一種快速分析β-受體激動(dòng)劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本申請(qǐng)涉及物質(zhì)的分析檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種快速定性和定量分析β-受體激 動(dòng)劑如鹽酸克倫特羅的實(shí)時(shí)直接分析串聯(lián)質(zhì)譜（DART-MS/MS)分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002] β -受體激動(dòng)劑比如鹽酸克倫特羅能夠促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)從脂肪組織向肌肉 組織轉(zhuǎn)移[1]。不法商販在動(dòng)物飼料以及食物中添加鹽酸克倫特羅，以提高動(dòng)物胴體的瘦肉 率，獲取利潤(rùn)，從而導(dǎo)致食用其飼料的動(dòng)物組織和肌肉中存在不同程度的殘留。長(zhǎng)期食用含 有β -受體激動(dòng)劑殘留的食品將對(duì)人體健康產(chǎn)生極大的危害，可誘發(fā)和加重心率失常病人 的病情；另外還能引起代謝紊亂，對(duì)糖尿病人可發(fā)生酸中毒或酮中毒[2]。目前，為了保護(hù) 人身安全，中國(guó)衛(wèi)生部、農(nóng)業(yè)部、國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的第176號(hào)公告（2002)和第1519 號(hào)公告（2010)《禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用的藥物品種目錄》中包括鹽酸克倫特羅在 內(nèi)的多種β-受體激動(dòng)劑類藥物。鹽酸克倫特羅在歐盟也已禁止使用，同時(shí)在體育賽事中 也是違禁使用藥物[3]。
[0003] 目前用于檢測(cè)β-受體激動(dòng)劑之一鹽酸克倫特羅的方法有電化學(xué)法[4]、酶聯(lián)免 疫法（ELISA) [5]、高效液相色譜法（HPLC) [6]、高效液相色譜或超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 法（HPLC 或 UPLC-MS/MS) [7-8]、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS) [9]等。
[0004] 其中，酶聯(lián)免疫法優(yōu)點(diǎn)在于便捷快速，但易出現(xiàn)假陽(yáng)性；HPLC靈敏度相對(duì)較低，不 能滿足痕量檢測(cè)要求；GC-MS除了要求樣品需要大量的前處理之外，要求樣品衍生化，步驟 相對(duì)復(fù)雜；HPLC-MS/MS由于具有高效的分離能力和精確的定性、定量等特點(diǎn)，被廣泛采用， 但是該方法同樣需要大量的樣品萃?。↙LE、SPE、MIP等）、制備和分離過程，成本高，操作繁 瑣耗時(shí)，并在化合物離子化過程中存在嚴(yán)重的離子抑制和基質(zhì)效應(yīng)。
[0005] 同時(shí)，在常規(guī)的質(zhì)譜分析中，常規(guī)的ESI和APCI離子源存在嚴(yán)重的離子抑制和基 質(zhì)效應(yīng)現(xiàn)象，影響測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性；并且兩種離子源分別被局限為分析熱穩(wěn)定、極性較強(qiáng) 和熱不穩(wěn)定，極性較弱的化合物。
[0006] 因此建立一種快速、高靈敏、簡(jiǎn)化甚至無(wú)需樣品前處理的檢測(cè)方法迫在眉睫。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0024] 本申請(qǐng)的目的是提供一種利用實(shí)時(shí)直接分析串聯(lián)質(zhì)譜儀（DART-MS/MS)來(lái)快速分 析樣品中的β-受體激動(dòng)劑如鹽酸克倫特羅的方法。
[0025] 其中，快速分析包括快速的定性分析和定量分析，且質(zhì)譜可以是本領(lǐng)域常用的質(zhì) 譜，比如三級(jí)四極桿、QT0P、QTRAP等。并且，β -受體激動(dòng)劑包括鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、 妥布特羅、特布他林、非諾特羅、福莫特羅、萊克多巴胺、異丙喘寧。
[0026] 具體地，在一個(gè)方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N用于快速分析β -受體激動(dòng)劑的方法，所述 方法使用實(shí)時(shí)直接分析串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)樣品中的β-受體激動(dòng)劑進(jìn)行檢測(cè)。
