包括40nm顆粒和80nm顆粒，其中全類屬單克隆抗體固 定于40nm顆粒上，而不同的全類屬多克隆抗體固定于80nm顆粒上。
[0064] 在一些實施方案中，全類屬結(jié)合劑通過銜接物固定于顆粒上。在某些實施方案中， 顆粒和全類屬結(jié)合劑之間的銜接物為蛋白質(zhì)銜接物（例如，蛋白L、蛋白A、蛋白G或蛋白A/ G)，或生物素-抗生物素蛋白，抗生物素蛋白鏈菌素，或中性抗生物素蛋白（neutravidin)， 或抗物種抗體，以固定綴合物上的另一種抗體（例如，抗-兔子或抗-小鼠抗體），能夠結(jié)合 重組蛋白質(zhì)標(biāo)記物（例如，His標(biāo)記物或FLAG標(biāo)記物）的試劑，DNA或DNA-樣分子，或合成 的免疫球蛋白-結(jié)合部分（例如，ProMetric BioSciences模擬配體）。
[0065] 在一些實施方案中，裝置是適用于檢測血液樣品或血液制品樣品中的細(xì)菌的側(cè)向 流動裝置，所述裝置包括用于樣品的流動通道和結(jié)合多種細(xì)菌抗原的全類屬結(jié)合劑（例 如，全類屬抗體），其中全類屬結(jié)合劑固定于一群80nm金顆粒上，并且進(jìn)一步包括固定于一 群40nm金顆粒上的全類屬結(jié)合劑（例如，全類屬抗體）。在進(jìn)一步的實施方案中，全類屬結(jié) 合劑結(jié)合一種或多種革蘭氏陽性細(xì)菌抗原，一種或多種革蘭氏陰性細(xì)菌抗原，或兩者。在不 同的實施方案中，結(jié)合革蘭氏陽性細(xì)菌抗原的全類屬結(jié)合劑與結(jié)合革蘭氏陰性細(xì)菌抗原的 全類屬結(jié)合劑可以在相同的金顆粒群上或在不同的金顆粒群上（例如，80nm金顆粒）。在 某些實施方案中，固定于80nm金顆粒上的全類屬結(jié)合劑是多克隆抗體，而固定于40nm金顆 粒上的全類屬結(jié)合劑是單克隆抗體。在進(jìn)一步的實施方案中，裝置包括固定于裝置的流動 通道上的捕獲結(jié)合劑（例如，捕獲抗體），其中金顆粒沿著流動通道排列，使得樣品在接觸 捕獲結(jié)合劑之前接觸有色顆粒群。在某些實施方案中，捕獲結(jié)合劑是全類屬結(jié)合劑。在其 中捕獲結(jié)合劑是全類屬結(jié)合劑的實施方案中，捕獲結(jié)合劑可以與固定于金顆粒上的全類屬 結(jié)合劑相同，或與固定于金顆粒上的全類屬結(jié)合劑不同。
[0066] 檢測細(xì)菌的方法
[0067] 在一些實施方案中，本發(fā)明提供了一種裝置和方法，其具有比現(xiàn)有裝置和方法更 寬的反應(yīng)性。特別地，所述裝置和方法能夠檢測比現(xiàn)有裝置和方法更寬范圍的細(xì)菌屬、細(xì)菌 種和/或細(xì)菌菌株。例如，所述裝置和方法能夠檢測至少100、150、200、250、300、350、400、 450或500種不同的細(xì)菌。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了一種方法或裝置，其包括能夠 檢測超過1 X 107、1 X 106、1 X 105、1 X 104、1 X 103或1 X 102菌落形成單位（CFU) /mL細(xì)菌或相 等濃度的源自該細(xì)菌水平的抗原的全類屬抗體。
[0068] 在一些實施方案中，本發(fā)明提供了一種篩選液體樣品中細(xì)菌的存在的方法。在該 方法的不同實施方案中，樣品可以是任何生物流體，包括透析樣品。在一些實施方案中，透 析樣品選自選自血液透析流體和腹膜透析流體。在一些實施方案中，樣品是其中已經(jīng)保存 了組織的流體樣品。在一些實施方案中，組織選自血細(xì)胞培養(yǎng)物、干細(xì)胞培養(yǎng)物以及骨和軟 骨移植物材料。在一些實施方案中，樣品是血液或血液制品，包括但不限于全血、白細(xì)胞、 造血干細(xì)胞、血小板、紅細(xì)胞、血漿、骨髓和透析流體，包括將本發(fā)明的側(cè)向流動裝置接觸樣 品，并且檢測抗體群與樣品的結(jié)合，其中結(jié)合表示樣品中存在細(xì)菌，而沒有結(jié)合表示樣品中 不存在細(xì)菌。在某些實施方案中，樣品是透析流體，包括血液透析流體和腹膜透析流體。
