一種熒光光譜法測膽固醇含量鑒別地溝油的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及地溝油檢測技術(shù)，特別是涉及一種用熒光光譜儀檢測膽固醇含量的來鑒別地溝油的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]地溝油的鑒別方法也很多，氣-質(zhì)聯(lián)用法和高效液相色譜法是將地溝油分解，與標準譜圖進行對比，進行檢測。此外還有測定電導率、粘度、介電常數(shù)檢測地溝油的方法，或者測定地溝油在特定溶液中粒徑分布的檢驗法，采用放射性測量檢測地溝油的方法，各種生物檢測法。這些方法的出現(xiàn)都因為地溝油的成分復雜，不同來源的地溝油性質(zhì)不同造成的，目前還持續(xù)出現(xiàn)各種地溝油的檢測方法。地溝油中一般會混入動物油，動物油中含有油脂，會存在比普通植物油多的膽固醇，所以從膽固醇方面入手，也是檢測地溝油的有效手段。膽固醇的測定方法有液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法、紫外可見分光光度法等，也出現(xiàn)了化學發(fā)光法。以上方法各有優(yōu)缺點，色譜法存在操作繁瑣，需考慮的影響因素多等缺點，紫外可見分光光度法雖然可以簡單測定，但定性分析困難，影響吸收光譜的形狀和強度的因素多。
[0003]目前，國內(nèi)尚未制定地溝油鑒別檢測的國家標準方法，雖然國內(nèi)外研宄人員進行了一些探索，鑒別地溝油在進行理化檢測時，可分別檢驗諸如水分含量、比重、折光率、皂化值、酸值、羰基值、過氧化值、碘值重金屬、脂肪酸相對不飽和度、膽固醇、殘留檢測、氧化產(chǎn)物檢測等指標。但是對地溝油檢測的報道并不多見，其主要原因是高酸值的地溝油成分比較復雜，其檢測方法還處于實驗研宄階段，要準確性定量目前仍比較困難。由于地溝油具有外源性污染物質(zhì)特性，所以針對餐具洗滌劑表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉混在地溝油里，而食用油不含這種人工合成化學物質(zhì)的現(xiàn)象。熒光光譜法主要是檢測地溝油中的十二烷基苯磺酸鈉，地溝油中膽固醇的檢測采用高效液相色譜或者氣相色譜法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述問題，本發(fā)明的目的之一在于提供了一種用熒光光譜儀檢測地溝油中膽固醇的方法。
[0005]為達上述目的，本發(fā)明一種熒光光譜法測膽固醇含量鑒別地溝油的方法。包括以下步驟:
[0006]標準曲線的繪制:取梯度體積的指定濃度的膽固醇-CTAB水溶液，再用等體積的CTAB水溶液稀釋至不同濃度梯度的膽固醇-CTAB水溶液，測定不同濃度梯度膽固醇-CTAB水溶液的熒光光譜得到膽固醇的膽固醇溶液的標準曲線；
[0007]樣品檢測:取待測樣品和合格植物油分別置于容量瓶中，于兩容量瓶中并分別依次加入等量的KOH溶液和等量的無水乙醇，搖勻后，置于50°C?60°C恒溫水浴鍋進行4h?6h皂化，之后冷卻至室溫，加入等量的正己烷，輕輕振蕩容量瓶，后靜置分層I?2h，將上層液倒出，重復上述萃取過程兩次以上，后將萃取液合并，用移液管吸取等量萃取液分別置于玻璃瓶中，用氮氣將瓶中正己烷吹干，加入等量的所述CTAB溶液進行熒光檢測；
[0008]待測樣品和合格植物油測得的熒光光強通過與標準曲線對比得到待測樣品和合格植物油的膽固醇含量；
[0009]待測樣品和合格植物油膽固醇含量的比較:待測樣品膽固醇含量高于合格植物油膽固醇含量時，則待測樣品中含地溝油。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)不同之處在于本發(fā)明取得了如下技術(shù)效果:
[0011]本發(fā)明以膽固醇為鑒別地溝油的特異性指標，利用熒光光譜儀為主要檢測工具，通過反復試驗構(gòu)建出完整的檢測條件，本發(fā)明能快速、精確地檢測出樣品中是否含有地溝油，檢出限為0.0094g/Lo
[0012]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步說明。
【附圖說明】
[0013]圖1為不同濃度膽固醇的熒光光譜圖；
[0014]圖2為膽固醇標準工作曲線；
[0015]圖3不同物質(zhì)的處理后的熒光光譜圖。
