氯丙嗪的免疫膠體金檢測(cè)卡及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及動(dòng)物源食品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及氯丙嗪的免疫膠體金 檢測(cè)卡及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 氯丙嗪屬于吩噻嗪類代謝物，這種藥物主要在肝臟代謝，易產(chǎn)生藥物殘留，殘留的 氯丙嗪和部分具有原藥活性的代謝物能引起白細(xì)胞減少和粒細(xì)胞缺乏癥，從而引起人體肝 臟、腎臟的病變，還會(huì)引起眼部的并發(fā)癥等。有某些國(guó)家和地區(qū)的飼養(yǎng)者在食用性動(dòng)物喂養(yǎng) 中添加氯丙嗪，導(dǎo)致相關(guān)動(dòng)物性食品中有氯丙嗪的殘留，因此定期對(duì)氯丙嗪殘留進(jìn)行檢測(cè) 成為許多國(guó)家的監(jiān)控的必要手段。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)對(duì)于氯丙嗪的檢測(cè)主要是高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜法 等檢測(cè)方法，但這些技術(shù)的缺陷明顯：設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、難以推廣。所以，建立一種簡(jiǎn)單、 有效、適合基層使用的測(cè)定方法是極其必要的。本發(fā)明的目的是研制一種更適合企業(yè)進(jìn)行 現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)且快捷簡(jiǎn)便、成本低廉的定性檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)以上情況，本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種氯丙 嗪的免疫膠體金檢測(cè)卡及其制備方法，可有效解決能快速、簡(jiǎn)便地檢測(cè)出氯丙嗪的問(wèn)題。
[0005] 本發(fā)明的氯丙嗪膠體金檢測(cè)卡，包括包被了單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的膠體金結(jié) 合墊、包被了氯丙嗪-BSA和羊抗鼠 IgG的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸水墊、PVC膠板和塑料 模具組成，在PVC膠板的一端依次粘附樣品墊、結(jié)合墊，中間黏貼硝酸纖維素膜，另一端粘 附吸水墊。
[0006] 本發(fā)明的氯丙嗪膠體金檢測(cè)卡的制備方法，是由以下步驟實(shí)現(xiàn)： (1) 膠體金溶液制備：取I L三角燒瓶1個(gè)，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸 (HAuCl4 ·3Η20) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況 下加入1%檸檬酸三鈉（Na3C6H 5O7 · 2H20)溶液5-7 mL，繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變 為透明的紫紅色時(shí)，維持5 min后停止加熱，補(bǔ)水至原體積，冷卻至室溫，2-8°C保存?zhèn)溆茫?(2) 抗體的預(yù)處理：將要標(biāo)記的氯丙嗪抗體在1000 r/min, 4°C條件下，離心20 min, 取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成I mg/mL;或者用0.01 mol/L PBS稀釋成I mg/ml，過(guò) 0. 22 Mm 濾膜； (3) 膠體金標(biāo)記物的制備：取步驟（1)中的膠體金溶液40 mL，用0. 25 mol/L K2C03調(diào) 節(jié)膠體金溶液pH至8. 