專利名稱：一種香柚的組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物組培育苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種香柚的組培快繁方法。
基于上海及長江中下游地區(qū)城市綠化所面臨的現(xiàn)狀，又要重視地方特色品種的應(yīng)用，這樣的任務(wù)無疑給目前保存于上海市寶山區(qū)長興島和橫沙島上的一種屬于柑桔類(蕓香科，柑桔屬)的優(yōu)良樹種—香柚提供了一個(gè)廣闊的發(fā)展空間。香柚適宜作為上海及長江中下游地區(qū)行道果樹、公園裝飾樹種、城市小區(qū)綠化或生態(tài)林優(yōu)勢種群，它具有的園藝性狀優(yōu)勢是1樹干挺拔，四季翠綠，適合行道果樹特點(diǎn)，易與其他樹種混種，形成的森林生態(tài)網(wǎng)絡(luò)；2每年五一節(jié)假日前后是盛花季節(jié)，滿樹白花，香氣宜人，樹葉散發(fā)的氣體具有凈化空氣的作用；3成年樹金色碩果，由于果酸，枝條有刺，不宜失竊，總掛果時(shí)間長達(dá)半年(尤其從國慶節(jié)可持續(xù)到春節(jié)，滿樹金黃色果子)，每個(gè)直徑達(dá)10-12cm，沿道路兩旁形成一條美麗的風(fēng)景線，宜作為園庭果樹和組成城市生態(tài)林；4果實(shí)雖有酸味，加工后仍可食用，干果為中藥材；5樹種抗病性強(qiáng)，無致命病蟲害發(fā)生。
香柚雖具有上述優(yōu)勢，但是目前香柚種苗培育遇到的困難就是由于其繁殖為有性繁殖因易發(fā)生植株變異，導(dǎo)致種苗整齊度與種苗質(zhì)量差；利用種子或枝條扦插，則無法短時(shí)間內(nèi)提供大批優(yōu)質(zhì)苗木。因此需要一種技術(shù)既能保證苗木的整齊一致，又能快速繁殖，這就是本發(fā)明所要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提出一種快速繁殖香柚的方法，克服有性繁殖植株變異與整齊度差的缺點(diǎn)，達(dá)到快速獲得植株整齊一致的優(yōu)良香柚苗木。
本發(fā)明提出的香柚組培快繁方法，以香柚成熟種子為材料，經(jīng)種子培養(yǎng)、微不定芽誘導(dǎo)與擴(kuò)繁、叢生苗壯苗、誘導(dǎo)生根獲得香柚組培苗，具體步驟如下(1)籽種培養(yǎng)種子接種于培養(yǎng)基MS1，該培養(yǎng)基MS1為MS無機(jī)鹽、蔗糖和不同激素配比組合；(2)微不定芽誘導(dǎo)與擴(kuò)繁種子經(jīng)過15-30培養(yǎng)，發(fā)芽成綠苗；取膨大綠色子葉接種于培養(yǎng)基MS2，該培養(yǎng)基MS2為MS無機(jī)鹽、蔗糖與不同激素配比組合；(3)叢生芽壯苗將叢生苗組織切塊，接種于MS3培養(yǎng)基增殖，該培養(yǎng)基MS3為MS無機(jī)鹽、蔗糖與不同激素配比組合；(4)誘導(dǎo)生根將單株株苗扦插于誘導(dǎo)根的培養(yǎng)基MS4中，該培養(yǎng)基MS4為MS無機(jī)鹽、蔗糖與激素配比組合；本發(fā)明中培養(yǎng)基組分比較好的重量配比如下籽種培養(yǎng)基MS1MS無機(jī)鹽 0.3-0.6％蔗糖 1-2％6BA 0.5-1.5×10-6NAA 1-3×10-7植物凝膠 0.2-0.4％pH5.6-5.9微不定芽誘導(dǎo)及擴(kuò)繁培養(yǎng)基MS2MS無機(jī)鹽 0.3-0.6％蔗糖 1-2％植物凝膠 0.2-0.4％NAA 1-3×10-76-BA 0.5-1.5×10-6生物素0.5-1.5×10-7葉酸 0.5-1.5×10-7
