)，負(fù)離子模式檢測(cè)，源噴霧電壓（IS)-4000 V，輔助加熱氣溫度550 °C，霧化氣55 psi，輔助氣55 psi，氣簾氣25 psi;解簇電壓-60V; 采集方法：TOF-MS/MS方法。
[0030] E、測(cè)定：吸入供試品溶液5 PL注入U(xiǎn)PLC液相中，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定樣品含量。
[0031] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：測(cè)得樣品中1-12種成分的含量分別為：
1、精密度試驗(yàn)：精密吸取同一濃度的對(duì)照品溶液5 μ L，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié) 果顯示12種化合物峰面積的RSD值均小于1. 93%，表明儀器精密度良好。
[0032] 2、穩(wěn)定性試驗(yàn)：按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下 分別在〇、2、4、8、12、24h進(jìn)樣5 μ L，記錄峰面積。結(jié)果顯示12種化合物峰面積的RSD均小 于4. 3%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
[0033] 3、重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批號(hào)中藥組合物制劑樣品6份，按照供試品溶液的 制備方法制備供試品溶液6份，分別在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣5 μ L，記錄峰面積，計(jì)算 含量。結(jié)果顯示化合物1~12含量的RSD值分別為1. 87%，2. 76%，2. 4%，2. 41%，2. 61%，2. 93%， 2. 02%，2. 25%，2. 64%，2. 14%，2. 72%，2. 61%，表明方法的重復(fù)性良好。
[0034] 4、加樣回收率試驗(yàn)精密稱取6份己知含量的同一批號(hào)中藥組合物制劑藥粉 0. 075g，分別加入一定量的對(duì)照品溶液，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液， 進(jìn)樣5μ L，記錄峰面積，計(jì)算各對(duì)照品的加樣回收率，分別為：99. 30%，100. 48%，99. 43%， 98. 625%，101. 83%，98. 42%，100. 44%，98. 97%，100. 58%，100. 20%，98. 20%，100. 05% ;RSD 值分 別為：3· 00%，3. 42%，3. 29%，2. 65%，2. 47%，2. 19%，3. 51%，2. 90%，3. 67%，3. 88%，2. 93%，3. 69%, 表明本方法的準(zhǔn)確度高。
[0035] 由以上結(jié)果可知，采用以上方法作為該中藥組合物12種成分的含量測(cè)定方法，重 復(fù)性好、精密度高、分析速度快，可以在比較短的周期內(nèi)檢測(cè)出各成分的含量，可以更方便 的控制藥物的質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本。
[0036] 該膠囊劑的含量測(cè)定方法還可以由以下步驟組成： A、供試品溶液的制備：取該中藥組合物制劑，研細(xì)，精密稱定0.2g，置具塞錐形瓶中， 加入甲醇40mL，稱定重量，超聲處理40分鐘放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò) 0. 45 μ m濾膜即得； B、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取對(duì)照品黃芪甲苷、毛蕊異黃酮-7-0-葡萄糖苷、人參皂苷 RbU人參皂苷Re、人參皂苷RcU人參皂苷Rf、人參皂苷RgU杠柳毒苷、杠柳苷H1、橙皮苷、柚 皮蕓香苷、異槲皮苷，加甲醇溶解，得1~12的濃度分別為17. 64 ug/mL、17. 46 ug/mL、20. 952 ug/mL、17.568 ug/mL、53. 064 ug/mL、39.024 ug/mL、8. 376 ug/mL、18. 18 ug/mL、143. 352 ug/mL、22.176 ug/mL、40.12 ug/mL、77.748 ug/mL;將此對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋成一系列濃 度，分別精密吸取稀釋后的溶液〇. 2ul，注入U(xiǎn)PLC制備標(biāo)準(zhǔn)曲線；做標(biāo)準(zhǔn)曲線； C、 UPLC 液相色譜條件：色譜柱：Phenomenex UPLC Kinetex C18,規(guī)格 2. I X 100 mm, 2. 6 μ m，流動(dòng)相A為乙腈，B為0. 1 %甲酸水溶液，梯度洗脫：(T4min (5%~30%A)，4~9min (30%~33%A)，9~llmin (33%~95%A)，11 ~11. 5min (95%~5%A)，11. 5~14min (5%A)，柱溫：40°C， 流速：〇· 4 mL/min ; D、 UPLC液相質(zhì)譜條件：電噴霧離子源（ESI)，負(fù)離子模式檢測(cè)，源噴霧電壓（IS)-3500 V，輔助加熱氣溫度400 °C，霧化氣65 psi，輔助氣45 psi，氣簾氣15 psi;解簇電壓-60V; 采集方法：T0F-MS/MS方法； E、 測(cè)定：吸入供試品溶液5 PL注入U(xiǎn)PLC液相中，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定樣品含量。
[0037] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：測(cè)得樣品中1-12種成分的含量分別為：
