3EIU
[0253] 含HPIgG的高點(diǎn)校準(zhǔn)品，其中HPIgG濃度：68.766EIU。
[0254] 具體實(shí)現(xiàn)時(shí)，上述各組分中均可含有BSA和防腐劑，BSA的濃度為0. 05g/ml，防腐 劑使用疊氮鈉，濃度為〇.〇2g/ml。
[0255] -種H. pylori IgG的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0256] 將樣本、校準(zhǔn)品加樣至反應(yīng)杯中；
[0257] 加入緩沖液100y1、包被HP抗原的磁性微球溶液20y1混勻后，37°C溫育10分 鐘；
[0258]自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗并抽走廢液；
[0259] 再加入標(biāo)記抗人IgG抗體的標(biāo)記示蹤物100y1后，37°C溫育10分鐘；
[0260]自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗并抽走廢液；
[0261] 加入底物后檢測(cè)光強(qiáng)度；
[0262] 通過(guò)校準(zhǔn)品修正后的工作曲線可根據(jù)樣本檢測(cè)光強(qiáng)度自動(dòng)計(jì)算得出樣本的 H. pylori IgG濃度。
[0263] 實(shí)施例2
[0264] -種測(cè)定H. pylori IgM的檢測(cè)試劑盒，包括如下組分：
[0265] 包被HP抗原的磁性微球溶液
[0266]HP抗原濃度：50 y g/1 磁性微球濃度：1. 2mg/ml
[0267] 標(biāo)記抗人IgM抗體的ABEI溶液
[0268]抗人IgM抗體濃度：50 y g/1 ABEI濃度：0? 5mg/l
[0269] 含HP IgM的低點(diǎn)校準(zhǔn)品，其中HP IgM濃度：10. 573EIU
[0270] 含HPIgM的高點(diǎn)校準(zhǔn)品，其中HPIgM濃度：68.766EIU。
[0271] 具體實(shí)現(xiàn)時(shí)，上述各組分中均可含有BSA和防腐劑，BSA的濃度為0. 05g/ml，防腐 劑使用疊氮鈉，濃度為〇.〇2g/ml。
[0272] -種H. pylori IgM的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0273] 將樣本、校準(zhǔn)品加樣至反應(yīng)杯中；
[0274] 加入緩沖液100y1、包被HP抗原的磁性微球溶液20y1混勻后，37°C溫育10分 鐘；
[0275]自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗并抽走廢液；
[0276] 再加入標(biāo)記抗人IgM抗體的標(biāo)記示蹤物100y1后，37°C溫育10分鐘；
[0277]自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗并抽走廢液；
[0278] 加入底物后檢測(cè)光強(qiáng)度；
[0279] 通過(guò)校準(zhǔn)品修正后的工作曲線可根據(jù)樣本檢測(cè)光強(qiáng)度自動(dòng)計(jì)算得出樣本的 H.pyloriIgM濃度。
[0280] 實(shí)施例3
[0281] -種測(cè)定H.pyloriIgA的檢測(cè)試劑盒，包括如下組分：
[0282] 包被HP抗原的磁性微球溶液
[0283]HP抗原濃度：50yg/1 磁性微球濃度：1. 2mg/ml
[0284] 標(biāo)記抗人IgA抗體的ABEI溶液
[0285] 抗人IgA抗體濃度：50yg/1ABEI濃度：0? 5mg/l
[0286] 含HPIgA的低點(diǎn)校準(zhǔn)品，其中HPIgA濃度：10. 573EIU
[0287] 含HPIgA的高點(diǎn)校準(zhǔn)品，其中HPIgA濃度：68.766EIU。
[0288] 具體實(shí)現(xiàn)時(shí)，上述各組分中均可含有BSA和防腐劑，BSA的濃度為0. 05g/ml，防腐 劑使用疊氮鈉，濃度為〇.〇2g/ml。
[0289] -種H.pyloriIgA的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0290] 將樣本、校準(zhǔn)品加樣至反應(yīng)杯中；
[0291] 加入緩沖液100y1、包被HP抗原的磁性微球溶液20y1混勻后，37°C溫育10分 鐘；
[0292]自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗并抽走廢液
[0293] 再加入標(biāo)記抗人IgA抗體的標(biāo)記示蹤物100y1后，37°C溫育10分鐘；
[0294]自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗并抽走廢液；
[0295] 加入底物后檢測(cè)光強(qiáng)度；
[0296] 通過(guò)校準(zhǔn)品修正后的工作曲線可根據(jù)樣本檢測(cè)光強(qiáng)度自動(dòng)計(jì)算得出樣本的 H.pyloriIgA濃度。
[0297] 實(shí)施例4
[0298] -種測(cè)定H.pylori總抗體的檢測(cè)試劑盒，包括如下組分：
