一種中藥組合物制劑中十二種成分的含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥分析領(lǐng)域，具體涉及中藥制劑中各成分的含量測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 該中藥組合物由黃芪、人參、香加皮、桂枝等11味中藥組成的復(fù)方中藥，具有益氣 溫陽、活血通絡(luò)、利水消腫等功效，臨床用于冠心病、高血壓所致輕、中度充血性心力衰竭 等疾病?，F(xiàn)代研究表明該中藥組合物中活性成分多種多樣，主要包括黃酮類，皂苷類，生物 堿類等，目前對該中藥組合物的研究主要集中在臨床應(yīng)用方面及其化學(xué)成分的定性研究方 面，而對其活性成分的定量分析研究卻鮮見報道。近年來，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)以其優(yōu)越的靈敏度 和分辨率成為現(xiàn)代藥物定量分析的有效手段[葉茂，謝國祥，趙愛華，等.超高效液 相色譜-飛行時間質(zhì)譜法測定苦參素注射液中苦參堿和氧化苦參堿[J].中國中藥雜志， 2008，33(12): 1398-1401·]。
[0003] 由于該中藥組合物中成分比較多，目前的方法檢驗周期長，成本高，因此為了能夠 有效的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證公眾的用藥安全，對該中藥組合物制劑進行質(zhì)量控制，本研究采 用UPLC-MS測定該中藥組合物中毛蕊異黃酮-7-0-葡萄糖苷（1)、異槲皮苷（2)、柚皮蕓香 苷（3)、橙皮苷（4)、人參皂苷Re (5)、人參皂苷Rgl (6)、杠柳毒苷（7)、人參皂苷Rf (8)、人 參皂苷Rbl (9)、黃芪甲苷（10)、人參皂苷Rd (11)、杠柳苷Hl (12)的含量，為其質(zhì)量控制 提供參考。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種檢測周期短、靈敏度高，同時檢測多種成分含量的方法。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是： 該中藥組合物由下列重量份的原料藥制成：黃芪150-450份、附子40-120份、人參 75-225份、丹參75-225份、葶藶子50-150份、香加皮60-180份、澤瀉75-225份、玉竹25-75 份、桂枝30-90份、紅花30-90份、陳皮25-75份，其含量測定方法由以下步驟組成： A、 供試品溶液的制備：取該中藥組合物制劑，研細，精密稱定0. l_2g，置具塞錐形瓶 中，加入甲醇20-100mL，稱定重量，超聲處理10-60分鐘，放冷，稱重，用甲醇補足減失的重 量，搖勻，過濾即得； B、 標(biāo)注曲線的制備：精密稱取對照品黃芪甲苷、毛蕊異黃酮-7-0-葡萄糖苷、人參皂苷 Rb 1、人參皂苷Re、人參皂苷RcU人參皂苷Rf、人參皂苷Rgl、杠柳毒苷、杠柳苷Hl、橙皮苷、柚 皮蕓香苷、異槲皮苷，加甲醇溶解，得對照品液，將對照品溶液逐級稀釋成一系列濃度，分別 精密吸取稀釋后的溶液0. 2-10ul，注入UPLC制備標(biāo)準(zhǔn)曲線； C、 UPLC液相色譜條件：色譜柱：C18 ;流動相A為乙腈，B為0. 1 %甲酸水溶液，梯度洗 脫：0~4min (5%~30%A)，4~9min (30%~33%A)，9~llmin (33%~95%A)，11~11.5min (95%~5%A)， 11. 5~14min (5%A)，柱溫：20-5(TC ;流速：0· 2 -0· 6mL/min ; D、 UPLC液相質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI)，負離子模式檢測，源噴霧電壓（IS) -3500 V到-4000 V，輔助加熱氣溫度400-700 °C，霧化氣40-65 psi，輔助氣40-65 psi，氣簾氣 15-45psi ;解簇電壓-60V ;采集方法：TOF-MS/MS方法； E、測定：吸入供試品溶液0. 2_1〇μL注入UPLC液相中，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定樣品含量。
[0006] 含量測定方法步驟優(yōu)選為： A供試品溶液的制備：取該中藥組合物制劑，研細，精密稱定0. 15g，置具塞錐形瓶中， 加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30分鐘放冷，稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過 0. 2μηι濾膜即得； 步驟Β、精密稱取對照品黃芪甲苷、毛蕊異黃酮-7-0-葡萄糖苷、人參皂苷RbU人參皂 苷Re、人參皂苷RcU人參皂苷Rf、人參皂苷RgU杠柳毒苷、杠柳苷Η1、橙皮苷、柚皮蕓香苷、 異槲皮苷，加甲醇溶解，制備12種對照品溶液，1~12的濃度分別為17. 64 ug/mL、17. 46 ug/mL、20.952 ug/mL、17. 568 ug/mL、53. 064 ug/mL、39.024 ug/mL、8. 376 ug/mL、18. 18 ug/mL、143.352 ug/mL、22.176 ug/mL、40.12 ug/mL、77.748 ug/mL，得到對照品溶液，稀釋， 分別精密吸取稀釋后的溶液〇. 2-10ul，注入UPLC制備標(biāo)準(zhǔn)曲線； C、 UPLC 液相色譜條件：色譜柱：Phenomenex UPLC Kinetex C18,規(guī)格 2. I X 100 mm, 2· 6μπι，Β 為(λ 1% 甲酸水溶液，梯度洗脫：0~4min (5%~30%A)，4~9min (30%~33%A)，9~Ilmin (33%~95%A)，11 ~11.5min (95%~5%Α)，11·5~14min (5%A)，柱溫：4(TC，流速：0.4 mL/min; D、 UPLC液相質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI)，負離子模式檢測，源噴霧電壓（IS)-4000 V，輔助加熱氣溫度550 °C，霧化氣55 psi，輔助氣55 psi，氣簾氣25 psi;解簇電壓-60V; 采集方法：T0F-MS/MS方法。