1、精密度試驗(yàn)：精密吸取同一濃度的對(duì)照品溶液5 μ L，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié) 果顯示12種化合物峰面積的RSD值均小于2. 28%，表明儀器精密度良好。
[0038] 2、穩(wěn)定性試驗(yàn)：按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下 分別在〇、2、4、8、12、24h進(jìn)樣5 μ L，記錄峰面積。結(jié)果顯示12種化合物峰面積的RSD均小 于3. 8%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
[0039] 3、重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批號(hào)中藥組合物制劑樣品6份，按照供試品溶液的 制備方法制備供試品溶液6份，分別在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣5 μ L，記錄峰面積，計(jì)算 含量。結(jié)果顯示化合物1~12含量的RSD值分別為2. 36%，2. 18%，1. 58%，2. 76%，2. 81%，2. 83%， 2. 00%，2. 17%，2. 68%，2. 04%，2. 42%，2. 63%，表明方法的重復(fù)性良好。
[0040] 4、加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取6份己知含量的同一批號(hào)中藥組合物制劑藥粉 〇. lg，分別加入一定量的對(duì)照品溶液，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣 5 μ L，記錄峰面積，計(jì)算各對(duì)照品的加樣回收率，分別為：97. 30%，98. 78%，99. 52%，98. 35%， 99. 53%，97. 89%，98. 14%，97. 84%，99. 18%，98. 20%，98. 870%，99. 32% ;RSD 值分別為：2· 15%， 2. 67%，3. 08%，2. 19%，2. 63%，2. 55%，2. 80%，2. 71%，2. 27%，3. 12%，2. 22%，2. 36%,表明本方法 的準(zhǔn)確度高。
[0041] 由以上結(jié)果可知，采用以上方法作為該中藥組合物12種成分的含量測(cè)定方法，重 復(fù)性好、精密度高、分析速度快，可以在比較短的周期內(nèi)檢測(cè)出各成分的含量，可以更方便 的控制藥物的質(zhì)量，降低生產(chǎn)成本。
[0042] 實(shí)施例2 :本發(fā)明藥物片劑的制備 處方： 黃芪150g附子40g人參225g丹參225g葶藶子50g 香加皮180g澤瀉75g 玉竹75g桂枝30g紅花90g陳皮25g 制備方法： (1) 將黃芪、葶藶子、澤瀉、人參、香加皮按照上述處方加8倍量70%乙醇回流提取2次， 第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì) 密度為1.25-1.30的清膏，備用； (2) 桂枝、陳皮按照處方量蒸餾提取揮發(fā)油，提油后的水溶液濾過(guò)，備用，殘?jiān)偌?倍 量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，合并水煎液，備用； (3) 附子、丹參、玉竹、紅花加水9倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，與步驟 (2)中桂枝、陳皮水煎液合并，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密度為1. 25-1. 30清膏，攪拌中加入乙 醇，至醇濃度70%，4°C以下靜置24小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮至60°C測(cè)定相對(duì)密 度為1.25-1. 30清膏，與步驟（1)的醇提清膏混合，65-70°C烘干； (4) 按常規(guī)制劑方法制成片劑。
[0043] 該片劑的含量測(cè)定方法由以下步驟為： A、 供試品溶液的制備：取該中藥組合物制劑，研細(xì)，精密稱定2g，置具塞錐形瓶中，加 入甲醇IOOmL,稱定重量，超聲處理60分鐘放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò) 0. 45 μ m濾膜即得； B、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密稱取對(duì)照品黃芪甲苷、毛蕊異黃酮-7-0-葡萄糖苷、人參皂苷 Rb 1、人參皂苷Re、人參皂苷RcU人參皂苷Rf、人參皂苷Rgl、杠柳毒苷、杠柳苷Hl、橙皮苷、柚 皮蕓香苷、異槲皮苷，加甲醇溶解，得1~12的濃度分別為17. 64 ug/mL、17. 46 ug/mL、20. 952 ug/mL、17.568 ug/mL、53. 064 ug/mL、39.024 ug/mL、8. 376 ug/mL、18. 18 ug/mL、143. 352 ug/mL、22.176 ug/mL、40.12 ug/mL、77.748 ug/mL;將此對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋成一系列濃 度，分別精密吸取稀釋后的溶液10uL，注入U(xiǎn)PLC制備標(biāo)準(zhǔn)曲線；做標(biāo)準(zhǔn)曲線； C、 UPLC 液相色譜條件：色譜柱：Phenomenex UPLC Kinetex C18，規(guī)格 2. I X 100 mm, 2. 6μ m，流動(dòng)相A為乙腈，B為0. 1 %甲酸水溶液，梯度洗脫：(T4min (5%~30%A)，4~9min (30%~33%A)，9~llmin (33%~95%A)，11 ~11. 5min (95%~5%A)，11. 5~14min (5%A)，柱溫：25°C， 流速：〇· 6 mL/min ; D、 UPLC液相質(zhì)譜條件：電噴霧離子源