[0027] 在以上或其他實(shí)施方式中，所述方法可以使用實(shí)時(shí)直接分析串聯(lián)三級(jí)四極桿質(zhì)譜 儀（DART-MS/MS)在正離子模式下，優(yōu)選在正離子多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式下，對(duì)樣品中的 β-受體激動(dòng)劑進(jìn)行檢測(cè)。
[0028] 在以上或其他實(shí)施方式中，所述方法可以使用實(shí)時(shí)直接分析串聯(lián)三級(jí)四極桿質(zhì)譜 儀（DART-MS/MS)在正離子模式下對(duì)樣品中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行檢測(cè)，得到包括各種碎片 離子的信號(hào)的質(zhì)譜圖，以其中的m/z 259. 1±0. 1作為定性母離子來(lái)判斷檢測(cè)樣品中是否 含有鹽酸克倫特羅，其中DART實(shí)時(shí)直接分析離子源的測(cè)試條件可以為：氦氣作為反應(yīng)氣， 流速為2. 5-3. 0L/min，表頭壓力為0. 50-0. 55MPa ;離子源加熱器溫度為350°C -400°C，優(yōu)選 地，離子源加熱器溫度為350°C ;去簇電壓50-80V。
[0029] 在以上或其他實(shí)施方式中，所述方法使用實(shí)時(shí)直接分析串聯(lián)三級(jí)四極桿質(zhì)譜儀 (DART-MS/MS)在正離子模式下對(duì)樣品中的鹽酸克倫特羅進(jìn)行檢測(cè)，得到包括各種碎片離子 的信號(hào)的質(zhì)譜圖，以其中的m/z 259. 1±0. 1作為定性母離子來(lái)判斷檢測(cè)樣品中是否含有 鹽酸克倫特羅，其中所述DART實(shí)時(shí)直接分析離子源的測(cè)試條件為：氦氣作為反應(yīng)氣，流速 為2. 5-3. 0L/min，表頭壓力為0. 50-0. 55MPa ;離子源加熱器溫度為350°C -400°C，優(yōu)選地離 子源加熱器溫度為350°C ;去簇電壓50-80V。
[0030] 其中，軌道移動(dòng)速度決定了峰寬，移動(dòng)速度太快，樣品來(lái)不及離子化，移動(dòng)速度太 慢，峰形不好，因此，在一些實(shí)施方式中，用于控制DART實(shí)時(shí)直接分析進(jìn)樣的軌道移動(dòng)速度 可以為0. 2-0. 6mm/s ;在另外的實(shí)施方式中，用于控制DART實(shí)時(shí)直接分析進(jìn)樣的軌道移動(dòng) 速度可以為〇. 4-0. 5mm/s，優(yōu)選地可以為0. 4mm/s。
[0031] 在一些實(shí)施方式中，用于檢測(cè)的樣品可以為動(dòng)物的尿液、血液、飼料、組織或生鮮 熟食制品。優(yōu)選地，所述動(dòng)物的尿液可以為豬尿。并且，所述檢測(cè)樣品不需要進(jìn)行任何的預(yù) 處理或前處理。
[0032] 在以上或其他實(shí)施方式中，在所得到的包括各種碎片離子的信號(hào)的質(zhì)譜圖中，以 其中的m/z 203. 0±0. 1為定量離子，并對(duì)m/z 203. 0±0. 1所對(duì)應(yīng)的信號(hào)的峰面積進(jìn)行積 分，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和m/z 203. 0±0. 1所對(duì)應(yīng)的峰面積來(lái)計(jì)算檢測(cè)樣品中的鹽酸克倫 特羅的含量。
[0033] 在一些實(shí)施方式中，鹽酸克倫特羅的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的獲得可以包括以下步驟：
[0034] 配制濃度為 0· 025、0· 05、0· 1、0· 25、0· 5、1· 0、5· 0、10· 0、50· 0、100· 0 μ g/mL 的鹽 酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0035] 實(shí)施如上所述的方法，得到包括各種碎片離子的信號(hào)的質(zhì)譜圖，以其中的m/z 203. 0±0. 1為定量離子，并對(duì)m/z 203. 0±0. 1所對(duì)應(yīng)的信號(hào)的峰面積進(jìn)行積分，以m/z 203. 0±0. 1所對(duì)應(yīng)的峰面積對(duì)鹽酸克倫特羅的濃度作圖，并對(duì)圖中符合線性范圍的點(diǎn)實(shí)行 線性擬合，得到鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。
[0036] 在一些實(shí)施方式中，可以用30-70%的乙腈水溶液來(lái)配制鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0037] 在一些實(shí)施方式，可以用50%的乙腈水溶液來(lái)配制鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0038] 在一些實(shí)施方式