的 菌懸液，然后加入100 μ L棉籽糖熒光聚合物（lm M)，最終熒光探針的濃度為20 μ M。
[0028] 大腸桿菌在30度條件下，搖床的轉(zhuǎn)速為250rpm，培養(yǎng)1小時。同時，取50 yL菌 液測量微生物濃度上述培育1小時后的細菌然后在8000rp離心10min，再用5ml PBS分別 清洗三次。清洗過得細菌菌斑在冰浴條件下，超聲16分鐘。超聲的輸出功率為200瓦，100 個循環(huán)操作過程。微生物被破碎之后，用離心機8000rp離心10min。上清液的熒光強度用 日立熒光光譜儀測量。棉籽糖熒光探針在上清液中的濃度通過其標準曲線測量。
[0029] 用疊氮化鈉處理大腸桿菌（Escherichia coli，EC)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus，SA)。5ml LB 培養(yǎng)基中的微生物的 0D600 = 0· 5,加入 50 μ L 的 疊氮化鈉（IM)，在搖床中培育1小時，其用PBS清洗三次，失活細菌用于熒光探針的的對照 控制實驗。
[0030] 由圖3展示的可見從IOcfu ml 1到10 scfu ml 1用棉籽糖熒光探針探針的信號強 度變化，熒光光譜的分析狀況。
[0031] 實施例2 :金黃色葡萄球菌對于棉籽糖熒光探針的吸收利用情況棉籽糖標記的熒 光素探針
[0032] 微生物熒光分析探針基于棉籽糖與FITC熒光素分子的交聯(lián)（圖1)，棉籽糖熒光探 針的合成過程，包括氨化和鉸鏈。具體上講，棉籽糖（〇. 3g，0. 5mmol)溶解在7. 5ml超純水 中，加入半乳糖氧化酶（5. 2U)，辣根過氧化物歧化酶（45U)以及氫化酶（11150U)，室溫下攪 拌12小時，熱水浴中沸騰5min，使酶失活。高速離心（1000 Orpm)除去失活的酶，冷凍干燥 獲得氧化的棉籽糖。
[0033] 氧化棉籽糖（0· 2g，0· 35mmol)，溶解在IOml水中，加入己二胺（0· llg，Immol)，再 用冰乙酸把溶液Ph調(diào)整到5,反應(yīng)4小時。加入氰基硼氫化鈉（0. 06g，lmmol)，反應(yīng)1小時， 旋轉(zhuǎn)去除水。用葡聚糖凝膠LH-20純化分離，獲得氨基修飾的棉籽糖。
[0034] 氨基修飾的棉籽糖（100mg，0. 15mmol)溶解在3ml的碳酸緩沖液（p H9. 0)，加入 FITC(60mg，0. 15mmol)，室溫下避光反應(yīng)，攪拌反應(yīng)4小時，用TLC分離，獲得棉籽糖標記的 熒光素探針。
[0035] 金黃色葡萄球菌對于棉籽糖熒光探針的吸收利用情況
[0036] 金黃色葡萄球菌菌斑重懸浮到30ml的PBS緩沖液中，紫外分光光度計（波長為 6〇〇 nm)測量其OD值為0. 5。而后將金黃色葡萄球菌懸浮液轉(zhuǎn)移到IOml離心管中，每個離 心管加入5ml的菌懸液，然后加入100 μ L棉籽糖熒光探針（lm M)，最終熒光探針的濃度為 20 μ M0
[0037] 金黃色葡萄球菌在30度條件下，搖床的轉(zhuǎn)速為250rpm，培養(yǎng)1小時。同時，取 50 μ L菌液測量微生物濃度上述培育1小時后的細菌然后在8000rp離心10min，再用5ml PBS分別清洗三次。清洗過得細菌菌斑在冰浴條件下，超聲16分鐘。超聲的輸出功率為200 瓦，100個循環(huán)操作過程。微生物被破碎之后，用離心機8000rp離心10min。上清液的熒光 強度用日立熒光光譜儀測量。棉籽糖熒光探針在上清液中的濃度通過其標準曲線測量。
[0038] 用疊氮化鈉處理大腸桿菌（Escherichia coli，EC)。5ml LB培養(yǎng)基中的微生物的 0D600 = 0. 5,加入50 μ L的疊氮化鈉（IM)，在搖床中培育1小時，其用PBS清洗三次，失活 細菌用于熒光探針的的對照控制實驗。