[0299] 包被HP抗原的磁性微球溶液；
[0300] HP抗原濃度：50yg/1 磁性微球濃度：1. 2mg/ml
[0301] 標(biāo)記金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA)的ABEI溶液；
[0302] SPA濃度：50yg/1ABEI濃度：0? 5mg/l
[0303] 含HP總抗體的低點(diǎn)校準(zhǔn)品，其中HP總抗體濃度：10. 573EIU
[0304] 含HP總抗體的高點(diǎn)校準(zhǔn)品，其中HP總抗體濃度：68.766EIU。
[0305] 具體實(shí)現(xiàn)時(shí)，上述各組分中均可含有BSA和防腐劑，BSA的濃度為0. 05g/ml，防腐 劑使用疊氮鈉，濃度為〇. 〇2g/ml。
[0306] -種H.pylori總抗體的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
[0307] 將樣本、校準(zhǔn)品加樣至反應(yīng)杯中；
[0308] 加入緩沖液100y1、包被HP抗原的磁性微球溶液20y1混勻后，37°C溫育10分 鐘；
[0309] 自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗后，抽走廢液；
[0310] 再加入標(biāo)記SPA的標(biāo)記示蹤物100y1后，37°C溫育10分鐘；
[0311] 自動(dòng)灌注系統(tǒng)緩沖液進(jìn)行清洗并抽走廢液；
[0312] 加入底物后檢測(cè)光強(qiáng)度；
[0313] 通過(guò)校準(zhǔn)品修正后的工作曲線可根據(jù)樣本檢測(cè)光強(qiáng)度自動(dòng)計(jì)算得出樣本的 H.pylori總抗體濃度。
[0314] 對(duì)比例1
[0315] 一種測(cè)定H.pyloriIgG的檢測(cè)試劑盒和IGF-1化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)方法，與實(shí)施例 1的檢測(cè)試劑盒基本相同，不同之處在于：
[0316] 在檢測(cè)方法中，先對(duì)樣本進(jìn)行1:20預(yù)稀釋處理后，再進(jìn)行檢測(cè)。
[0317] 從醫(yī)院選取已通過(guò)其他臨床確診分別為HP陽(yáng)性和HP陰性的成人體檢樣本各100 例，分別使用上述實(shí)施例1-4、對(duì)比例1、及西門子IMMULIE2000H.pyloriIgG檢測(cè)試劑盒 作為對(duì)照例1對(duì)此200例樣本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下表1所示。
[0318] 表1、臨床確診成人樣本與各抗體檢測(cè)結(jié)果對(duì)比表
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括如下組分： 直接包被或間接連接幽門螺桿菌抗原的磁性微球溶液；和 直接包被或間接連接抗人IgG抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；和/或 直接包被或間接連接抗人IgM抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；和/或 直接包被或間接連接抗人IgA抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；和/或 直接包被或間接連接金黃色葡萄球菌A蛋白的標(biāo)記示蹤物溶液。
2. 如權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述直接包被或間 接連接幽門螺桿菌抗原的磁性微球溶液為： 包被有幽門螺桿菌抗原的磁性微球溶液；或?yàn)椋? 包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁性微球溶液，標(biāo)記幽門螺桿菌抗原的異硫氰酸熒光 素溶液；或?yàn)椋? 包被有鏈霉親和素的磁性微球溶液，生物素標(biāo)記的幽門螺桿菌抗原溶液。
3. 如權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述直接包被或間 接連接抗人IgG抗體的標(biāo)記示蹤物溶液為： 包被有抗人IgG抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；或?yàn)椋? 包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的標(biāo)記示蹤物溶液，標(biāo)記抗人IgG抗體的異硫氰酸熒光 素溶液；或?yàn)椋? 包被有鏈霉親和素的標(biāo)記示蹤物溶液，生物素標(biāo)記的抗人IgG抗體溶液。
4. 如權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述直接包被或間 接連接抗人IgM抗體的標(biāo)記示蹤物溶液為： 包被有抗人IgM抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；或?yàn)椋? 包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的標(biāo)記示蹤物溶液，標(biāo)記抗人IgM抗體的異硫氰酸熒光 素溶液；或?yàn)椋? 包被有鏈霉親和素的標(biāo)記示蹤物溶液，生物素標(biāo)記的抗人IgM抗體溶液。