維生素C 2-6×10-7核黃素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9叢生芽壯苗培養(yǎng)基MS3MS無機(jī)鹽 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝膠 0.2-0.4％IBA 0.5-1.5×10-6IAA 0.1-0.3×10-6生物素0.5-1.5×10-7葉酸 0.5-1.5×10-7維生素C 2-6×10-6核黃素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9誘導(dǎo)根培養(yǎng)基MS4MS無機(jī)鹽 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝膠 0.2-0.4％IBA 0.5-2×10-7IAA 0.1-0.3×10-6生物素0.5-1.5×10-7葉酸 0.5-1.5×10-7維生素C 2-6×10-6核黃素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9本發(fā)明提出的香柚組培快繁技術(shù)可達(dá)到每年擴(kuò)繁速度為103-104倍，組培苗生根系發(fā)達(dá)并且植株長勢良好，是一種理想的快繁技術(shù)。
本發(fā)明的方法中，籽種培養(yǎng)包括浸種、消毒等預(yù)處理，具體操作為浸種種子在45℃-50℃溫水中浸泡5-10分鐘，再用55℃-60℃熱水浸泡50-60分鐘；消毒種子用15％次氯酸鈉消毒20-25分鐘；然后將種子接種于消毒的培養(yǎng)基MS1上，置于27℃-29℃黑暗條件下培養(yǎng)；本發(fā)明的方法中，培養(yǎng)種子時(shí)，每間隔10-15天可更換培養(yǎng)基一次。經(jīng)過15-30天培養(yǎng)后，種子發(fā)芽成綠苗。取膨大綠色子葉接種培養(yǎng)基MS2，經(jīng)20-30天培養(yǎng)成叢生芽；本發(fā)明的方法中，將長成0.5-1.5cm直徑左右的叢生苗組織切成每塊直徑為0.3-0.5cm的小塊，接種于MS3培養(yǎng)基，26℃-29℃下光照培養(yǎng)使之增殖；本發(fā)明的方法中，誘導(dǎo)生根包括叢生苗分株與誘導(dǎo)生根，具體為將長至2.5-3cm高度的叢生苗，無菌操作分離成單株株苗，扦插于誘導(dǎo)根的培養(yǎng)基MS4中。培養(yǎng)20-30天，誘導(dǎo)生根，待主根長到2-3cm，可作移植用。
本發(fā)明方法中，對于經(jīng)誘導(dǎo)生根的組培苗還可進(jìn)一步進(jìn)行練苗和落地培養(yǎng)、苗圃培養(yǎng)，具體如下(1)練苗和落地培養(yǎng)，在落地前打開有生根的組培苗瓶蓋，室溫放置2-5天，然后移植至營養(yǎng)缽中，室溫培養(yǎng)；(2)苗圃培養(yǎng)，20-30天后，將生長良好的組培苗直接移栽到室外苗床培養(yǎng)，定期進(jìn)行種苗水、肥、藥等技術(shù)管理，確保育苗良好質(zhì)量。
實(shí)施例1(是1號處理)。種子在45℃溫水中浸泡5分鐘，再用60℃熱水浸泡55分鐘。種子經(jīng)15％次氯酸鈉消毒20分鐘，將種子接種于無菌的培養(yǎng)基MS1(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.44％，蔗糖1.5％，6BA 1×10-6，NAA 2×10-7，植物凝膠0.25％)上，置于27℃黑暗條件下培養(yǎng)；培養(yǎng)的種子，每間隔10天更換培養(yǎng)基一次；在經(jīng)過25天培養(yǎng)后，種子發(fā)芽成綠苗。取膨大綠色子葉接種培養(yǎng)基MS2(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.44％，蔗糖1.5％，NAA 2×10-7，6BA 1×10-6，生物素1×10-7，葉酸1×10-7，核黃素1×10-7，維生素C 5×10-6，植物凝膠0.25％)，經(jīng)25天培養(yǎng)成叢生芽；將長成1.5cm直徑左右的叢生苗組織切成每塊直徑為0.3cm的小塊，接種于MS3培養(yǎng)基(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.22％，蔗糖1.5％，IAA2×10-7，IBA 