光方法檢測三聚氰胺，而雙光子激發(fā)熒光具 有深穿透性，因此本方法能夠在復(fù)雜環(huán)境中進(jìn)行三聚氰胺的檢測，應(yīng)用范圍廣。本發(fā)明在復(fù) 雜環(huán)境中三聚氰胺的檢測方面具有巨大的應(yīng)用潛力，可為三聚氰胺的監(jiān)管提供新的檢測手 段。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1所制得的金納米粒子TEM圖。
[0027] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1所得到的標(biāo)準(zhǔn)信號曲線圖。
【具體實(shí)施方式】：
[0028] 實(shí)施例1 :
[0029] 步驟1，制備金納米粒子
[0030] 所用的玻璃儀器都經(jīng)過王水浸泡，蒸餾水清洗，烘干備用。0. 25mL濃度為0.1mol/ L HAuCl4溶液加入到IOOmL去離子水中，加熱至沸騰。I. 88mL濃度為0. lg/mL的檸檬酸鈉 溶液加入到沸騰液中，溶液5s后變成淺藍(lán)色，Imin后變成酒紅色。繼續(xù)反應(yīng)15min，停止攪 拌，靜置冷卻至室溫。得到濃度為13nmol/L的，粒徑為15nm金納米粒子溶液。金納米粒子 TEM圖如圖1所示。
[0031] 步驟2,得到背景信號
[0032] 取0. 2mL上述步驟制備的金納米粒子溶液用去離子水稀釋1倍，加入OmL三聚氰 胺，混合均勻后，放置lOmin。然后，取0.1 ml樣品，用0. 38ml去離子水稀釋，得到被測樣品， 將激光束聚焦在被測樣品上，樣品發(fā)出的發(fā)射光被與激發(fā)光源成直角的光纖收集，光纖連 著單色器和計算機(jī)系統(tǒng)，在光譜儀之前放置一個短波通過750nm的過濾器，最大限度降低 從激發(fā)光產(chǎn)生的散射，飛秒激光的功率為40mW，積分時間為5s。即得到背景信號。背景信 號值為3。
[0033] 步驟3,得到不同濃度的三聚氰胺的雙光子熒光信號
[0034] 重復(fù)步驟2,所不同的是加入三聚氰胺的量由OmL變?yōu)? yL濃度為1 μ mol/L，測 其雙光子熒光信號，即濃度為0.0 l μ mol/L的三聚氰胺的信號。該信號值為3. 3。
[0035] 重復(fù)步驟2,所不同的是加入三聚氰胺的量由OmL變?yōu)?. 2 μ L濃度為1 μ mol/L， 即得濃度為〇. 03 μ mol/L的三聚氰胺的信號。該信號值為9。
[0036] 重復(fù)步驟2,所不同的是加入三聚氰胺的量由OmL變?yōu)?. 4 μ L濃度為1 μ mol/L， 即得濃度為〇. 06 μ mol/L的三聚氰胺的信號。該信號值為18。
[0037] 重復(fù)步驟2,所不同的是加入三聚氰胺的量由OmL變?yōu)? μ L濃度為200 μ mol/L， 即得濃度為2 μ mol/L的三聚氰胺的信號。該信號值為600。
[0038] 如上所述，通過改變?nèi)矍璋返牧考皾舛?，得到不同濃度的三聚氰胺的若干信?值。
[0039] 步驟4,得到標(biāo)準(zhǔn)信號曲線
[0040] 將所得到的雙光子熒光信號對三聚氰胺濃度做曲線（縱坐標(biāo)為雙光子熒光增 強(qiáng)倍數(shù)，即樣品的雙光子熒光信號除以背景信號值），曲線方程：Y = 1. 477+96. 13X，R2 = 0.9957,如圖2所示。從圖中可以讀出本實(shí)施例的檢測限為0.01 ymol/L;檢測范圍為 0.01-2 μ mol/L〇
[0041] 步驟5,通過檢測待測樣品的雙光子信號值，對應(yīng)上述曲線，得到樣品中三聚氰胺 的濃度。
[0042] 實(shí)施例2
[0043] 按實(shí)施例1所述步驟獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同之處在于改變金納米粒子的粒徑為 30nm〇
[0044] 實(shí)施例3
[0045] 按實(shí)施例1所述步驟獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同之處在于改變金納米粒子的粒徑為 50nm〇
[0046] 實(shí)施例4
[0047] 按實(shí)施例1所述步驟獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同之處在于改變金納米粒子的濃度為 10.4nmol/L〇
[0048] 實(shí)施例5
[0049] 按實(shí)施例1所述步驟獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同之處在于改變金納米粒子的濃度為 16.3nmol/L〇
[0050] 實(shí)施例6
