水產(chǎn)品中28種多氯聯(lián)苯快速檢測(cè)前處理試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及水產(chǎn)品中28種多氯聯(lián)苯快速檢測(cè)前處 理試劑盒及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 多氯聯(lián)苯（PCBs)是一類人工合成的有機(jī)化合物，在自然條件下難以分解，具有很 高的殘留性，已經(jīng)被列為環(huán)境持久污染物之一。該類物質(zhì)可以在動(dòng)物的脂肪內(nèi)富集，對(duì)生物 有"致畸、致突變、致癌"危害，且其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、難于被降解，同時(shí)可通過多種載體進(jìn)行迀 移，并通過食物鏈向人體內(nèi)富集。全球環(huán)境監(jiān)測(cè)系統(tǒng)/食品規(guī)劃部分（GEMS/Food)中規(guī)定了 7種多氯聯(lián)苯同系物異構(gòu)體作為PCBs污染狀況的指示性單體（Indicator PCBs)，世界衛(wèi)生 組織（WHO)又對(duì)食品中12種具有平面結(jié)構(gòu)的類二噁英多氯聯(lián)苯的毒性當(dāng)量因子做出規(guī)定， 同時(shí)美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院（NIST)和國(guó)家海洋和大氣局（NOAA)對(duì)其他的9種多氯聯(lián) 苯在環(huán)境樣品、水生生物體內(nèi)的含量及其毒性均高度關(guān)注。
[0003] 我國(guó)對(duì)食品中多氯聯(lián)苯污染物的危害也高度關(guān)注，于2015年5月1日出臺(tái)了新的 食品中多氯聯(lián)苯含量測(cè)定的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 5009. 190-2014)，其中包括7種指示性多氯聯(lián)苯 和12種具有平面結(jié)構(gòu)的二噁英類結(jié)構(gòu)多氯聯(lián)苯。
[0004] 可見，多氯聯(lián)苯已成為危害人類健康的重要因素并引起了人們廣泛、高度的關(guān)注。 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)對(duì)食品中多氯聯(lián)苯類物質(zhì)均設(shè)定了相應(yīng)的最大殘留限量（MRL)，其中歐盟 對(duì)油脂、動(dòng)物肉類及其制品、奶粉、水產(chǎn)品及其制品等多種產(chǎn)品設(shè)定了最大殘留量值要求， 我國(guó)也將水產(chǎn)動(dòng)物及其制品中的殘留限量設(shè)定為0. 5 mg/kg。
[0005] 當(dāng)前關(guān)于食品中多氯聯(lián)苯的檢測(cè)方法中，前處理提取方法主要集中于索氏提取 法、振蕩提取法、加速溶劑提取法、微波輔助提取法及超聲波輔助提取法等；常用的凈化方 法有固相萃取法、凝膠滲透色譜結(jié)合固相萃取法、基質(zhì)固相萃取法及酸處理法等。實(shí)際上， 現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)報(bào)道方法中對(duì)于水產(chǎn)品樣品中此規(guī)定的28種多氯聯(lián)苯含量未給出較快 速的檢測(cè)前處理方法，存在對(duì)前處理設(shè)備要求高、選擇性差、前處理操作步驟繁瑣、檢測(cè)耗 時(shí)長(zhǎng)、效率低等缺點(diǎn)，難以滿足我國(guó)相關(guān)檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)水產(chǎn)品中多氯聯(lián)苯快速檢測(cè)篩查的需 求。
[0006] 我國(guó)是水產(chǎn)品生產(chǎn)、加工和進(jìn)出口大國(guó)，對(duì)水產(chǎn)品中該類物質(zhì)檢測(cè)的需求量巨大， 因此，針對(duì)水產(chǎn)品中28種多氯聯(lián)苯含量的快速檢測(cè)的需求，開發(fā)出實(shí)用的快速檢測(cè)前處理 試劑盒及其應(yīng)用方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有水產(chǎn)品中28種多氯聯(lián)苯檢測(cè)前處理技術(shù)中存在的慢 速、低效、高成本、低通量等不足，開發(fā)一種操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確且能夠滿足28種 多氯聯(lián)苯含量同時(shí)定量檢測(cè)的前處理試劑盒及其應(yīng)用。該試劑盒及其應(yīng)用不需要配備昂 貴的去除樣品中脂肪的前處理設(shè)備，以及反復(fù)使用復(fù)雜、低效率、低通量的柱層析前處理過 程，具備檢測(cè)速度快、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)，使用試劑均為分析純。
