專利名稱：葛藤的組培快繁苗木生產(chǎn)方法
一、所屬領(lǐng)域本發(fā)明屬于農(nóng)林業(yè)領(lǐng)域，涉及葛藤(美國葛藤(pueraria montana Merr)、葛藤(pueraria lobata Ohwi)、粉葛(pueraria lobata Ohwi var.thomsoni van der Maesen))的苗木快繁的生產(chǎn)方法，具體地說是利用葛藤的外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，在發(fā)明的培養(yǎng)基配方基質(zhì)中，誘導(dǎo)叢生芽和生根，使其達(dá)到脫毒和增殖快繁的目的。
背景技術(shù)：
葛藤多采用壓條的繁殖方法，其繁育苗木的速度和數(shù)量均受到限制，不能滿足市場的大量需求，針對(duì)該問題，就需要尋找一項(xiàng)新的繁殖技術(shù)來迅速擴(kuò)大其種苗數(shù)量，這是業(yè)內(nèi)人士所關(guān)注的熱點(diǎn)，也是公認(rèn)的快繁技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供葛藤的組培快繁苗木生產(chǎn)方法，以此方法來迅速擴(kuò)大其種苗數(shù)量。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，利用葛藤的帶芽莖段為外植體，進(jìn)行組培快繁苗木生產(chǎn)，其特點(diǎn)是在MS基本培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，添加有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)、生長素類物質(zhì)，來誘導(dǎo)叢生芽分化以達(dá)到快速增殖、再誘導(dǎo)叢生芽生根、最后出瓶馴化的整個(gè)繁殖過程；具體操作步驟為1)外植體的選擇采集當(dāng)年生葛藤的幼莖，將其切成帶芽小段；2)培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，并分為初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；其配方分別為初代培養(yǎng)基MS+6-芐基腺嘌呤(BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L；蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8；
增殖培養(yǎng)基MS+6-芐基腺嘌呤(BA)(0.5-1.0)mg/L+萘乙酸(NAA)(0.1-0.3)mg/L，蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8；生根培養(yǎng)基MS+萘乙酸(NAA)0.05mg/L；蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8；按照上述配方配制后消毒待用；3)外植體預(yù)處理、消毒先用去污粉清洗5min，后用10％NaClO浸泡10min，用無菌水沖洗2～3次后移到超凈工作臺(tái)上用70％酒精消毒30Sec，后用0.1％Hgcl2消毒8min，用無菌水沖洗3～4次，浸在蒸餾水中備用。
4)初代培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上，將消過毒的外植體，即帶腋芽莖段切成1cm左右的片段，接種于初代培養(yǎng)基中，置于光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃條件下培養(yǎng)；5)增殖培養(yǎng)將初代培養(yǎng)的叢生芽，在超凈工作臺(tái)上切成小段，接種在增殖培養(yǎng)基上，繼續(xù)擴(kuò)大繁殖；6)生根培養(yǎng)擴(kuò)繁后，挑選生長健壯的叢生芽，接種在生根培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)30天左右生根；7)練苗及出瓶馴化將以叢生芽已生根的培養(yǎng)瓶蓋打開，繼續(xù)在培養(yǎng)室練苗3天，然后，取出生根苗，沖洗凈根部，移植到裝有已消毒土壤的育苗容器中，置在溫室或大棚中，開始保持每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃，適應(yīng)后，逐漸調(diào)整光照、溫度條件接近室外，經(jīng)常通風(fēng)，按時(shí)澆水，每2天～3天一次，保持土壤濕潤至生長到苗高20cm左右，為組培成品苗出圃移栽。
采用本發(fā)明的葛藤組培快繁苗木生產(chǎn)方法，可以使每株葛藤一年內(nèi)，繁育成上百萬株脫毒成品苗木，大大提高了美國克株的繁育苗木效率。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
按照本發(fā)明的技術(shù)方案4.1用葛藤的外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁育生產(chǎn)苗木，包括利用葛藤的外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)脫毒苗木生產(chǎn)。
4.2葛藤的組織培養(yǎng)快速繁育生產(chǎn)苗木和組織培養(yǎng)脫毒苗木生產(chǎn)采用(1)外植體的選擇；(2)培養(yǎng)基的制備；(3)外植體預(yù)處理、消毒；(4)初代培養(yǎng)；(6)增殖培養(yǎng)；(7)生根培養(yǎng)；(8)練苗及出瓶馴化。
培養(yǎng)條件為接種后置于光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃。
4.3葛藤的組織培養(yǎng)快速繁育生產(chǎn)苗木和組織培養(yǎng)脫毒苗木生產(chǎn)采用的培養(yǎng)基配方為初代培養(yǎng)基MS+BA(6-芐基腺嘌呤)0.5mg/L+NAA(萘乙酸)0.3mg/L；蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8。
增殖培養(yǎng)基MS+BA(6-芐基腺嘌呤)0.5-1.0mg/L+NAA(萘乙酸)0.1-0.3mg/L；最佳配方為MS+BA(6-芐基腺嘌呤)1.0mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L，蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8。
生根培養(yǎng)基MS+NAA(萘乙酸)0.05mg/L；蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8。
4.4實(shí)施例4.4.1外植體的選擇采集當(dāng)年生葛藤的幼莖，切成1cm～2cm長帶芽的小段。
4.4.2培養(yǎng)基的制備按照配方配制后消毒。