[0069] 在一些實施方案中，本發(fā)明提供了一種篩選食物或飲料產(chǎn)品或食物或飲料加工中 細(xì)菌存在的方法。例如，本發(fā)明的方法可以用于測試攜帶液體（如啤酒或奶）的管線中存 在或不存在細(xì)菌。該方法還可以用于測試水樣中存在或不存在細(xì)菌。在一些實施方案中， 這些方法包括將本發(fā)明的側(cè)向流動裝置接觸飲料樣品或水樣并檢測抗體群與樣品的結(jié)合， 其中結(jié)合表示飲料或水樣中存在細(xì)菌，而沒有結(jié)合表示飲料或水樣中不存在細(xì)菌。
[0070] 在本發(fā)明的某些實施方案中，在將樣品接觸全類屬抗體之前或同時，對樣品進(jìn)行 處理。優(yōu)選地，處理暴露了革蘭氏陰性細(xì)菌抗原或革蘭氏陽性細(xì)菌抗原上用于全類屬抗體 的結(jié)合位點。例如，可以通過從細(xì)菌的細(xì)胞壁或細(xì)胞膜分裂抗原來暴露細(xì)菌抗原上的結(jié)合 位點，由此暴露結(jié)合位點；誘導(dǎo)細(xì)菌分泌抗原，由此暴露結(jié)合位點；裂解細(xì)菌，由此釋放胞 內(nèi)細(xì)菌抗原，并且因此暴露抗原上的結(jié)合位點；或通過誘導(dǎo)細(xì)菌抗原上的構(gòu)象改變，由此暴 露結(jié)合位點。這樣的處理包括通過物理方式機械破壞樣品中的細(xì)菌細(xì)胞，所述物理方式包 括，但不限于，超聲波處理、煮沸或均質(zhì)，使用，例如，Dounce均質(zhì)機。所述處理還可以是使 用化合物或組合物的通過化學(xué)方式的樣品處理，所述化合物或組合物例如為去污劑、堿溶 液（用于堿裂解）、酸溶液（用于酸裂解）、EDTA、EGTA、金屬離子、陰離子、陽離子、表面活 性劑、螯合劑和/或酶（例如，溶葡萄球菌素、溶菌酶、變?nèi)芫?、labiase、無色肽酶、胰蛋白 酶、蛋白酶K、自溶素、噬菌體編碼的裂解酶，及其組合）。處理將暴露革蘭氏陰性細(xì)菌抗原 或革蘭氏陽性細(xì)菌抗原上針對全類屬抗體的結(jié)合位點。
[0071] 在一些實施方案中，該方法用于檢測血液樣品或血液制品樣品中的細(xì)菌，該方法 包括將樣品與結(jié)合了多種細(xì)菌抗原的全類屬結(jié)合劑（例如，全類屬抗體）接觸，其中全類 屬結(jié)合劑固定于一群80nm金顆粒上，并且進(jìn)一步包含固定于一群40nm金顆粒上的全類屬 結(jié)合劑（例如，全類屬抗體）。在各種實施方案中，該方法包括在允許全類屬結(jié)合劑與細(xì)菌 抗原之間結(jié)合的條件下將樣品與全類屬結(jié)合劑接觸并且在允許固定化捕獲結(jié)合劑與帶有 固定化全類屬結(jié)合劑的金顆粒之間結(jié)合的條件下將固定化捕獲結(jié)合劑（例如，全類屬結(jié)合 劑，如全類屬抗體）與金顆粒接觸。在某些實施方案中，全類屬結(jié)合劑結(jié)合一種或多種革蘭 氏陽性細(xì)菌抗原、一種或多種革蘭氏陰性細(xì)菌抗原，或兩者。在各種實施方案中，結(jié)合革蘭 氏陽性細(xì)菌抗原的全類屬結(jié)合劑可以與結(jié)合革蘭氏陰性細(xì)菌抗原的全類屬結(jié)合劑在相同 群或不同群的金顆粒（例如，80nm金顆粒）上。在某些實施方案中，固定于80nm金顆粒上 的全類屬結(jié)合劑是多克隆抗體，而固定于40nm金顆粒上的全類屬結(jié)合劑是單克隆抗體。在 其中捕獲結(jié)合劑是全類屬結(jié)合劑的進(jìn)一步的實施方案中，捕獲結(jié)合劑與固定于金顆粒上的 全類屬結(jié)合劑相同或與固定于金顆粒上的全類屬結(jié)合劑不同。
