內(nèi)分泌干擾物的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于萃取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種內(nèi)分泌干擾物的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近半個世紀以來，關(guān)于人類生殖健康質(zhì)量下降和野生動物繁殖異常的報道逐年增 加：男性精子數(shù)量下降和活力降低，女性乳腺癌發(fā)病率增高；生活在英國污水處理廠下游 的野生蟑螂雌雄同體率增加；美國佛羅里達州的鱷魚性腺發(fā)育和性激素水平異常；受污染 河流中雄魚雌性化、雌雄同體現(xiàn)象增加等等。人們逐漸意識到環(huán)境中存在一些能模擬激素 效應(yīng)，調(diào)節(jié)或干擾生物內(nèi)分泌系統(tǒng)功能的化合物，即內(nèi)分泌干擾物（EDCs)，其定義為"能干 擾體內(nèi)對維持生物穩(wěn)態(tài)、繁殖、和/或行為起作用的自然激素的生成、釋放、轉(zhuǎn)運、代謝、結(jié) 合、作用和消除的一種外源因子"。
[0003] 環(huán)境中通常是各種化合物以低濃度共存，這些具有作用終點效應(yīng)相似或拮抗的化 合物會對所在水體水生生物產(chǎn)生復(fù)雜的混合激素效應(yīng)。因此為了深入了解以及準確評價環(huán) 境介質(zhì)和所涉及的水產(chǎn)品中EDCs的污染狀況，需要建立準確、可靠的分析方法。
[0004] 目前水體中EDCs的檢測方法一般采用比較成熟的方法如固相萃?。⊿PE)、固相微 萃?。⊿PME)等進行檢測。但是EDCs的固體樣品因其成分更加復(fù)雜，不僅需要較高的萃取 效率，也需要更有效地去除雜質(zhì)，因此該SPE、SPME等方法萃取效率低，除雜質(zhì)功能差，導致 萃取效果比較差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種內(nèi)分泌干擾物的提取方 法，旨在解決現(xiàn)有萃取內(nèi)分泌干擾物方法存在的萃取效率低，除雜質(zhì)功能差，導致萃取效果 比較差等技術(shù)問題。
[0006]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明實施例的技術(shù)方案如下：
[0007] -種內(nèi)分泌干擾物的提取方法，包括將待測樣品先經(jīng)亞臨界水萃取處理，然后經(jīng) 分散液液微萃取處理的步驟。
[0008] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明內(nèi)分泌干擾物的提取方法將亞臨界水萃取與分散液液微 萃取技術(shù)進行聯(lián)用，使得本發(fā)明內(nèi)分泌干擾物的提取方法對內(nèi)分泌干擾物萃取效率高，且 能有效去除雜質(zhì)影響，從而實現(xiàn)能對痕量內(nèi)分泌干擾物進行快速、準確的定性定量分析。
【具體實施方式】
[0009] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合實施例，對本發(fā)明 進行進一步詳細說明。應(yīng)當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于 限定本發(fā)明。
[0010] 本發(fā)明實例提供了一種能有效除去雜質(zhì)，且萃取效率高的內(nèi)分泌干擾物的提取方 法。該內(nèi)分泌干擾物的提取方法是將亞臨界水萃取和分散液液微萃取相結(jié)合的提取方法， 具體地，該內(nèi)分泌干擾物的提取方法包括將待測樣品先經(jīng)亞臨界水萃取處理，然后經(jīng)分散 液液微萃取處理的步驟。
[0011] 由于亞臨界水萃取可以提供高溫高壓條件，且采用亞臨界水（高溫高壓下的水， 介于水相與氣相之間）作為萃取溶劑。又由于內(nèi)分泌干擾物（EDCs)屬于半揮發(fā)性有機污 染物，極性相對較大，較易溶于水。因此，利用亞臨界水萃取的優(yōu)勢，采用亞臨界水作為萃取 溶劑，可以提高萃取溶劑的選擇性，減少使用傳統(tǒng)有機溶劑萃取時同時萃取出的干擾物質(zhì)， 以提高后續(xù)對EDCs分析方法的靈敏度。