8×10-7，生物素1×10-7，葉酸1×10-7，核黃素1×10-7，維生素C 5×10-6，植物凝膠0.25％)，28℃下光照培養(yǎng)使之增殖；將長至2.5cm左右高度的叢生苗，無菌操作分離成單株株苗，扦插于誘導(dǎo)根的培養(yǎng)基MS4(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.22％，蔗糖1.5％，IAA2×10-7，IBA 1×10-7，生物素1×10-7，葉酸1×10-7，核黃素1×10-7，維生素C 5×10-6，植物凝膠0.25％)中。培養(yǎng)25天，誘導(dǎo)生根，待主根長到2cm左右，進(jìn)行移植。
實(shí)施例2(是2號處理)，種子在45℃溫水中浸泡10min，再用55℃熱水浸泡50min，種子用15％次氯酸鈉消毒15min，將種子接種于消毒的培養(yǎng)基MS1(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.44％，蔗糖1.5％，6BA 1×10-6，NAA 2×10-7，植物凝膠0.25％)上，置于27℃黑暗條件下培養(yǎng)；培養(yǎng)的種子，每間隔10天更換培養(yǎng)基一次；在經(jīng)過20天培養(yǎng)后，種子發(fā)芽成綠苗。取膨大綠色子葉接種培養(yǎng)基MS2(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.44％，蔗糖1.5％，NAA 1.5×10-7，6BA 1×10-6，生物素1×10-7，葉酸1×10-7，核黃素1×10-7，維生素C 3×10-6，植物凝膠0.25％)，經(jīng)30天培養(yǎng)成叢生芽；將長成1.5cm直徑左右的叢生苗組織切成每塊直徑為0.3cm的小塊，接種于MS3培養(yǎng)基(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.22％，蔗糖1.5％，IAA1×10-7，IBA 8×10-7，生物素1×10-7，葉酸1×10-7，核黃素1×10-7，維生素C 3×10-6，植物凝膠0.25％)，28℃下光照培養(yǎng)使之增殖；將長至2.5cm左右高度的叢生苗，無菌操作分離成單株株苗，扦插于誘導(dǎo)根的培養(yǎng)基MS4(重量百分比為MS無機(jī)鹽0.22％，蔗糖1.5％，IAA1×10-7，IBA 1×10-7，生物素1×10-7，葉酸1×10-7，核黃素1×10-7，維生素C 3×10-6，植物凝膠0.25％)中。培養(yǎng)20天，誘導(dǎo)生根，待主根長到2cm左右，進(jìn)行移植。
以上兩種不同材料處理與培養(yǎng)基配方經(jīng)過本發(fā)明上述技術(shù)籽種培養(yǎng)-微不定芽誘導(dǎo)-叢生苗擴(kuò)繁-叢生苗分株與生根，培養(yǎng)出生根并且長勢良好的香柚植株，繁殖效率為103-104倍左右，符合組培快繁與工廠化育苗的技術(shù)要求。
權(quán)利要求
1.一種香柚組培快繁方法，其特征在于以香柚成熟種子為材料，經(jīng)種子培養(yǎng)、微不定芽誘導(dǎo)與擴(kuò)繁、叢生苗壯苗、誘導(dǎo)生根獲得香柚組培苗，具體步驟如下(1)籽種培養(yǎng) 將種子接種培養(yǎng)基MS1；(2)微不定芽誘導(dǎo)與擴(kuò)繁種子經(jīng)15～30天培養(yǎng)，發(fā)芽成綠苗，取膨大綠色子葉接種于培養(yǎng)基MS2；(3)叢生芽壯苗 將叢生苗組織切塊，接種于MS3培養(yǎng)基增殖；(4)誘導(dǎo)生根 將單株株苗扦插于誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基MS4中；上述步驟中，培養(yǎng)基組分重量配比如下籽種培養(yǎng)基MS1MS無機(jī)鹽 0.3-0.6％蔗糖 1-2％6BA 0.5-1.5×10-6NAA 1-3×10-7植物凝膠 0.2-0.4％pH5.6-5.9微不定芽誘導(dǎo)及擴(kuò)繁培養(yǎng)基MS2MS無機(jī)鹽 