專(zhuān)利名稱(chēng)：生產(chǎn)解磷解鉀菌的復(fù)合培養(yǎng)基及其液體深層發(fā)酵生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)解磷解鉀菌的復(fù)合培養(yǎng)基及其液體深層發(fā)酵生產(chǎn)方法，屬于微生物肥料生產(chǎn)領(lǐng)域。
微生物肥料質(zhì)量好壞關(guān)鍵在于兩個(gè)方面，一是菌種的質(zhì)量，包括菌種的固氮能力、解磷能力、解鉀能力、對(duì)惡劣環(huán)境的適應(yīng)能力等；二是活菌的數(shù)量，包括菌種之間的數(shù)量比例、是否相互拮抗、保存期間活菌數(shù)量的變化等，而這兩個(gè)方面與菌肥生產(chǎn)時(shí)所采用的培養(yǎng)基和生產(chǎn)方法是密切相關(guān)的?，F(xiàn)在公開(kāi)的微生物肥料制作方法中，一般采用各類(lèi)菌種分別培養(yǎng)再混合的生產(chǎn)方式，這種方法操作繁瑣，容易引起雜菌污染，難以保障產(chǎn)品的質(zhì)量；還有的采用多菌種混合發(fā)酵的方式，但因?yàn)椴捎靡话愕呐囵B(yǎng)基，難以充分保障各類(lèi)菌種各自的營(yíng)養(yǎng)需求，因此發(fā)酵生產(chǎn)出來(lái)的產(chǎn)品中雖然總菌數(shù)達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)，但是各類(lèi)菌種數(shù)量不一，比例不協(xié)調(diào)，不能把各類(lèi)活性菌種的生理作用完全體現(xiàn)出來(lái)；另外還有一類(lèi)采用的是固體發(fā)酵的方式，這種方法生產(chǎn)出來(lái)的產(chǎn)品活菌數(shù)普遍不高，或者說(shuō)僅僅在理論上達(dá)到了預(yù)期的數(shù)量。
本發(fā)明的目的在于提供一種適合生產(chǎn)解磷解鉀菌的復(fù)合培養(yǎng)基。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種培養(yǎng)解磷解鉀菌的液體深層發(fā)酵生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的復(fù)合培養(yǎng)基由天然物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽和復(fù)合維生素組成，特別適合于磷細(xì)菌和鉀細(xì)菌的混合培養(yǎng)。培養(yǎng)基的主要成份為玉米糖化液 15％紅糖 2％蜂蜜 0.5％蠶繭粉 0.5％ 卵磷脂0.02％ 鉀長(zhǎng)石或云母 0.1％KH2PO40.2％ CaCO30.25％ MgSO40.02％FeSO4·7H2O 10PPM MnSO4·H2O 5PPM 復(fù)合維生素 10PPM本發(fā)明所采用的菌種由中國(guó)普通微生物菌種保藏中心提供，一支是解磷菌，編號(hào)AS 1.220，一支是巨大芽孢桿菌，編號(hào)AS 1.217，革蘭氏染色陽(yáng)性，產(chǎn)生橢圓形芽孢，在含有卵磷脂的瓊脂平板上培養(yǎng)可以觀察到明顯的溶磷圈；另外一支是膠質(zhì)芽孢桿菌，編號(hào)AS 1.231，革蘭氏染色陰性，有莢膜，有橢圓形芽孢。這三支菌種在無(wú)氮培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)良好，都具有一定的固氮作用。
本發(fā)明的發(fā)酵工藝采用分段控制法，通過(guò)控制發(fā)酵過(guò)程中的通風(fēng)量、攪拌速度和培養(yǎng)溫度來(lái)促進(jìn)菌體生長(zhǎng)，加強(qiáng)芽孢的同步生成率。發(fā)酵前期和后期通風(fēng)量小，發(fā)酵中期通風(fēng)量大，發(fā)酵后期提高培養(yǎng)溫度。
發(fā)酵生產(chǎn)前期，菌種在新的營(yíng)養(yǎng)條件下進(jìn)行自我調(diào)整，宏觀上主要體現(xiàn)在菌體體積大小的變化，而菌體數(shù)量的變化不明顯，菌體生長(zhǎng)對(duì)氧的需求量不大，所以這段時(shí)間里可以減少通風(fēng)量；發(fā)酵中期，菌體生長(zhǎng)旺盛，數(shù)量以幾何級(jí)數(shù)增長(zhǎng)，這時(shí)的菌體對(duì)氧的需求量大，需要加大通風(fēng)量來(lái)進(jìn)行供氧，同時(shí)可以提高攪拌的轉(zhuǎn)速，以提高溶氧水平和加快營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流動(dòng)。發(fā)酵后期，菌數(shù)已經(jīng)基本趨于穩(wěn)定，芽孢開(kāi)始大量形成，這個(gè)時(shí)候可以逐漸減少通風(fēng)量，并且同時(shí)提高培養(yǎng)溫度到45～50℃，這樣有利于菌體內(nèi)芽孢的同步形成。實(shí)踐證明，以這種分段控制發(fā)酵生產(chǎn)出來(lái)的磷細(xì)菌和鉀細(xì)菌的芽孢生成率在98％以上，從而使得菌肥的有效期大大延長(zhǎng)。
本發(fā)明的復(fù)合培養(yǎng)基和液體深層發(fā)酵生產(chǎn)方法是在多年的菌肥生產(chǎn)實(shí)踐中總結(jié)出來(lái)的，經(jīng)過(guò)了反復(fù)的實(shí)踐證明優(yōu)于一般的普通生產(chǎn)培養(yǎng)基和生產(chǎn)方法，其特點(diǎn)在于1.培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)全面，搭配合理，菌種的生長(zhǎng)速度快，一般28～32小時(shí)左右就能完成發(fā)酵，每毫升發(fā)酵液中的活菌數(shù)在25億以上；2.在發(fā)酵液過(guò)程中磷細(xì)菌和鉀細(xì)菌均能穩(wěn)定生長(zhǎng)，比例協(xié)調(diào)，如磷細(xì)菌和鉀細(xì)菌按數(shù)量比1∶2接種，則生產(chǎn)出來(lái)的菌肥產(chǎn)品菌數(shù)比一般穩(wěn)定在1∶1.5左右；3.發(fā)酵在密閉環(huán)境中進(jìn)行，省時(shí)省力，杜絕了雜菌污染，菌肥的質(zhì)量得到了保障；4.實(shí)現(xiàn)了芽孢生成的同步化，芽孢生成率高，從而使菌肥產(chǎn)品有更長(zhǎng)的保存期。