[0009] 一種水產(chǎn)品中28種多氯聯(lián)苯快速檢測(cè)前處理試劑盒，由試劑I和試劑II組成；試 劑I由以下原料混合而成：氯化鈉1. 〇 g ;無水硫酸鈉2. 0 g ;水合鋁酸碳酸鎂2. 0 g ;試劑 Π 由以下原料混合而成：酸化硅膠4. 0 g，無水硫酸鈉2. 0 g。
[0010] 試劑I中水合錯(cuò)酸碳酸鎂其純度為99. 5%，平均粒徑1. 5 μ m。
[0011] 試劑I的作用為去除溶劑提取過程中被共提取出的極性物質(zhì)，減小后續(xù)凈化步驟 的難度；減少極性物質(zhì)對(duì)色譜分析系統(tǒng)的污染，減少色譜系統(tǒng)維護(hù)成本。
[0012] 試劑II中酸化硅膠的粒徑范圍48~75 μm。
[0013] 試劑II的作用為去除提取過程中的脂肪酸類物質(zhì)、蛋白質(zhì)類物質(zhì)及部分脂溶性 色素。
[0014] 試劑I的配制方法為：于50 mL具塞塑料離心管中稱取氯化鈉 I. 0 g，無水硫酸鈉 2. 0 g，水合鋁酸碳酸鎂2.0 g，渦旋混勻。
[0015] 試劑II的配制方法為： 1) 酸化硅膠的配制：于500 mL燒杯中稱取硅膠60. 0 g，向其中添加濃硫酸40. 0 g，研 磨混勻，得到酸化硅膠100. 0 g ; 2) 稱量50.0 g無水硫酸鈉，并連同步驟1)中得到的酸化硅膠裝入圓底燒瓶中，并將燒 瓶用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器旋轉(zhuǎn)I h~2 h，使之混和均勾無結(jié)塊； 3) 于50 mL具聚乙烯瓶蓋玻璃瓶中稱取6.0 g上述混合物，密封保存。
[0016] -種如上所述的水產(chǎn)品中28種多氯聯(lián)苯快速檢測(cè)前處理試劑盒的應(yīng)用，包括以 下步驟： 1) 樣品中多氯聯(lián)苯的提取：在裝有試劑I的離心管中加入水產(chǎn)品樣品，采用二氯甲烷、 正己烷的混合溶劑對(duì)多氯聯(lián)苯進(jìn)行高速勻漿提取，離心，取上清液； 2) 凈化：將步驟1)得到的上清液加入裝有試劑II的離心管中，渦旋、離心，取上清液， 濃縮，定容，過濾和氣相色譜質(zhì)譜分析測(cè)試，采用基質(zhì)匹配工作溶液校正定量。
[0017] 所述的步驟1)中水產(chǎn)品樣品的加入量為2. 0 g，混合溶劑中二氯甲烷、正己烷的體 積比為1: 1，用量為30~40 mL ;所述的高速勻漿條件為：以10000~15000 rpm分散勻漿提取 1 ~3min〇
[0018] 步驟2)中所述的禍旋、離心為：禍旋0. 5~2min，以轉(zhuǎn)速4000~5000r/min轉(zhuǎn)速離心 3~5min ;上清液在35~45°C旋轉(zhuǎn)蒸干。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)： ① 本發(fā)明能應(yīng)用于水產(chǎn)品中28種多氯聯(lián)苯含量的同時(shí)快速測(cè)定，可以解決現(xiàn)有技術(shù) 對(duì)前處理設(shè)備要求高、前處理操作步驟繁瑣、檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)、效率低等缺點(diǎn)； ② 本發(fā)明具有檢測(cè)速度快，靈敏度高、準(zhǔn)確率高、選擇性好、對(duì)前處理設(shè)備要求低、在常 規(guī)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中適應(yīng)性好等優(yōu)點(diǎn)； ③ 操作方法簡(jiǎn)便、回收率高、重現(xiàn)性好。
【附圖說明】
[0020] 圖1為試劑I和試劑II及其組合而成的試劑盒包裝圖； 圖2為28種多氯聯(lián)苯的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖；按照時(shí)間順序從左至右PCBs的編號(hào)順序?yàn)椋?PCB8、PCB18、PCB28、PCB52、PCB44、PCB66、PCB101、PCB81、PCB77、PCB123、PCB118、PCB114、 PCB153、PCB105、PCB138、PCB126、PCB187、PCB128、PCB167、PCB156、PCB157、PCB180、PCB169、 PCB170、PCB189、PCB195、PCB206、PCB209 ; 圖3為對(duì)比例1和實(shí)施例1的對(duì)比色譜圖；其中A為對(duì)比例1色譜圖，B為實(shí)例1色譜 圖，添加的濃度水平均為100 μ g/kg。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。
[0022] 實(shí)施例1 以魚昌魚為樣品： 于裝有試劑I的50 mL具塞離心管中加入鯧魚樣品2. 00 g，加入35. 0 mL的二氯甲烷 +正己燒（v/v=l/l)混合液，以11000 rpm高速分散勾衆(zhòng)提取I min，離心管以4500 r/min 轉(zhuǎn)速離心5 min，取上清液；上清液全部?jī)A倒于裝有試劑II的50 mL具塞離心管中，渦旋1 min，離心