[0039] 圖2展示了用大腸桿菌（Escherichia coli，EC)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus，SA)、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA)、費氏弧 菌（Vibrio fischeri，VF)、遲緩愛德華菌（Edwardsiella tarda，ET)、硫酸鹽還原菌 (Sulfate-reducing bacteria，SRB)研究其對棉籽糖焚光探針的吸收利用情況，展示棉籽 糖熒光聚合物檢測銅綠假單胞菌（LOXlO5Cfu m L1)存在很低的熒光強度變化，而檢測金 黃色葡萄球菌（LOXlO5Cfu m L1)能導致其熒光強度呈現(xiàn)兩倍的增強。
[0040] 實施例3 :愛德華遲緩菌對于棉籽糖熒光探針的吸收利用情況
[0041] 愛德華遲緩菌菌斑重懸浮到30ml的PBS緩沖液中，紫外分光光度計（波長為 6〇〇 nm)測量其OD值為0. 5。而后將愛德華遲緩菌懸浮液轉(zhuǎn)移到IOml離心管中，每個離心 管加入5ml的菌懸液，然后加入100 μ L上述獲得棉籽糖熒光聚合物（lm M)，最終熒光探針 的濃度為20 μ Μ。
[0042] 愛德華遲緩菌在30度條件下，搖床的轉(zhuǎn)速為250rpm，培養(yǎng)1小時。同時，取50 μ L 菌液測量微生物濃度上述培育1小時后的細菌然后在8000rp離心10min，再用5ml PBS分 別清洗三次。清洗過得細菌菌斑在冰浴條件下，超聲16分鐘。超聲的輸出功率為200瓦， 100個循環(huán)操作過程。微生物被破碎之后，用離心機8000rp離心10min。上清液的熒光強 度用日立熒光光譜儀測量。棉籽糖熒光探針在上清液中的濃度通過其標準曲線測量。
[0043] 用疊氮化鈉處理大腸桿菌（Escherichia coli，EC)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus，SA)。5ml LB 培養(yǎng)基中的微生物的 0D600 = 0· 5,加入 50 μ L 的 疊氮化鈉（IM)，在搖床中培育1小時，其用PBS清洗三次，失活細菌用于熒光探針的的對照 控制實驗。
[0044] 實施例4 :銅綠假單胞菌對于棉籽糖熒光探針的吸收利用情況
[0045] 銅綠假單胞菌菌斑重懸浮到30ml的PBS緩沖液中，紫外分光光度計（波長為 6〇〇 nm)測量其OD值為0. 5。而后將銅綠假單胞菌懸浮液轉(zhuǎn)移到IOml離心管中，每個離心 管加入5ml的菌懸液，然后加入100 μ L棉籽糖熒光探針（lm M)，最終熒光探針的濃度為 20 μ M0
[0046] 銅綠假單胞菌在30度條件下，搖床的轉(zhuǎn)速為250rpm，培養(yǎng)1小時。同時，取50 μ L 菌液測量微生物濃度上述培育1小時后的細菌然后在8000rp離心10min，再用5ml PBS分 別清洗三次。清洗過得細菌菌斑在冰浴條件下，超聲16分鐘。超聲的輸出功率為200瓦， 100個循環(huán)操作過程。微生物被破碎之后，用離心機8000rp離心10min。上清液的熒光強 度用日立熒光光譜儀測量。棉籽糖熒光探針在上清液中的濃度通過其標準曲線測量。
[0047] 用疊氮化鈉處理大腸桿菌（Escherichia coli，EC)。5ml LB培養(yǎng)基中的微生物的 0D600 = 0. 5,加入50 μ L的疊氮化鈉（IM)，在搖床中培育1小時，其用PBS清洗三次，失活 細菌用于熒光探針的的對照控制實驗。
[0048] 實施例5 :費氏弧菌對于棉籽糖熒光探針的吸收利用情況
[0049] 費氏弧菌菌斑重懸浮到30ml的PBS緩沖液中，紫外分光光度計（波長為600nm) 測量其OD值為0. 5。而后將費氏弧菌懸浮液轉(zhuǎn)移到IOml離心管中，每個離心管加入5ml的 菌懸液，然后加入100 μ L棉籽糖熒光探針（lm M)，最終熒光探針的濃度為20 μ M。
[0050] 費氏弧菌在30度條件下，搖床的轉(zhuǎn)速為250rpm，培養(yǎng)1小時。同時，取50 yL菌 液測量微生物濃度上述培育1小時后的細菌然后在8000rp離心10min，再用5ml PBS分別 清洗三次。清洗過得細菌菌斑在冰浴條件下，超聲16分鐘。超聲的輸出功率為200瓦，100 個循環(huán)操作過程。微生物被破碎之后，用離心機8000rp離心10min。上清液的熒光強度用 日立熒光光譜儀測量。棉籽糖熒光探針在上清液中的濃度通過其標準曲線測量。
[0051] 用疊氮化