下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明1.制備玉米糖化液稱(chēng)取粉碎成80目的玉米粉150公斤，加入300公斤水中，升溫到65℃，加入糖化酶，保溫糖化3～5小時(shí)，至糖化液中滴加碘液不顯藍(lán)色為終點(diǎn)。糖化完全后過(guò)濾得糖化液。
2.發(fā)酵生產(chǎn)將制好的玉米糖化液轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中，加入紅糖20公斤、蜂蜜5公斤、蠶繭粉5公斤、卵磷脂0.2公斤、鉀長(zhǎng)石細(xì)粉1公斤、KH2PO42公斤、CaCO32.5公斤、MgSO40.2公斤、FeSO4·7H2O 10克、MnSO4·H2O 5克、復(fù)合維生素10克，升溫至110℃高壓滅菌，再冷卻至30℃，接入菌種。接種量為5％～8％，菌種中磷細(xì)菌和鉀細(xì)菌數(shù)量比例控制為1∶2左右。發(fā)酵前6～8小時(shí)通風(fēng)量控制在1∶0.3～0.35；6～8小時(shí)以后，菌體逐步進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，對(duì)氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求旺盛，這段時(shí)間需要加大通風(fēng)量，以加速溶氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流動(dòng)，通風(fēng)量大小可以根據(jù)發(fā)酵生產(chǎn)而定，一般在1∶0.5～0.65之間，也可以根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際情況變化。發(fā)酵生產(chǎn)的后期，芽孢開(kāi)始形成，這時(shí)要減少通風(fēng)量，這樣有利于芽孢的形成。培養(yǎng)溫度提高到45℃，以促使芽孢同步形成。一般培養(yǎng)30小時(shí)左右，發(fā)酵產(chǎn)品經(jīng)鏡檢合格，發(fā)酵結(jié)束。
3.將檢驗(yàn)合格的發(fā)酵產(chǎn)品經(jīng)無(wú)菌灌裝，就得到了液體菌肥；如將發(fā)酵液用無(wú)菌的草炭吸附，就得到了固體菌肥。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)解磷解鉀菌的復(fù)合培養(yǎng)基及其液體深層發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于復(fù)合培養(yǎng)基的主要成份為玉米糖化液 15％ 紅糖 2％蜂蜜 0.5％蠶繭粉 0.5％ 卵磷脂0.02％ 鉀長(zhǎng)石或云母 0.1％KH2PO40.2％ CaCO30.25％ MgSO40.02％FeSO4·7H2O 10PPM MnSO4·H2O 5PPM 復(fù)合維生素 10PPM
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體深層發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于采用分段控制法，通過(guò)控制發(fā)酵過(guò)程中的通風(fēng)量、攪拌速度和培養(yǎng)溫度來(lái)促進(jìn)菌體生長(zhǎng)，加強(qiáng)芽孢的同步生成率，發(fā)酵前期和后期通風(fēng)量小，發(fā)酵中期通風(fēng)量大，發(fā)酵后期提高培養(yǎng)溫度。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的解磷解鉀菌，其特征在于本發(fā)明所采用的菌種由中國(guó)普通微生物菌種保藏中心提供，一支是解磷菌，編號(hào)分別為AS 1.220；一支是巨大芽孢桿菌，編號(hào)AS 1.217；另外一支是膠質(zhì)芽孢桿菌，編號(hào)AS 1.231。
全文摘要
一種生產(chǎn)解磷解鉀菌的復(fù)合培養(yǎng)基及其液體深層發(fā)酵生產(chǎn)方法，復(fù)合培養(yǎng)基由玉米糖化液、紅糖、蜂蜜、蠶繭粉、卵磷脂、鉀長(zhǎng)石、多種無(wú)機(jī)鹽和復(fù)合維生素組成，發(fā)酵工藝采用分段控制法，通過(guò)控制發(fā)酵過(guò)程中的通風(fēng)量、攪拌速度和培養(yǎng)溫度來(lái)促進(jìn)菌體生長(zhǎng)，加強(qiáng)芽孢的同步生成率，整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程省時(shí)省力，杜絕了雜菌污染，特別適合于磷細(xì)菌和鉀細(xì)菌的混合培養(yǎng)。生產(chǎn)出來(lái)的菌肥產(chǎn)品活菌數(shù)量多，芽孢生成率高，產(chǎn)品的保存時(shí)間更長(zhǎng)。
文檔編號(hào)C05F11/08GK1641016SQ20041000218
公開(kāi)日2005年7月20日 申請(qǐng)日期2004年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月14日
發(fā)明者郭偉光 申請(qǐng)人:郭偉光