5. 如權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述直接包被或間 接連接抗人IgA抗體的標(biāo)記示蹤物溶液為： 包被有抗人IgA抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；或?yàn)椋? 包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的標(biāo)記示蹤物溶液，標(biāo)記抗人IgA抗體的異硫氰酸熒光 素溶液；或?yàn)椋? 包被有鏈霉親和素的標(biāo)記示蹤物溶液，生物素標(biāo)記的抗人IgA抗體溶液。
6. 如權(quán)利要求1所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述直接包被或間 接連接金黃色葡萄球菌A蛋白的標(biāo)記示蹤物溶液為： 包被有金黃色葡萄球菌A蛋白的標(biāo)記示蹤物溶液；或?yàn)椋? 包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的標(biāo)記示蹤物溶液，標(biāo)記金黃色葡萄球菌A蛋白的異硫 氰酸熒光素溶液；或?yàn)椋? 包被有鏈霉親和素的標(biāo)記示蹤物溶液，生物素標(biāo)記的金黃色葡萄球菌A蛋白溶液。
7. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述HP 抗原和磁性微球之間與各抗人抗體/金黃色葡萄球菌A蛋白和標(biāo)記示蹤物之間不采用相同 的化合物間接連接。
8. 如權(quán)利要求1-6所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述標(biāo)記示蹤物 包括有發(fā)光標(biāo)記物，所述發(fā)光標(biāo)記物為金剛烷、異魯米諾及其衍生物、魯米諾及其衍生物和 吖啶醋中的任意一種。
9. 如權(quán)利要求1-6所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述標(biāo)記示蹤物 還包括有化學(xué)發(fā)光催化劑，所述化學(xué)發(fā)光催化劑為堿性磷酸酶或過(guò)氧化物酶。
10. -種幽門螺桿菌抗體檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟： 反應(yīng)步驟：將待測(cè)樣本與直接包被或間接連接HP抗原的磁性微球溶液混勻后， 25-40°C溫育5-20分鐘，后加入直接包被或間接連接抗人IgA抗體/抗人IgG抗體/抗人 IgM抗體/金黃色葡萄球菌A蛋白的標(biāo)記示蹤物，25-40°C溫育5-20分鐘，后清洗，得到反應(yīng) 產(chǎn)物； 檢測(cè)步驟：外加磁場(chǎng)將所述反應(yīng)產(chǎn)物沉淀，去除上清液，清洗后，加入化學(xué)發(fā)光激發(fā)物， 檢測(cè)發(fā)出的相對(duì)光強(qiáng)度，通過(guò)計(jì)算得到待測(cè)樣本中的幽門螺桿菌IgA/IgG/IgM/總抗體濃 度。
11. 權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒在化學(xué)發(fā)光分析儀中的 應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種幽門螺桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，包括有如下組分：直接包被或間接連接幽門螺桿菌抗原的磁性微球溶液；和直接包被或間接連接抗人IgG抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；和/或直接包被或間接連接抗人IgM抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；和/或直接包被或間接連接抗人IgA抗體的標(biāo)記示蹤物溶液；和/或直接包被或間接連接金黃色葡萄球菌A蛋白的標(biāo)記示蹤物溶液。本發(fā)明還公開(kāi)了相應(yīng)的幽門螺桿菌抗體檢測(cè)方法及其應(yīng)用。本發(fā)明可檢測(cè)幽門螺桿菌IgG抗體、幽門螺桿菌IgM、幽門螺桿菌IgA及幽門螺桿菌總抗體多種抗體，更好地適用幽門螺桿菌感染者的復(fù)雜情況，且可在無(wú)需對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)稀釋的情況下，準(zhǔn)確檢測(cè)幽門螺桿菌抗體。
【IPC分類】G01N21-64, G01N33-558
【公開(kāi)號(hào)】CN104614522
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510069230
【發(fā)明人】饒微, 孫普, 李昀軒, 劉望, 羅凱, 李婷華, 袁錦云
【申請(qǐng)人】深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年2月10日