專利名稱：：施用來自諾麗果的生物活性化合物的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：熟知的方法通過含有二氧化硅和CH2Cl2-MeOH成分的氣相色譜來完成。在本發(fā)明的某些實施方案中，對甲醇級份進一步分級以獲得次級甲醇級份。在某些實施方案中，對己垸級份進一步分級以獲得次級己烷級份。一種或多種葉提取物，包括初級葉提取物、己烷級份、甲醇級份或任何二級己垸或甲醇級份，可以與諾麗果植物果實的果汁合并，以獲得葉漿(獲得果汁的方法將在本文中進一步描述)。在某些實施方案中，葉漿被包裝和冷凍以備運輸；在其它實施方案中，它被進一步摻入到本文解釋的營養(yǎng)藥物中。諾麗果果實的加工本發(fā)明的某些實施方案包括含有諾麗果植物的果汁的組合物。由于諾麗果果實實際上是不可食的，果實必須被加工以使它對于人類消費來說變得可口并包含在本發(fā)明的組合物中。加工的諾麗果果汁可以通過將成熟的諾麗果果實的果汁和果肉與種子和果皮分開，從果汁過濾出果肉，并包裝果汁來制備?；蛘?，不包裝果汁，而是將果汁作為成分立即包含在另一種產(chǎn)品中，冷凍或巴氏消毒。在本發(fā)明的某些實施方案中，果汁和果肉可以在勻漿混合器中搗成泥，與其它成分混合。其它方法包括將果實和果汁冷凍干燥。在生產(chǎn)最終的果汁產(chǎn)品期間，可以復(fù)溶果實和果汁。還有其它的方法可以包括在碾磨前將果實和果汁空氣千燥。在目前優(yōu)選的生產(chǎn)諾麗果果汁的方法中，果實用手摘取或用機械設(shè)備摘取。果實當(dāng)直徑至少為1英寸(2-3cm)到最多12英寸(24-36cm)時可以被收獲。果實的顏色優(yōu)選為暗綠色到黃綠色直到白色，以及中間的過渡顏色。果實在收集后和進行任何加工進行之前被徹底清洗。允許果實成熟或熟化0到14天，但優(yōu)選為2到3天。通過將果實放置在設(shè)備上使得果實不與地面接觸來成熟或熟化果實。在熟化過程中，果實優(yōu)選被蓋上布或網(wǎng)狀材料，但是果實也可以不覆蓋進行熟化。當(dāng)準(zhǔn)備好進一步加工時，果實顏色變淺，例如淺綠色、淺黃色、白色或半透明的顏色。檢查腐敗或過綠和過硬的果實。將腐敗的和硬的綠色果實與合格的果實分開。成熟和熟化的果實優(yōu)選放置在帶有塑料襯里的容器中，用于進一步加工和運輸。熟化的果實的容器可以放置0到30天，但優(yōu)選果實容器在加工前放置7到14天。在進一步加工前容器可以任選儲存在冷藏條件下。從儲存容器中取出果實，通過手動或機械分離器進行加工。將種子和果皮與果汁和果肉分開。11果汁和果肉可以包裝在容器中儲存和運輸。或者，果汁和果肉可以被立即加工成最終的果汁產(chǎn)品。容器可以儲存在冷藏、冷凍或室溫條件下。諾麗果果汁和果肉優(yōu)選在勻漿混合器中混合，然后它們可以與其它成分混合，例如調(diào)味品、甜味劑、營養(yǎng)成分、植物性藥材和著色劑。完成的果汁產(chǎn)品優(yōu)選被加熱并進行巴氏消毒，最低溫度為1S1。F(83°C)或更高直到212°F(100°C)。另一種生產(chǎn)的產(chǎn)品是濃縮或稀釋形式的諾麗果果泥和果泥汁。果泥基本上是與種子分開的果肉，與本文描述的果汁產(chǎn)品不同。將產(chǎn)品裝在和密封在塑料、玻璃或其它能夠經(jīng)受加工溫度的適合材料的最終容器中。將容器維持在裝入溫度下，或可以快速冷卻，然后放置在運輸容器中。運輸容器優(yōu)選用材料包裹，以維持或控制最終容器中的產(chǎn)品溫度的方式。可以通過過濾設(shè)備將果肉與果汁分開來對果汁和果肉進行進一步加工。過濾設(shè)備優(yōu)選由下述構(gòu)成，但不限于此離心傾析器，大小從l微米到2000微米、更優(yōu)選少于500微米的網(wǎng)式過濾器，壓濾機，反滲透過濾裝置和任何其它的標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)化過濾裝置。過濾器運行壓力優(yōu)選在0.1psig直到大約1000psig的范圍內(nèi)。流速優(yōu)選在0.1g.p.m.直到1000g.p.m.的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在5到50g.p.m之間。