[0007] 含量測定方法步驟還優(yōu)選為：步驟A供試品溶液的制備：取該中藥組合物制劑，研 細，精密稱定〇. 3g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲處理60分鐘放冷，稱 重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過〇. 45 μ m濾膜即得；步驟C UPLC液相色譜條件：色譜 柱：Phenomenex UPLC Kinetex C18,規(guī)格 2. I X 100 mm，2. 6 μ m，柱溫：25°C，流速：0· 6 mL/ min〇
[0008] 含量測定方法步驟還優(yōu)選為：步驟A供試品溶液的制備：取該中藥組合物制劑，研 細，精密稱定〇. lg，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20mL，稱定重量，超聲處理10分鐘放冷，稱 重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過〇. 2μπι濾膜即得；步驟C UPLC液相色譜條件：色譜柱：ACQUITY BEH C18，規(guī)格為 2. I X 100mm，1. 7 μ m，柱溫：50°C，流速：0· 2 mL/min。
[0009] 含量測定方法步驟還優(yōu)選為：步驟A供試品溶液的制備：取該中藥組合物制劑，研 細，精密稱定〇. 2g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇40mL，稱定重量，超聲處理40分鐘放冷，稱 重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過〇. 45 μ m濾膜即得。
[0010] 含量測定方法的中藥組合物原料藥的重量份比例優(yōu)選為：黃芪450份、附子112. 5 份、人參225份、丹參225份、葶藶子150份、香加皮180份、澤瀉225份、玉竹75份、桂枝90 份、紅花90份、陳皮75份。
[0011] 含量測定方法的該中藥組合物原料藥的重量份比例還優(yōu)選為：黃芪150份、附子 40份、人參225份、丹參225份、葶藶子50份、香加皮180份、澤瀉75份、玉竹75份、桂枝 30份、紅花90份、陳皮25份。
[0012] 含量測定方法的該中藥組合物原料藥的重量份比例還優(yōu)選為：黃芪250份、附子 112. 5份、人參200份、丹參120份、葶藶子135份、香加皮150份、澤瀉200份、玉竹60份、 桂枝75份、紅花75份、陳皮60份。
[0013] 含量測定方法的中藥組合物制劑的劑型優(yōu)選為膠囊劑、片劑、丸劑、口服液或顆粒 劑。
[0014] 中藥組合物制劑膠囊劑是由以下步驟組成： (1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參、香加皮按照比例量稱取加8倍量70%乙醇回流提取2 次，第一次3小時，第二次2小時，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60°C測定相 對密度為1. 25-1. 30的清膏，備用； (2) 桂枝、陳皮按照比例蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過，備用，殘渣再加8倍量 水煎煮1小時，濾過，合并水煎液，備用； (3) 附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時，合并提取液，濾過，與步驟 (2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至60°C測定相對密度為1. 25-1. 30的清膏，攪拌中加入 乙醇，至醇濃度70%，4°C以下靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60°C測定相對 密度為1. 25-1. 30的清膏，與步驟（1)的醇提清膏混合，65-70°C烘干； (4) 將步驟（3)所得干膏粉碎成100目粉，加70%乙醇適量制粒，噴入桂枝、陳皮揮發(fā) 油，混勻，裝膠囊，即得。
[0015] 為了驗證本發(fā)明的方法的可行性和準(zhǔn)確性，用實施例1中的膠囊劑作了如下的方 法學(xué)驗證試驗： 1儀器與試藥 1.1儀器超高效液相色譜系統(tǒng)（Angilent 1290,美國）；質(zhì)譜儀（Triple- T0FTM5600+，美國AB SCIEX公司），配有ESI源和APCI源；數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)：MultiquantTM Software (美國 AB SCIEX 公司）；色譜柱（Phenomenex Kinetex C18 100X2. lmm，2.6