【具體實施方式】
[0016]以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明上述的和另外的技術(shù)特征和優(yōu)點作更詳細的說明。
[0017]步驟A、標準溶液的配置:
[0018](I)由于膽固醇在水中溶解度小，所以借助CTAB將其增溶，增加其溶解度。稱取CTAB加水溶解，搖勻配成摩爾濃度為3.0?4.0mmoI/L的CTAB溶液。
[0019](2)膽固醇標準儲備溶液:
[0020]取膽固醇加無水乙醇溶解，搖勻配成質(zhì)量濃度為0.8?1.2g/L的膽固醇溶液。
[0021](3)將已配置好的溶液分別移取2.5mL，分別置于10mL的容量瓶中，待乙醇蒸干后，用配好的CTAB溶液A定容至刻度，配成0.025g/L的膽固醇溶液。膽固醇標準系列溶液:用移液管分別移取上述配好的膽固醇0.2,0.4、1.2,2.0,2.8,3.6,4.4,5.2,6.0,8.0mL的上述配好的膽固醇溶液到1mL的試管中，用CTAB溶液定容，膽固醇溶液的濃度分別為0.0005,0.001,0.003,0.005,0.007,0.009,0.011,0.013,0.015,0.02g/L。
[0022]步驟B、樣品處理:
[0023]分別取植物油、豬油、地溝油、以及油食用油與地溝油混合后的油2.0?4.0g于50mL容量瓶中，依次加入3?5mL 0.5mol/L的KOH溶液和8?12mL無水乙醇。輕輕搖勻后，置于50°C?60°C恒溫水浴鍋進行4h?6h皂化。期間每隔20?30min振搖容量瓶，使油樣造化完全。阜化完成后，取出容量瓶冷卻至室溫。依次加入8?1mL正己燒，輕輕振蕩容量瓶，后靜置分層I?2h。將上層液倒出，重復上述萃取過程兩次，后將三次萃取液合并，用移液管吸取萃取液5?SmL置于小玻璃瓶中，用氮氣將瓶中正己烷吹干，加入1ml溶液A進行熒光檢測。
[0024]步驟C、熒光光譜儀條件的構(gòu)建:
[0025]熒光光譜儀:F2500型，日本日立
[0026]狹縫寬度:EX= 5nm，EM = 5nm，λ ex = 266nm，λ em = 280nm
[0027]掃描速度:光電倍增管電壓400V
[0028]步驟D、樣品測定和結(jié)果判斷:
[0029]在上述熒光光譜條件下，測定膽固醇標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中膽固醇的含量。
[0030]如待測樣品中在激發(fā)波長為266nm處，能檢出280nm處的發(fā)射峰，則表明待測樣品中存在膽固醇，與合格植物油相比，如果超過了合格植物油的峰值，則認為此油為地溝油或者是植物油中混有地溝油。
[0031]測定原理:常用合格的植物油一般不含或者含有少量的膽固醇，地溝油中由于混入了動物油或者動物脂肪，其中含有膽固醇。雖然經(jīng)過一定的加工，但其膽固醇的含量會比較大，通過檢測膽固醇的含量鑒別地溝油專屬性強。
[0032]實施例1
[0033]用熒光光譜儀檢測植物油中膽固醇的方法，包括如下步驟:
[0034](I) CTAB (十六烷基三甲基溴化銨)溶液:準確稱取CTAB0.6380g，放入50mL燒杯中，用少量蒸餾水溶解，然后置于500mL容量瓶中定容，得到CTAB的濃度為3.5mmol/L的溶液，即為溶液A。
[0035](2)準確稱取膽固醇0.0lOOg，溶于一定量的無水乙醇中，后置于1mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度線，即可得質(zhì)量濃度為1.0g/L膽固醇標準溶液。將已配置好的溶液分別移取2.5mL，分別置于10mL的容量瓶中，待乙醇蒸干后，用配好的CTAB溶液A定容至刻度，配成0.025g/L的膽固醇溶液。
[0036](3)膽固醇標準系列溶液:用移液管分別移取上述配好的膽固醇0.2,0.4,1.2、2.0,2.8,3.6,4.4,5.2,6.0,8.0mL的上述配好的膽固醇溶液到1mL的試管中，用CTAB溶液定容，膽固醇溶液的濃度分別為 0.0005,0.001,0.003,0.005,0.007,0.009,0.011,0.013、0.015,0.02g/Lo
[0037]步驟B、樣品處理
[0038]取來自金龍魚植物油4.0g于50mL容量瓶中，依次加入5mL0.5mol/lK0H溶液和12mL無水乙醇。輕輕搖勻后，置于55°C恒溫