[0072]在進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明提供了包含可檢測顆粒的試劑盒，所述的可檢測顆粒 如有色顆粒，包括金、銀或鈦顆粒，其中顆粒大小為約60nm至約120nm，并且其中顆粒包含 直接或通過銜接物固定于其上的多價結(jié)合劑。在一些實施方案中，多價結(jié)合劑是全類屬結(jié) 合劑，如用于檢測樣品中的革蘭氏陰性細(xì)菌、革蘭氏陽性細(xì)菌或兩者的全類屬抗體。在一 些實施方案中，顆粒為約80nm。在一些實施方案中，試劑盒包含不同大小的可檢測顆粒，如 80nm和40nm。在一些實施方案中，試劑盒包含80nm金顆粒，含有或不含40nm金顆粒。試 劑盒進(jìn)一步包含使用可檢測顆粒來檢測樣品中細(xì)菌存在的說明書。在一些實施方案中，試 劑盒進(jìn)一步包含在其上固定有捕獲全類屬抗體的固體表面。在一些實施方案中，固體表面 是側(cè)向流動裝置的組成部分。在一些實施方案中，試劑盒進(jìn)一步包含用于預(yù)處理樣品的試 劑。
[0073]以下實施例打算用來進(jìn)一步說明本發(fā)明的某些實施方案而不是用來限制本發(fā)明 的范圍。 實施例
[0074] 實施例1
[0075]我們在模型側(cè)向流動系統(tǒng)中測量了從不同大?。?0nm和80nm)的金顆粒產(chǎn)生的視 覺信號，以確定那種顆粒產(chǎn)生了最高信號強度應(yīng)答/顆粒（圖1A-1C)。將系統(tǒng)設(shè)計成捕獲 高比例的流過條帶的顆粒，以獲得通過不同大小的顆粒產(chǎn)生的視覺信號的指示。使用了根 據(jù)本發(fā)明的側(cè)向流動裝置。在這個模型中，流動裝置利用了 Millipore硝基纖維素膜上成 條帶的IgG抗體作為捕獲結(jié)合劑，以及流過條帶的蛋白A覆蓋的金顆粒。對于加入反應(yīng)中 的給定數(shù)量的顆粒，與通過40nm金顆粒產(chǎn)生的紅/粉線相比，80nm金顆粒獲得了更高對比 強度的紫色線，使得來自80nm珠子的線更易于觀察和解釋。圖1B和1C是分別使用不同數(shù) 量的40nm和80nm顆粒產(chǎn)生的條帶的圖像。使用Gelanalyzer2010軟件分析了圖像，以提 供針對捕獲線強度的數(shù)值。圖1A顯示了信號強度相對于加入反應(yīng)中的顆粒數(shù)量的曲線，證 明了通過等量較大金顆粒產(chǎn)生了提高的信號強度。
[0076]令人驚訝地，提高顆粒大小也提高了捕獲線上產(chǎn)生的視覺上可檢測的信號的強 度，由此提高了靈敏度。然而，更多數(shù)量的較小顆粒，其比較大顆粒具有更大的表面積體積 比，預(yù)期將產(chǎn)生更好的信號和較快的結(jié)果。此外，作為實踐物質(zhì)，捕獲區(qū)域中的金的量是有 限的。因此，特別令人驚訝的是較低量的較大顆粒比較高量的較小顆粒產(chǎn)生了更好的結(jié)果。
[0077] 實施例2
[0078] 為了測試不同大小的金顆粒的有效性，我們使用針對各種革蘭氏陰性和革蘭氏陽 性細(xì)菌產(chǎn)生的抗體混合物構(gòu)建了模型免疫試驗系統(tǒng)。我們將抗體結(jié)合80nm膠態(tài)金（"強 化的檢測劑"）顆粒并將其性能與40nm膠態(tài)金（"通用檢測劑"）顆粒進(jìn)行比較。我們使 用緩沖溶液，通過從10 8CFU/mL開始制備十倍稀釋，針對八種生物體中的每一種制備了四個 水平的細(xì)菌裂解物。對于每個裂解物水平，我們在96