一種用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的聯(lián)合檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實用新型涉及醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域，具體涉及一種用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的聯(lián)合檢測試劑 盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA)是一種常見的以慢性多關(guān)節(jié)性炎癥 為主要癥狀的系統(tǒng)性自身免疫疾病，其特征性病理改變是關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥，滑膜增生 形成絨毛狀突起，侵犯關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，造成關(guān)節(jié)軟骨、骨和關(guān)節(jié)囊等破 壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病程長、多復(fù)發(fā)，對組織的損傷不可逆，給 患者帶來極大痛苦。該疾病早期癥狀復(fù)雜多樣且不典型，給臨床診斷帶來困難，進(jìn)而延誤治 療導(dǎo)致病情進(jìn)展，嚴(yán)重危害患者健康和影響生活質(zhì)量。
[0003] RA的早期診斷主要依靠臨床癥狀和血清學(xué)檢查。目前常用的血清學(xué)指標(biāo)如下： (1)類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF) :RF是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中針對IgG Fc片 段上抗原表位的一類自身抗體。RF是目前類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診治中最常用的一個臨床檢測指 標(biāo)，它具有較高的敏感性，但特異性較差。（2) C反應(yīng)蛋白（CRP) :CRP是肝臟合成的一種免 疫調(diào)節(jié)因子，能激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，能與淋巴細(xì)胞表面的CRP受體結(jié)合調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的免 疫功能，是一種非特異性炎癥急性時相反應(yīng)蛋白，在機(jī)體發(fā)生炎癥、組織損傷或壞死及惡性 腫瘤時升高。研究表明，CRP參與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和發(fā)展，能夠作為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷 和治療的一個參考指標(biāo)，且其升高與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的活動成線性相關(guān)。（3)抗鏈球菌溶血素 0抗體（ASO):人體感染溶血性鏈球菌后，血清中可出現(xiàn)大量AS0。研究表明，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié) 炎活動期，ASO的含量會升高。（4) C3補(bǔ)體：在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)，血清中C3補(bǔ)體與RA 病情活動度有相關(guān)性，有研究表明，補(bǔ)體消耗或者丟失增多，造成C3含量降低，可作為RA病 情活動的觀察指標(biāo)之一。（5) IgM抗體（Immunoglobulin M，IgM):是免疫球蛋白M的縮寫， 血清中檢測IgM，用于提示新近發(fā)生的炎癥或感染，可用于炎癥或感染的早期診斷。
[0004] 單獨檢測上述某一標(biāo)志物指標(biāo)，并不能提供很多的信息，檢測靈敏度和特異性都 比較低，很難檢測出早期或復(fù)發(fā)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者，容易出現(xiàn)誤診或者漏診。目前還沒有一 種診斷裝置，同時對RF、CRP、AS0、C3和IgM進(jìn)行方便、快捷和準(zhǔn)確的篩查。而這幾種指標(biāo) 的聯(lián)合檢測有助于提高RA診斷的敏感性和特異性以及早期診斷，對于后期的治療有重大 意義。因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種在臨床上能夠快速準(zhǔn)確的檢測RA的診斷裝置，以滿 足臨床診斷的需要。
