一種檢測l半胱氨酸濃度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種利用化學(xué)修飾電極快速檢測L半賊氨酸濃度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] L半賊氨酸（切S，2-氨基一 3-琉基丙酸）是一種重要具有生物活性的含硫氨基 酸，基于其獨特的結(jié)構(gòu)，在動物體內(nèi)起著營養(yǎng)和免疫相關(guān)的重要生理功能，許多酶的活性都 與它們結(jié)構(gòu)中的琉基有關(guān)。因此，建立L半賊氨酸濃度測定方法對生命科學(xué)具有重要意義。 席夫堿分子中的C=N雙鍵可W與金屬離子配位W及與其它不飽和基團形成共輛結(jié)構(gòu)，在 其兩邊引入不同的空間位阻、不同的功能基團，可W改變席夫堿化合物的性質(zhì)。目前席夫堿 化合物被廣泛的應(yīng)用于催化、藥物和光電材料等領(lǐng)域，對席夫堿衍生物的電分析應(yīng)用也很 熱口。目前，用于k半脫氨酸濃度測定的方法有分光光度法、HPLC法、化學(xué)發(fā)光法、高效液 相色譜法和伏安法。伏安法測定L半脫氨酸具有電極制作簡便、操作方法簡便、安全、綠色 環(huán)保等優(yōu)點，一直是受到人們的追捧，而配合物修飾電極是近年來擴展的化學(xué)修飾電極的 一個新的領(lǐng)域，配合物中特有的配體和中屯、金屬離子能使配合物修飾電極具有高度的富集 選擇性和電催化作用，能系統(tǒng)地有針對地分析檢測物質(zhì)的含量和性狀?；诖耍緦＠峁?了一種新的儀配合物修飾劑用來檢測L半脫氨酸濃度。即利用4-甲酯苯甲酸金剛燒醋縮 鄰氨基苯酪席夫堿儀配合物的電化學(xué)活性，經(jīng)滴涂法，制備了席夫堿儀配合物/氧化石墨 締修飾玻碳電極?？疾炝讼驂A儀配合物/氧化石墨修飾玻碳電極對L半脫氨酸的循環(huán)伏 安行為，結(jié)果表明PBS緩沖液抑為7,修飾電極的浸潰吸附時間為30min，L半脫氨酸濃度 在0. 01~0. 08mol/L范圍內(nèi)，與氧化峰電流值具有良好的線性關(guān)系，該方法已用于食品樣 中L半脫氨酸的含量測定，相對標準偏差為3. 9%，加標回收率在97. 88%~99. 96%，據(jù)此 建立了食品中L半脫氨酸含量檢測新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種利用化學(xué)修飾電極快速檢測L半賊氨酸濃度的方法。
[0004]本發(fā)明方法檢測L半賊氨酸濃度的原理：L半脫氨酸分子含有琉基易被氧化。本發(fā) 明將儀配合物席夫堿修飾到電極表面，利用儀配合物作為電子媒介，直接在電極表面將-SH 氧化成-S2,形成氧化還原峰，因而具備用循環(huán)伏安法進行檢測L半賊氨酸濃度的必要條件。
[0005] 具體步驟為：
[000引 （1)先用0. 5μπι的A!203粉末將直徑為2mm的玻碳電極在鹿皮上拋光至鏡面，在 超聲波輔助下依次于超純水、無水乙醇和二次蒸饋水中各超聲3分鐘，于室溫中驚干，干燥 后置于陰涼處備用。
[0007] 似將Img氧化石墨締溶于1血分析純N，N-二甲基甲酯錠（DMF)溶劑中，用超聲 波震蕩至變成黑色的懸浮液。
[000引 做將5μL步驟似所得的氧化石墨締懸浮液滴涂在玻碳電極表面，在室溫下自 然揮發(fā)至干，得氧化石墨締/玻碳電極。
[0009] (4)將5μL濃度為0. 002mol/L的4-甲酯苯甲酸金剛燒醋縮鄰氨基苯酪席夫堿儀 配合物的N，N-二甲基甲酯錠（DM巧溶液滴涂在步驟（3)所得的氧化石墨締/玻碳電極表 面，滴涂6-10次，配合物溶液自然吸附在電極表面，然后在室溫下驚干1小時；最后，用蒸 饋水沖洗，W除去未吸附在電極表面上的物質(zhì)，獲得4-甲酯苯甲酸金剛燒醋縮鄰氨基苯酪 席夫堿儀配合物/氧化石墨締修飾玻碳電極。