濕的果肉被清洗和過濾至少一次和最多IO次，以從果肉中除去任何果汁。獲得的果肉提取物通常具有重量的10%到40%的纖維含量。獲得的果肉提取物優(yōu)選在最低181°F(83°C)的溫度下巴氏消毒，然后置于滾筒中進行進一步加工，或制成高纖維產(chǎn)品。諾麗果種子的加工本發(fā)明的某些諾麗果組合物含有來自諾麗果植物的種子。在本發(fā)明的某些實施方案中，諾麗果種子通過將它們在實驗室磨機中粉碎成種子粉末來進行加工。在某些實施方案中，種子粉末不進行處理。在某些實施方案中，通過將粉末在己垸中浸泡和攪拌對種子粉末進一步脫脂，優(yōu)選在室溫下進行1小時(藥物己垸-比率為1:10)。在某些實施方案中，然后將殘余物在真空下過濾，再次脫脂(優(yōu)選在同樣的條件下進行30分鐘)，然后再次在真空下過濾。粉末可以在通風(fēng)柜中放置過夜以除去殘余的己烷。此外，在本發(fā)明的某些實施方案中，對脫脂的和/或未處理的粉末進行抽提，優(yōu)選使用50°/。乙醇(m/m)在室溫進行24小時，藥物溶劑比率為1:2。諾麗果油的加工本發(fā)明的某些實施方案可以包含從諾麗果植物提取的油。提取和加工油的方法描述在1999年8月27日提交的美國專利申請序號09/384,785中，并在2001年4月10日發(fā)表為專利No.6,214,351，在此引為參考。諾麗果油通常含有幾種不同的脂肪酸的甘油三酯的混合物，例如棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸脂肪酸，以及以較低量存在的其它脂肪酸。此外，油優(yōu)選含有抗氧化劑以抑制油的腐敗。優(yōu)選使用常規(guī)的食品級抗氧化劑。組合物及其應(yīng)用本發(fā)明涉及通過給個體施用來自植物諾麗果的各種不同的生物活性化合物而提供各種健康益處的方法和組合物。本發(fā)明涉及使用下面的一種或多種諾麗葉提取物，諾麗葉汁，禾口/或烘烤的葉片，用于抑制HMG-CoA還原酶，磷酸二酯酶(3禾口4)PDE3禾口PDE4，5-脂氧合酶(LOX)禾卩15-LOX,黃嘌呤氧化酶(XO),7-氨基丁酸(GABA)和第二位最常見的人類皮膚癌細胞系的生長。更具體來說，本發(fā)明涉及施用下列的一種或多種焦脫鎂葉綠酸a、脫鎂葉綠酸a、Purpin7和/或脫鎂葉綠酸葉綠醇酯，它們都可以來自于諾麗葉提取物、諾麗葉汁和/或烘烤的葉片。此外，上述制劑導(dǎo)致疼痛和炎癥的緩解。本發(fā)明的組合物可以含有許多諾麗果組分中的任何組分，例如13葉提取物、葉汁、葉漿、果汁、果肉、果肉提取物、果泥、種子(脫脂的或未處理的)和油。本發(fā)明的組合物也可以包含各種其它成分。其它成分的例子包括但不限于人工調(diào)味品，其它的天然果汁或果汁濃縮物例如天然葡萄汁濃縮物或天然藍莓汁濃縮物，載體成分，以及將在本文中進一步說明的其它成分。任何含有來自諾麗果葉片的葉提取物的組合物，可以含有下面的一種或多種原始葉提取物、己烷級份、甲醇級份、次級己烷和甲醇級份、葉漿或營養(yǎng)藥物葉片產(chǎn)品。在本發(fā)明的某些實施方案中，諾麗果組分的活性成分或化合物可以使用本
技術(shù)領(lǐng)域：
通常了解的各種方法和工藝提取出來。例如，活性成分可以使用醇或基于醇的溶液例如甲醇、乙醇和乙酸乙酯以及其它基于醇的衍生物，使用本
技術(shù)領(lǐng)域：
已知的方法分離或提取出來。這些活性成分或化合物可以被分離并進一步分級或彼此分離成它們的組成部分。優(yōu)選對化合物進行分離或分級，以鑒定或分離任何能夠幫助預(yù)防疾病、增進健康或執(zhí)行其它類似功能的活性成分。此外，可以將化合物分級或分離成它們的組成部分，以鑒定和分離任何能夠提供剛剛提到的同樣的健康益處功能的關(guān)鍵性或決定性的相互作用。諾麗果的任何組分和組合物都可以進一步慘入到營養(yǎng)藥物產(chǎn)品中(同樣，"營養(yǎng)藥物"在本文中是指任何被設(shè)計用于改善活的生物體例如人類或哺乳動物的健康的藥物或產(chǎn)品)。