[0005] 量子點（quantum dots，QDs)是一類由II -IV族或III - V族元素組成的、半徑小于 或接近激子玻爾半徑的半導(dǎo)體納米晶體。量子點是目前生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域最有應(yīng)用前景的納米 材料，與傳統(tǒng)有機(jī)熒光染料相比，量子點具有激發(fā)光譜寬且連續(xù)分布、發(fā)射光譜呈對稱分布 且寬度窄、熒光發(fā)射波長可通過改變量子點的大小而加以調(diào)節(jié)、不同大小的半導(dǎo)體量子點 能被單一波長的光激發(fā)而發(fā)出不同顏色的熒光、量子點可持續(xù)發(fā)光且熒光壽命比染料分子 的長100倍以上等優(yōu)點，采用量子點標(biāo)記生物大分子，在細(xì)胞示蹤、生物分子檢測等方面具 有重要的應(yīng)用價值。近年來，基于量子點的免疫熒光檢測技術(shù)已經(jīng)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了 一定的應(yīng)用。基于量子點優(yōu)越的光學(xué)性能，開發(fā)基于量子點標(biāo)記的用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎聯(lián)合 檢測的試紙盒，將有助于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的早期診斷。 【實用新型內(nèi)容】
[0006] 本實用新型需要解決的現(xiàn)有技術(shù)的問題是：現(xiàn)有的單一檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎標(biāo)志物 的試劑盒或試紙條，其檢測靈敏度和特異性低，目前還沒有能夠同時檢測RF、CRP、ASO、C3 和IgM標(biāo)記物的聯(lián)合診斷試劑盒。
[0007] 為了解決上述問題，本實用新型提供了如下技術(shù)方案：
[0008] 具體而言，本實用新型提供了一種用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的聯(lián)合檢測試劑盒，包括盒 體和試紙條，所述試紙條包括底板1、樣品墊2、結(jié)合墊3、硝酸纖維素膜4、檢測區(qū)7、質(zhì)控區(qū) 6和吸水濾紙5，所述檢測區(qū)7包括抗RF抗體檢測區(qū)作為第一檢測區(qū)71、抗CRP抗體檢測區(qū) 作為第二檢測區(qū)72、抗ASO抗體檢測區(qū)作為第三檢測區(qū)73、抗C3抗體檢測區(qū)作為第四檢測 區(qū)74和抗IgM抗體檢測區(qū)作為第五檢測區(qū)75。
[0009] 優(yōu)選的，所述結(jié)合墊3表面包被有抗體層，所述抗體層包括量子點標(biāo)記的抗RF抗 體、抗CRP抗體、抗ASO抗體、抗C3抗體和抗IgM抗體。
[0010] 優(yōu)選的，所述質(zhì)控區(qū)6為包被有蛋白抗體的質(zhì)控區(qū)，設(shè)置于硝酸纖維素膜4上。
[0011] 優(yōu)選的，所述底板1為PVC底板、硬紙板或硬質(zhì)纖維板。
[0012] 優(yōu)選的，所述底板1為PVC底板。
[0013] 優(yōu)選的，所述樣品墊2、所述結(jié)合墊3、所述硝酸纖維素膜4、所述吸水濾紙5從左到 右依次搭接在所述底板1上。
[0014] 優(yōu)選的，所述檢測試劑盒還包括放置在所述盒體內(nèi)的固定底座10,所述固定底座 10上包括用于固定試紙條的卡口 12和用于放置試紙條的容納區(qū)11。
[0015] 優(yōu)選的，所述檢測試劑盒還包括與所述固定底座10和所述試紙條配套使用的上 蓋14,所述上蓋14帶有觀察口 15和加樣口 16。
[0016] 優(yōu)選的，所述檢測試劑盒還包括選自下述部分中的一種或多種：干燥劑、滴管、說 明書和樣品收集管。
[0017] 其中，抗RF抗體檢測區(qū)、抗CRP抗體檢測區(qū)、抗ASO抗體檢測區(qū)、抗C3抗體檢測區(qū) 和抗IgM抗體檢測區(qū)在硝酸纖維素膜上的位置可以替換。搭接指的是，相鄰的兩個組件首 尾部分重疊，并且在重疊處形成可以允許液體樣品移動的連接結(jié)構(gòu)。
[0018] 采用不同濃度的全血質(zhì)控物進(jìn)行定量測定，根據(jù)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品和樣品檢測的結(jié) 果，進(jìn)行線性范圍的計算得到檢測范圍，各檢測指標(biāo)的檢測范圍分別為：