[0010] (5)W步驟（4)制得的4-甲酯苯甲酸金剛燒醋縮鄰氨基苯酪席夫堿儀配合物/ 氧化石墨締修飾玻碳電極為工作電極，飽和氯化鋼溶液的Ag/AgCl電極為參比電極，銷金 電極為輔助電極，采用Ξ電極體系，在室溫下，在含有不同濃度的L半脫氨酸的PBS緩沖溶 液中（pH= 7. 0)進行，循環(huán)伏安法掃描，掃描速度50mv/s，掃描范圍為-0. 85V~+0. 4V， 記錄不同濃度L半脫氨酸循環(huán)伏安圖中對應(yīng)的氧化峰電流，結(jié)果表明，L半脫氨酸濃度 在0. 01~0. 08mol/L范圍內(nèi)，濃度與其氧化峰電流值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y =-4. 53963e5+1. 71：Mle4χχ，相關(guān)系數(shù)為 0. 99303。
[0011] (6)另取一定量的L半脫氨酸待測溶液，同步驟巧）中的方法測定氧化峰電流，再 根據(jù)步驟（5)所得的線性回歸方程計算待測溶液中L半脫氨酸的濃度。
[0012] 本發(fā)明提出的檢測L半脫氨酸濃度的方法具有電極制作簡單、操作方法簡便、安 全、環(huán)保等優(yōu)點。
【附圖說明】
[0013] 圖1為本發(fā)明實施例中WL半脫氨酸濃度為橫縱標和W氧化峰電流為縱坐標繪制 的工作曲線圖。
【具體實施方式】
[0014] 實施例：
[001引 （1)先用0. 5μπι的A!203粉末將玻碳電極（0為2mm)在鹿皮上拋光至鏡面，在超 聲波輔助下依次于超純水、無水乙醇和二次蒸饋水中各超聲3分鐘，于室溫中驚干，干燥后 置于陰涼處備用。
[001引 似將Img氧化石墨締溶于1血分析純N，N-二甲基甲酯錠（DMF)溶劑中，用超聲 波震蕩至變成黑色的懸浮液。
[0017]做將5yL步驟似所得的氧化石墨締懸浮液滴涂在玻碳電極表面，在室溫下自 然揮發(fā)至干，得氧化石墨締/玻碳電極。
[001引 （4)將5μL濃度為0. 002mol/L的4-甲酯苯甲酸金剛燒醋縮鄰氨基苯酪席夫堿儀 配合物的N，N-二甲基甲酯錠（DM巧溶液滴涂在步驟（3)所得的氧化石墨締/玻碳電極表 面，滴涂8次，配合物溶液自然吸附在電極表面，然后在室溫下驚干1小時；最后，用蒸饋水 沖洗，W除去未吸附在電極表面上的物質(zhì)，獲得4-甲酯苯甲酸金剛燒醋縮鄰氨基苯酪席夫 堿儀配合物/氧化石墨締修飾玻碳電極。
[001引 巧）W步驟（4)制得的4-甲酯苯甲酸金剛燒醋縮鄰氨基苯酪席夫堿儀配合物/ 氧化石墨締修飾玻碳電極為工作電極，飽和氯化鋼溶液的Ag/AgCl電極為參比電極，銷金 電極為輔助電極，采用Ξ電極體系，在室溫下，在含有不同濃度的L半脫氨酸的PBS緩沖溶 液中（pH= 7. 0)進行，循環(huán)伏安法掃描，掃描速度50mv/s，掃描范圍為-0. 85V~+0. 4V， 記錄不同濃度L半脫氨酸循環(huán)伏安圖中對應(yīng)的氧化峰電流，結(jié)果表明，L半脫氨酸濃度 在0. 01~0. 08mol/L范圍內(nèi)，濃度與其氧化峰電流值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y =-4. 53963e5+1. 71：Mle4χχ，相關(guān)系數(shù)為 0. 99303。