4.4.3外植體預(yù)處理，消毒先用去污粉清洗5min，后用10％NaClO浸泡10min，用無菌水沖洗2～3次后移到超凈工作臺(tái)上用70％酒精消毒30Sec，后用0.1％Hgcl2消毒8min，用無菌水沖洗3～4次，浸在蒸餾水中備用。
4.4.4初代培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上，將消過毒的外植體(帶腋芽莖段)切成1cm左右的片段，接種于初代培養(yǎng)基中，置于光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃條件下培養(yǎng)。
4.4.5增殖培養(yǎng)將初代培養(yǎng)的叢生芽，在超凈工作臺(tái)上切成1cm左右小段，接種在增殖培養(yǎng)基上，繼續(xù)擴(kuò)大繁殖。
4.4.6生根培養(yǎng)擴(kuò)繁后，挑選生長健壯、長3cm左右的叢生芽，接種在生根培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)30天左右生根。
4.4.7練苗及出瓶馴化將以叢生芽已生根的培養(yǎng)瓶蓋打開，繼續(xù)在培養(yǎng)室練苗3天，然后，取出生根苗，沖洗凈根部，移植到裝有已消毒土壤的育苗容器中，置在溫室或大棚中，開始保持每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃，適應(yīng)后，逐漸調(diào)整光照、溫度條件接近室外，經(jīng)常通風(fēng)，按時(shí)澆水，每2天～3天一次，保持土壤濕潤至生長到苗高20cm左右，為組培成品苗出圃移栽。
本實(shí)施例可以使每株葛藤在工廠化育苗條件下，一年內(nèi)繁育成上百萬株成品和脫毒苗木，大大提高葛藤的繁育苗木效率。
權(quán)利要求
1.葛藤(美國葛藤(pueraria montana Merr)、葛藤(pueraria lobata Ohwi)、粉葛(pueraria lobata Ohwi var.thomsoni van der Maesen))的組培快繁苗木生產(chǎn)方法，利用葛藤的外植體進(jìn)行組培快繁苗木生產(chǎn)，其特征在于，在MS基本培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，添加有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)、生長素類物質(zhì)，來誘導(dǎo)叢生芽分化以達(dá)到快速增殖、再誘導(dǎo)叢生芽生根、最后出瓶馴化的整個(gè)繁殖過程；其具體操作步驟為1)外植體的選擇采集當(dāng)年生葛藤的幼莖，將其切成帶芽小段；2)培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，并分為初代培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；其配方分別為初代培養(yǎng)基MS+6-芐基腺嘌呤(BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L；蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8；增殖培養(yǎng)基MS+6-芐基腺嘌呤(BA)(0.5-1.0)mg/L+萘乙酸(NAA)(0.1-0.3)mg/L，蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8；生根培養(yǎng)基MS+萘乙酸(NAA)0.05mg/L；蔗糖濃度為3％，瓊脂濃度0.55％，PH值為5.8；按照上述配方配制后消毒后待用；3)外植體預(yù)處理、消毒用去污粉清洗后用0.1％的HgCl消毒8分鐘，再用無菌水沖洗3～4次，浸在蒸餾水中備用；4)初代培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上，將消過毒的外植體，即帶腋芽莖段切成1cm左右的片段，接種于初代培養(yǎng)基中，置于光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃條件下培養(yǎng)；5)增殖培養(yǎng)將初代培養(yǎng)的叢生芽，在超凈工作臺(tái)上切成小段，接種在增殖培養(yǎng)基上，繼續(xù)擴(kuò)大繁殖；6)生根培養(yǎng)擴(kuò)繁后，挑選生長健壯的叢生芽，接種在生根培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)室培養(yǎng)，每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)30天左右生根；7)練苗及出瓶馴化將以叢生芽已生根的培養(yǎng)瓶蓋打開，繼續(xù)在培養(yǎng)室練苗3天，然后，取出生根苗，沖洗凈根部，移植到裝有已消毒土壤的育苗容器中，置在溫室或大棚中，開始保持每日光照10h～12h，溫度為25℃±2℃，適應(yīng)后，逐漸調(diào)整光照、溫度條件接近室外，經(jīng)常通風(fēng)，按時(shí)澆水，每2～3天一次，保持土壤濕潤至生長到苗高20cm左右，為組培成品苗出圃移栽。
全文摘要
本發(fā)明公開了葛藤[美國葛藤(pueraria montanaMerr)、葛藤(pueraria lobata Ohwi)、粉葛(pueraria lobata Ohwi var.thomsoni van der Maesen)]快捷且增殖速度快的無性繁殖和脫毒苗木生產(chǎn)方法，該方法利用葛藤的莖段為外植體，進(jìn)行組織培養(yǎng)脫毒苗木生產(chǎn)，在MS基本培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，添加有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)、生長素類物質(zhì)，來誘導(dǎo)叢生芽分化以達(dá)到快速增殖、再誘導(dǎo)叢生芽生根、最后出瓶馴化的整個(gè)繁殖過程；其操作流程為1)外植體的選擇；2)培養(yǎng)基的制備；3)外植體預(yù)處理，消毒；4)初代培養(yǎng)；5)增殖培養(yǎng)；6)誘導(dǎo)生根；7)練苗及出瓶馴化。其培養(yǎng)條件為每日光照10h～12h；溫度為25℃±2℃。本發(fā)明可以使每株葛藤在工廠化育苗條件下，一年內(nèi)繁育成上百萬株成品和脫毒苗木，大大提高葛藤的繁育苗木效率。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1899027SQ0213950
公開日2007年1月24日 申請日期2002年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月4日
發(fā)明者朱首軍, 郭軍戰(zhàn), 謝明, 陳鐵山, 武蘇里, 謝曉軍, 彭少兵 申請人:楊凌潤地生態(tài)科技有限公司, 西北農(nóng)林科技大學(xué)