[0019] RF 的檢測范圍為 lOIU/ml ~350IU/ml。
[0020] CRP的檢測范圍為0· 5~180mg/L。
[0021] ASO 的檢測范圍為 50U/ml ~800IU/ml。
[0022] C3的檢測范圍為0. 2g/L~5g/L。
[0023] IgM 的檢測范圍為(λ 20g/L ~4. 50g/L。
[0024] 其中，各檢測指標(biāo)的參考范圍分別為：RF為10IU/ml~350U/ml，CRP為0~8mg/ L，ASO 為 0 ~170IU/ml，C3 為 0· 90g/L ~I. 80g/L，IgM 為 0· 4g/L ~2. 3g/L。
[0025] 采用ZnS，CdS，HgS，ZnSe或CdSe的其中一種為核，二氧化硅為殼組成的復(fù)合粒子 對抗體直接給予標(biāo)記得到量子點標(biāo)記的抗體，或者直接購買得到。量子點具有寬的激發(fā)譜 和窄的發(fā)射譜，而量子點的發(fā)射光譜可以通過改變量子點的粒徑尺寸大小來控制，從而得 到帶有不同熒光顏色的物質(zhì)，實現(xiàn)同一激發(fā)光譜下不同粒徑的量子點的同步檢測。分別對 RF、CRP、ASO、C3和IgM五種蛋白以及其各個組合進(jìn)行熒光檢測。檢測時，若試紙條的檢測 區(qū)和質(zhì)控區(qū)位置上均出現(xiàn)熒光條帶，則待測樣品檢測為陽性；若僅在質(zhì)控區(qū)位置上出現(xiàn)熒 光條帶，而檢測區(qū)位置上無熒光條帶，則待檢樣品檢測為陰性；若在質(zhì)控區(qū)位置上未出現(xiàn)熒 光條帶，無論檢測區(qū)位置上是否出現(xiàn)熒光條帶，檢測結(jié)果都無效。
[0026] 本實用新型的有益效果是：應(yīng)用本實用新型的用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的聯(lián)合檢測試劑 盒可以同時檢測RF、CRP、ASO、C3和IgM五種標(biāo)記物，從而大大提高類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患病人群 的診斷的速度和效率，相對于單項檢測具有靈敏度高和特異性強(qiáng)的特點，實現(xiàn)了類風(fēng)濕疾 病診斷的高效快捷。
[0027] 下面結(jié)合附圖和各個【具體實施方式】，對本實用新型及其有益技術(shù)效果進(jìn)行詳細(xì)說 明。
【附圖說明】
[0028] 圖1為本實用新型實施例一的用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的聯(lián)合檢測試劑盒的試紙條的 結(jié)構(gòu)示意圖，其中，1為底板，2為樣品墊，3為結(jié)合墊，4為硝酸纖維素膜，5為吸水濾紙，6為 質(zhì)控區(qū)，7為檢測區(qū)，71為第一檢測區(qū)，72為第二檢測區(qū)，73為第三檢測區(qū)，74為第四檢測 區(qū)，75為第五檢測區(qū)。
[0029] 圖2a為本實用新型實施例一的用來固定試紙條的固定底座的俯視圖，圖2b為實 施例一的用來固定試紙條的固定底座的側(cè)視圖，其中10為固定底座，11為容納區(qū)，12為卡 □ 〇
[0030] 圖3為本實用新型實施例一的用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的聯(lián)合檢測試劑盒的盒體的結(jié) 構(gòu)示意圖，其中14為上蓋，15為觀察口，16為加樣口。
【具體實施方式】
[0031] 如上所述，本實用新型的目的在于：提供一種同時檢測RF、CRP、ASO、C3以及IgM 五種標(biāo)記物的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎聯(lián)合檢測試劑盒，而且實現(xiàn)五個指標(biāo)的聯(lián)合檢測的靈敏度和特 異性均高于單項檢測。
[0032] 下面結(jié)合附圖和【具體實施方式】對本實用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0033] 實施例一
[0034] 一、量子點標(biāo)記抗體的制備方法
[0035] 分別取IOnm粒徑的CdSe量子點標(biāo)記的鼠抗人RF單克隆抗體（200IU/ml) 500ul， 15nm粒徑的CdSe量子點標(biāo)記的鼠抗人CRP單克隆抗體（200mg/L) 500ul，20nm粒徑的CdSe 量子點標(biāo)記的鼠抗人ASO單克隆抗體（300IU/ml)500ul，25nm粒徑的CdSe量子點標(biāo)記的鼠 抗人C3