[0012] 再利用分散液液微萃?。―LLME)傳質(zhì)界面面積大、樣品基質(zhì)效應(yīng)弱和簡單、快速、 選擇性高等優(yōu)點，將經(jīng)亞臨界水萃取后的萃出液采用DLLME處理，對目標化合物EDCs進一 步純化，以實現(xiàn)提高EDCs富集倍數(shù)和檢測靈敏度。
[0013] 為了將EDCs有效萃取，在一實施例中，該亞臨界水萃取處理方法如下：
[0014] 將稱取的待測樣品與硅藻土進行混料處理后于含有修飾劑的水中進行亞臨界水 萃取處理。
[0015] 其中，亞臨界水萃取處理的溫度控制在100-120°C之間。在一具體實施例中，該溫 度控制為l〇〇°C。該萃取的溫度能更有利于EDCs溶解于水中被萃取。
[0016] 在一實施例中，該亞臨界水萃取處理的壓強控制在1500±100psi(即壓強控制在 1400/145MPa-1600/145MPa)。對壓強的控制也是為了提高利于EDCs溶解于水中被萃取。 為了進一步提高EDCs的萃取率，在進一步實施例中，該亞臨界水萃取處理的壓強控制在 1500±100psi(即壓強控制在 1400/145MPa-1600/145MPa)，溫度控制在 100-120°C。
[0017] 在一實施例中，該亞臨界水萃取所用的所述萃取溶劑為含10-20%修飾劑的水，其 pH控制為10-12。在一具體實施例中，該萃取溶劑為含20%修飾劑的水，其pH控制為12。 修飾劑能有效降低亞臨界水的極性，更容易萃取偏非極性的有機物。
[0018] 在一具體實施例中，該萃取溶劑為含20%修飾劑的水，其pH控制為12,且亞臨界 水萃取處理的溫度l〇〇°C。在另一具體實施例中，所述修飾劑選用丙酮、乙醇、乙腈、甲醇中 的至少一種。
[0019] 上述亞臨界水萃取中的硅藻土的存在，一方面能有效起到填充劑的作用，由于其 填充作用有效填充萃取池剩余空間，減少最終的萃取溶劑用量，以便后續(xù)處理；另一方面能 增大萃取的接觸面積，有效將待測樣品分散在亞臨界水萃取萃取溶劑中，從而提高待測樣 品的萃取率和萃取效率。在一實施例中，該待測樣品與硅藻土的質(zhì)量比為5:2。當然，該待 測樣品與硅藻土的質(zhì)量比僅僅是舉例，兩者還可以根據(jù)實際情況進行任意調(diào)整，只要使得 待測樣品與硅藻土均沒入萃取溶劑中即可。
[0020] 在進一步實施例中，在所述亞臨界水萃取處理過程中，在含有修飾劑的水還添加 有純化劑，該純化劑能有效除去待測樣品中的雜質(zhì)，以進一步降低亞臨界水萃取處理后溶 劑中待測樣品雜質(zhì)的含量。其中，在一實施例中，該純化劑可以是選用中性氧化鋁、酸性氧 化鋁、活性炭中的至少一種。另外，該純化劑的加入量可以與硅藻土的用量相同或不同，可 以根據(jù)具體待測樣品進行控制其加入量，當然，不管純化劑加入的量如何控制，必須沒入在 萃取溶劑液面之下。
[0021] 另外，上述各實施例中，該待測樣品與硅藻土或進一步與純化劑之間進行的混料 處理可以是本領(lǐng)域常規(guī)的混料方式進行處理，只要是使得兩者混合均勻即可。該待測樣品 如果是固體，在萃取之前，應(yīng)該先對固體進行粉粹處理，以降低其顆粒粒徑。
[0022] 在上述各實施例的基礎(chǔ)上，在將所述待測樣品進行亞臨界水萃取處理之前，還包 括向所述待測樣品中加入同位素指示物與所述待測樣品進行混料處理的步驟；加同位素指 示物是對為了指示整個萃取過程中的損失，加入的量沒有具體要求，根據(jù)儀器的檢測范圍 選擇即可。在一些具體實施例中，該同位素指示物選用氘標記的雌酮（E1)、炔雌醇（EE2)、 壬基酚（NP)中的至少一種。
[0023] 上述DLLME處理是根據(jù)相似相溶原理，將經(jīng)亞臨界水萃取處理后的萃出液中含有 EDCs從水中萃取出來，使得EDCs溶入萃取溶劑中，實現(xiàn)對EDCs進一步的純化，實現(xiàn)提高 EDCs富集倍數(shù)和檢測靈敏度。因此，
[0024] 在一實施例中，所述DLLME處理方法如下：
[0025] 將經(jīng)所述亞臨界水萃取處理的萃出液與萃取溶劑混合處理，靜置，收集萃取溶劑。
[0026] 其中，為了 DLLME萃取EDCs效果更好，在一實施例中，根據(jù)EDCs的特性，所述萃取 溶劑選用氯苯、氯仿、四氯化碳中的任一種。
[0027] 在另一實施例中，將亞臨界水萃取處理的萃出液與所述萃取溶劑混合處理是將兩 者混合物于l〇〇〇-2500rpm渦旋5-30秒后6000-7000rpm離心5-10min。在一具體實施例 中，該兩者混合物于2000rpm的速率潤旋處理30秒后7000rpm離心5min。通過該混合處 理，使得萃取溶劑與亞臨界水萃取處理的萃出液充分混合，