質(zhì)的含量測定方法采用干酪素法，本發(fā)明 通過大量創(chuàng)造性的實施例發(fā)現(xiàn)該測定法中所使用的試劑"干酪素"對鞣質(zhì)的含量測定結(jié)果 影響很大。采用不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的干酪素以及同一廠家生產(chǎn)的不同批次的干酪素對多批 九節(jié)茶提取物及其制劑分別進行了鞣質(zhì)的含量測定，結(jié)果同一批九節(jié)茶提取物及其制劑分 別采用不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的干酪素以及同一廠家生產(chǎn)的不同批次的干酪素其鞣質(zhì)的含量 測定結(jié)果偏差很大，進而發(fā)現(xiàn)是由于"干酪素"的粒度差異造成了測定結(jié)果的偏差大，使用 粒度為"極細粉"的干酪素時，測定結(jié)果明顯高于使用粒度為"中粉"的干酪素。為了進一 步確定干酪素粒度與鞣質(zhì)的含量測定結(jié)果的相關(guān)性，將原廠家生產(chǎn)的粒度為中粉的干酪素 粉碎成極細粉后，與粉碎前作了對比研宄，結(jié)果也表明當(dāng)干酪素粒度為"極細粉"時，樣品的 鞣質(zhì)的含量測定結(jié)果明顯高于"中粉"，且測定結(jié)果重復(fù)性很好。原因是干酪素在該測定法 中的作用是選擇性地吸附鞣質(zhì)類成分，起到定量反應(yīng)的作用，其吸附作用強弱直接影響到 供試品中鞣質(zhì)的含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。由于"鞣質(zhì)含量=總酚量一不被吸附的多酚量"， 而不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的干酪素其粒度差異較大，干酪素的吸附能力取決于其粒度大小，粒 度小者比表面積大，對供試品中的鞣質(zhì)吸附完全，供試品鞣質(zhì)的含量測定結(jié)果準(zhǔn)確度高。干 酪素粒度大者其比表面積小，吸附作用弱，使不被吸附的多酚含量偏高，從而導(dǎo)致供試品鞣 質(zhì)的含量測定結(jié)果偏低。《中國藥典》2010年版一部收載的鞣質(zhì)的含量測定方法中對所使 用的試劑"干酪素"未作明確規(guī)定，針對該方法中的不足之處，本發(fā)明中建立的方法將干酪 素粒度明確為"極細粉"，新建立的方法重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，提高了九節(jié)茶提取物及其制劑 質(zhì)量的可控性。
[0023] 3.《中國藥典》2010年版一部收載的鞣質(zhì)含量測定方法中供試品溶液制備時需放 置過夜，操作用時長，鞣質(zhì)提取不完全，本發(fā)明供試品溶液的制備采用加熱回流法或加熱超 聲法代替供試品的靜置過夜，提高了鞣質(zhì)的提取效率和結(jié)果的準(zhǔn)確度，節(jié)省了檢驗工時。
[0024] 綜上所述，本發(fā)明建立的九節(jié)茶提取物及其制劑中鞣質(zhì)的含量測定方法具有可操 作性強、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、操作用時短等優(yōu)點，方法能很好地控制九節(jié)茶提取物及其制 劑的質(zhì)量，進一步提高了其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一、可控。為達到本發(fā)明的 目的，發(fā)明中還對九節(jié)茶提取物及其制劑中鞣質(zhì)的含量測定方法進行了重復(fù)性、中間精密 度、加樣回收率等方法學(xué)驗證試驗，試驗結(jié)果表