[0020] (6)將市售牛奶樣品煮沸，確保無氧，冷卻后，取5. 00血加入抑=7的PBS緩沖溶 液，溶液定容至25.OOmU按步驟（5)所示的方法，進行循環(huán)伏安掃描，讀出氧化峰電流，按 步驟（5)所示方法將氧化峰電流代入線性方程，測定k半脫氨酸的含量；再向5. 處理 過的牛奶加入20.OOmLPBS溶液，再加入標準k半脫氨酸溶液，進行加標回收實驗，結(jié)果見 表1。相對標準偏差RSD= 3. 9%，加標回收率在95%W上（見下表1)。
[0021] 表1:飲料中k半脫氨酸含量的測試結(jié)果
[0022]
【主權(quán)項】
1. 一種檢測L半胱氨酸濃度的方法，其特征在于具體步驟為： (1) 先用0. 5μπι的A1203粉末將直徑為2_的玻碳電極在麂皮上拋光至鏡面，在超聲 波輔助下依次于超純水、無水乙醇和二次蒸餾水中各超聲3分鐘，于室溫中晾干，干燥后置 于陰涼處備用； (2) 將lmg氧化石墨烯溶于lmL分析純N，N-二甲基甲酰銨溶劑中，用超聲波震蕩至變 成黑色的懸浮液； (3) 將5yL步驟（2)所得的氧化石墨烯懸浮液滴涂在玻碳電極表面，在室溫下自然揮 發(fā)至干，得氧化石墨稀/玻碳電極； (4) 將5μL濃度為0. 002mol/L的4-甲酰苯甲酸金剛烷酯縮鄰氨基苯酚席夫堿鎳配合 物的N，N-二甲基甲酰銨溶液滴涂在步驟（3)所得的氧化石墨烯/玻碳電極表面，滴涂6-10 次，配合物溶液自然吸附在電極表面，然后在室溫下晾干1小時；最后，用蒸餾水沖洗，以除 去未吸附在電極表面上的物質(zhì)，獲得4-甲酰苯甲酸金剛烷酯縮鄰氨基苯酚席夫堿鎳配合 物/氧化石墨稀修飾玻碳電極； (5) 以步驟（4)制得的4-甲酰苯甲酸金剛烷酯縮鄰氨基苯酚席夫堿鎳配合物/氧 化石墨烯修飾玻碳電極為工作電極，飽和氯化鈉溶液的Ag/AgCl電極為參比電極，鉑金電 極為輔助電極，采用三電極體系，在室溫下，在含有不同濃度的pH= 7.0的L半胱氨酸的 PBS緩沖溶液中進行，循環(huán)伏安法掃描，掃描速度50mv/s，掃描范圍為-0. 85V~+0. 4V， 記錄不同濃度L半胱氨酸循環(huán)伏安圖中對應(yīng)的氧化峰電流，結(jié)果表明，L半胱氨酸濃度 在0. 01~0. 08mol/L范圍內(nèi)，濃度與其氧化峰電流值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y =-4. 53963e5+L71341e4Xx，相關(guān)系數(shù)為 0· 99303 ; (6) 另取一定量的L半胱氨酸待測溶液，同步驟（5)中的方法測定氧化峰電流，再根據(jù) 步驟（5)所得的線性回歸方程計算待測溶液中L半胱氨酸的濃度。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測L半胱氨酸濃度的方法。利用4-甲酰苯甲酸金剛烷酯縮鄰氨基苯酚席夫堿鎳配合物的電化學(xué)活性，經(jīng)滴涂法，制備了席夫堿鎳配合物/氧化石墨烯修飾玻碳電極。L半胱氨酸濃度在0.01～0.08mol/L范圍內(nèi)，濃度與其氧化峰電流值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y＝-4.53963e-5+1.71341e-4×x，相關(guān)系數(shù)為0.99303，據(jù)此可利用循環(huán)伏安方法，測定L半胱氨酸濃度。本發(fā)明提出的檢測L半胱氨酸濃度的方法具有電極制作簡單、操作方法簡便、安全、環(huán)保等優(yōu)點。
【IPC分類】G01N27/48, G01N27/30
【公開號】CN105403611
【申請?zhí)枴緾N201510671539
【發(fā)明人】劉崢, 郭鵬, 郭亞晉, 勞星喬
【申請人】桂林理工大學(xué)
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年10月18日