5,電磁攪拌器250 r/min攪拌，逐滴加入4 mL含0.3 mg抗體蛋白 的蛋白溶液，反應(yīng)10 min;逐滴加入4 mL 10% BSA，繼續(xù)攪拌反應(yīng)10 min;金標(biāo)抗體溶液常 溫低速（1500 r/min)離心10 min,棄去由凝聚的金顆粒形成的沉淀；紅色上清溶液4?, 12000 r/min離心20 min,棄上清，收集沉淀，將沉淀用金標(biāo)抗體稀釋液定容至I mL,制備 成氯丙嗪?jiǎn)慰寺】贵w膠體金標(biāo)記物； (4) 膠體金膜的制備：將步驟（3)氯丙嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物用劃 膜儀以5 PL/cm的濃度均勻噴在載體玻璃纖維素膜上，室溫自然晾干或者37°C烘干3 h，制 成含氯丙嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的膠體金膜； (5) 包被膜制備：將羊抗鼠 IgG抗體、氯丙嗪蛋白質(zhì)偶聯(lián)物稀釋成I mg/mL，用劃膜儀依 次以I PL/cm的濃度噴涂在硝酸纖維素膜上，制備成包被膜，37°C包被2 h后，室溫自然晾 干或者37 °C烘干； (6) 樣品墊前處理：將樣品墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，在空氣濕度低于60% 的條件下，室溫自然晾干； (7) 檢測(cè)卡的組裝：PVC膠板自上而下依次粘貼樣品墊、膠體金膜、包被膜和吸水棉，組 裝成試紙條，切割成一定寬度的長(zhǎng)條，再將試紙條安裝在長(zhǎng)條扁平殼狀的檢測(cè)卡外殼中。
[0007] 所述步驟（5)中所包被的檢測(cè)線T設(shè)在質(zhì)控線C的下方； 所述步驟（6)中的樣品墊處理液是由I g小牛血清蛋白（BSA)和0. 8 g氯化鈉（NaCl), 用含有 0· 5%TRIT0N-100 的 0· 01 mol/L PBS 定容至 100 mL ; 本發(fā)明可有效用于測(cè)定氯丙嗪，方法簡(jiǎn)單，方便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確。
【附圖說(shuō)明】
[0008] 圖1為本發(fā)明氯丙嗪的免疫膠體金檢測(cè)卡的結(jié)構(gòu)圖：圖中1.加樣孔 2.檢測(cè)線 3.質(zhì)控線4.檢測(cè)孔5.試紙條6.檢測(cè)卡外殼。
[0009] 圖2為本發(fā)明氯丙嗪的免疫膠體金檢測(cè)卡內(nèi)的試紙條的剖視結(jié)構(gòu)圖，圖中7.樣品 墊8.膠體金結(jié)合墊9. PVC膠板10.硝酸纖維素膜11.吸水墊。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1 圖1、圖2所示的實(shí)施例：圖中9為PVC膠板；7為樣品墊；8為膠體金結(jié)合墊，該膠體金 結(jié)合墊上包被了單克隆抗體膠體金標(biāo)記物；10為包被膜，即硝酸纖維素膜，該硝酸纖維素 膜上包被了氯丙嗪-BSA和羊抗鼠 IgG ;11為吸水墊，由吸水材料如濾紙制成。
[0011] 在PVC膠板9的一端上（樣品端）粘附樣品墊7、結(jié)合墊8,樣品墊7和結(jié)合墊8 為并排結(jié)構(gòu)。
[0012] 在PVC膠板9的中間粘附硝酸纖維素膜10。在硝酸纖維素膜10上設(shè)置有羊抗鼠 IgG質(zhì)控線3和氯丙嗪-BSA檢測(cè)線2。
[0013] 在PVC膠板9的另一端粘附吸水墊11。硝酸纖維素膜10的一端與結(jié)合墊8略交 叉，另一端與吸水墊11略交叉。該試紙條5可裝入有塑料模具制成的檢測(cè)卡外殼6中，制 成檢測(cè)卡，在檢測(cè)卡外殼6的上蓋上設(shè)有加樣孔1和檢測(cè)孔4,樣品墊7正對(duì)加樣孔1，硝酸 纖維素膜10正對(duì)檢測(cè)孔4。
[0014] 實(shí)施例2 氯丙嗪膠體金檢測(cè)卡制備，是由以下步驟具體實(shí)現(xiàn)： 膠體金溶液制備：取I L三角燒瓶1個(gè)，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸 (HAuCl4 ·3Η20) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續(xù)攪拌的情況 下加入1%檸檬酸三鈉（Na3C6H 5O7 · 2H20)溶液5-7 mL，繼續(xù)攪拌加熱，當(dāng)溶液的顏色完全變 為透明的紫紅色時(shí)，維持5 min后停止加熱，補(bǔ)水至原體積