0.3-0.6％蔗糖 1-2％植物凝膠 0.2-0.4％NAA 1-3×10-76-BA 0.5-1.5×10-6生物素0.5-1.5×10-7葉酸 0.5-1.5×10-7維生素C 2-6×10-7核黃素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9叢生芽壯苗培養(yǎng)基MS3MS無機(jī)鹽 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝膠 0.2-0.4％IBA 0.5-1.5×10-6IAA 0.1-0.3×10-6生物素 0.5-1.5×10-7葉酸 0.5-1.5×10-7維生素C 2-6×10-6核黃素 0.5-1.5×10-7pH 5.6-5.9誘導(dǎo)根培養(yǎng)基MS4MS無機(jī)鹽 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝膠 0.2-0.4％IBA 0.5-2×10-7IAA 0.1-0.3×10-6生物素 0.5-1.5×10-7葉酸 0.5-1.5×10-7維生素C 2-6×10-6核黃素 0.5-1.5×10-7pH 5.6-5.9
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香柚組培苗快繁方法，其特征在于籽種培養(yǎng)還包括浸種、消毒預(yù)處理，具體操作為浸種種子在45℃-50℃溫水中浸泡5-10分鐘，再用55℃-60℃熱水浸泡50-60分鐘；消毒種子用15％次氯酸鈉消毒20-25分鐘；然后將種子接種于無菌培養(yǎng)基MS1上，置于27℃-29℃黑暗條件下培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香柚組培快繁方法，其特征在于培養(yǎng)種子時(shí)，每間隔10-15天更換培養(yǎng)基一次，經(jīng)過15-20天培養(yǎng)后，種子發(fā)芽成綠苗；取膨大綠色子葉接種培養(yǎng)基MS2，經(jīng)20-30天培養(yǎng)成叢生芽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香柚組培快繁方法，其特征在于叢生壯苗階段，將長成0.5-1.5cm直徑的叢生苗組織切成每塊直徑為0.3-0.5cm的小塊，接種于MS3培養(yǎng)基，26℃-29℃下光照培養(yǎng)使之增殖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香柚組培快繁方法，其特征在于誘導(dǎo)生根包括叢生苗分株壯苗與誘導(dǎo)生根，具體為將長至2.5-3cm高度的叢生苗，無菌操作分離成單株株苗，扦插于誘導(dǎo)根的培養(yǎng)基MS4中，培養(yǎng)20-30天，誘導(dǎo)生根，待主根長到2-3cm，可作移植用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的香柚組培快繁方法，其特征在于還進(jìn)行如下步驟(1)練苗和落地培養(yǎng) 在落地前打開有生根的組培苗瓶蓋，室溫放置2-5天，然后移植至營養(yǎng)缽中，室溫培養(yǎng)；(2)苗圃培養(yǎng)20-30天后，將生長良好的組培苗直接移栽到室外苗床培養(yǎng)，定期進(jìn)行種苗水、肥、藥等技術(shù)管理，確保育苗良好質(zhì)量。
全文摘要
本發(fā)明為香柚的一種組培快繁的技術(shù)。通過材料篩選處理、培養(yǎng)基成份改進(jìn)和激素調(diào)控等技術(shù)手段形成了每年擴(kuò)繁速度為10
文檔編號A01H4/00GK1373993SQ0211141
公開日2002年10月16日 申請日期2002年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月18日
發(fā)明者明鳳, 葉鳴明, 沈大棱 申請人:復(fù)旦大學(xué)