[0051] 按實(shí)施例1所述步驟獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同之處在于改變激光的功率及積分時間， 分別為20mW、2s
[0052] 實(shí)施例7
[0053] 按實(shí)施例1所述步驟獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，不同之處在于改變激光的功率及積分時間， 分別為60mW、10s
[0054] 實(shí)施例1~7的結(jié)果列表如下
[0055]
CN 105158225 A ^ b/b 貝
[0056] 實(shí)施例8(應(yīng)用試驗(yàn)）
[0057] 以實(shí)施例1所得到標(biāo)準(zhǔn)信號曲線為例，對不同的濃度的三聚氰胺進(jìn)行檢測。結(jié)果 如下：
[0058]
[0059] 由此可見，本發(fā)明所提供的檢測方法，可以檢測三聚氰胺的含量，而且誤差率幾乎 為零。此外，本發(fā)明還可以檢測復(fù)雜環(huán)境的三聚氰胺的含量，例如生物體內(nèi)的三聚氰胺濃 度。
【主權(quán)項】
1. 一種雙光子激發(fā)熒光檢測三聚氰胺的方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行： 步驟1，將HAuCl^液加入到去離子水中，去離子水的加入量與HAuCl 4溶液體積比為 80:0. 25~120:0. 25,加熱至沸騰，然后，將檸檬酸鈉溶液加入到沸騰液中，檸檬酸鈉溶液 的加入量與HAuCl4溶液體積比為5. 5:1~7. 5:1，反應(yīng)結(jié)束后停止攪拌，靜置冷卻至室溫， 得到含金納米粒子的溶液； 步驟2,將上述得到的金納米粒子溶液加入去離子水中，去離子水的加入量與金納米 粒子溶液體積比為1:1~1. 2,加入不同濃度的三聚氰胺，混合均勻后，室溫下放置10~ 15min，得到混合溶液； 步驟3,將上述混合溶液加入去離子水，去離子水的加入量與混合溶液體積比為 1:3. 5~4,得到待測試樣品； 步驟4,將激光束聚焦在待測試樣品上，樣品發(fā)出的發(fā)射光被與激發(fā)光源成直角的光纖 收集，光纖連著單色器和計算機(jī)系統(tǒng)，在光譜儀之前放置一個短波通過750nm的過濾器，最 大限度降低從激發(fā)光產(chǎn)生的散射。 步驟5,將所得雙光子熒光信號對三聚氰胺濃度做曲線，從曲線上讀出檢測限以及檢測范圍。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1中的HAuCl 4溶液的濃度為 0? lmol/L ;所述檸檬酸鈉溶液的濃度為0? lg/mL〇3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1中反應(yīng)結(jié)束的判斷方法為：加入 梓檬酸鈉溶液后，溶液5s后變成淺藍(lán)色，Imin后變成酒紅色，繼續(xù)反應(yīng)15min后，反應(yīng)結(jié)束。4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1中得到的金納米粒子的粒徑為 15 ~50nm〇5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1中得到的金納米粒子溶液的濃度 為 10.4 ~16. 3nmol/L。6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的激光束是用Avesta TiF-IOOM femtosecond Ti : sapphire振蕩器做雙光子焚光激發(fā)光源，其中輸出激光脈沖中心波長在 810nm，脈沖持續(xù)時間80fs，重復(fù)率84. 5MHz〇7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于激光的功率為20~60mW ;積分時間為2~ IOs0
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雙光子激發(fā)熒光檢測三聚氰胺的方法。本方法利用雙光子激發(fā)熒光方法檢測三聚氰胺，而雙光子激發(fā)熒光具有深穿透性，因此本方法能夠在復(fù)雜環(huán)境中進(jìn)行三聚氰胺的檢測，應(yīng)用范圍廣。本發(fā)明在復(fù)雜環(huán)境中三聚氰胺的檢測方面具有巨大的應(yīng)用潛力，可為三聚氰胺的監(jiān)管提供新的檢測手段。
【IPC分類】G01N21/64
【公開號】CN105158225
【申請?zhí)枴緾N201510590290
【發(fā)明人】姜翠鳳, 龐紹平, 羅駒華, 劉學(xué)然, 孫瑜
【申請人】鹽城工學(xué)院
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年9月16日