營養(yǎng)藥物產(chǎn)品的例子可以包括但不限于靜脈產(chǎn)品，局部皮膚產(chǎn)品，傷口愈合產(chǎn)品，皮膚護理產(chǎn)品，頭發(fā)護理產(chǎn)品，美容和化妝產(chǎn)品(例如化妝品、化妝水等)，燒傷愈合和治療產(chǎn)品，急救產(chǎn)品，抗細菌產(chǎn)品，嘴唇油膏和軟膏，骨愈合和治療產(chǎn)品，嫩肉產(chǎn)品、抗炎產(chǎn)品、滴眼液、除臭劑、抗真菌產(chǎn)品、關(guān)節(jié)炎治療產(chǎn)品、肌肉松弛劑、牙膏，以及本文中可能進一步討論的其它各種營養(yǎng)藥物和其它產(chǎn)品。本發(fā)明的組合物可以配制成多種實施方案中的任何方式，包括口服組合物、局部皮膚溶液、靜脈溶液以及其它的產(chǎn)品或組合物。口服組合物可以采用例如片劑、錠劑、水性或油性懸浮液、可分散的粉末或顆粒、乳液、糖漿或酏劑的形式。打算口服使用的組合物可以按照本
技術(shù)領(lǐng)域：
中任何已知的方法來制備，這樣的組合物可以含有一種或多種試劑，例如甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑。它們也可以含有一種或多種其它的成分例如維生素和礦物質(zhì)等?？梢灾圃炱瑒?，以包含一種或多種諾麗果組分，與無毒、適合用于制造片劑的可藥用賦形劑相混合。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑、成粒和崩解劑、粘合劑以及潤滑劑。片劑可以是無包衣的，或者它們可以通過已知的技術(shù)包衣，以延緩在胃腸道中的崩解和吸收，從而在較長時期內(nèi)提供持續(xù)的作用。例如，可以使用延時材料例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯?？梢灾圃焖詰腋∫海院兄Z麗果組分，與適合用于制造水性懸浮液的賦形劑相混合。這樣的賦形劑的例子包括但不限于懸浮劑例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍樹膠和阿拉伯樹膠；分散劑或潤濕劑例如天然存在的磷酯例如卵磷脂，或環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物例如十七烯基氧基鯨蠟醇，或環(huán)氧乙垸與從脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的縮合產(chǎn)物例如聚氧乙烯失水山梨糖醇(sorbitor)單油酸酯，或環(huán)氧乙垸與從脂肪酸和己糖醇酐衍生的部分酯的縮合產(chǎn)物例如聚乙烯山梨糖醇酐單硬脂酸酯。典型的甜味劑可以包括但不限于從玉米、甜菜、甘蔗、土豆、木薯或其它含有淀粉的、可以化學(xué)或酶法轉(zhuǎn)化為結(jié)晶塊、粉末和/或糖漿的來源衍生的天然糖。此外，甜味劑可以包括人工的或高強度甜味劑，其中某些可以包括阿斯巴甜、三氯半乳蔗糖、甜菊、糖精等。甜味劑的濃度可以為諾麗果組合物重量的0到50%之間，更優(yōu)選在重量的大約1%到5%之間。典型的調(diào)味劑可以包括但不限于人工的或天然的對可口性有貢獻的調(diào)味成分。調(diào)味料的濃度可以在例如諾麗果組合物重量的0到15%的范圍內(nèi)。著色劑可以包括食品級人工或天然著色劑，濃度在諾麗果組合物重量的0到10%的范圍內(nèi)。典型的營養(yǎng)成分可以包括維生素、礦物質(zhì)、微量元素、草藥、植物提取物、生物活性化學(xué)物質(zhì)以及化合物，濃度為諾麗果組合物重量的0到10%。維生素的例子包括但不限于維生素A、^到Bi2、C、D、E、葉酸、泛酸、生物素等。礦物質(zhì)和微量元素的例子包括但不限于鈣、鉻、銅、鈷、硼、鎂、鐵、硒、錳、鉬、鉀、碘、鋅、磷等。草藥和植物提取物可以包括但不限于苜蓿草、蜜蜂花粉、小球藻粉末、當(dāng)歸粉末、紫錐菊根、銀杏葉提取物、馬尾草、巴戟天、香菇、螺旋藻、葡萄籽提取物等。典型的生物活性化學(xué)物質(zhì)可以包括但不限于咖啡因、麻黃堿、L-肉毒堿、肌酸，番茄紅素等。在局部皮膚產(chǎn)品中使用的成分可以包括任何吸收到哺乳動物體內(nèi)安全的成分，可以以各種形式存在，例如凝膠、洗液、霜劑、軟膏等，每種含有一種或多種載體劑。摻入到全身性(例如靜脈)施用的組合物中的成分或載體劑也可以包含本
技術(shù)領(lǐng)域：
中已知的任何成分或載體。在一個示例性實施方案中，本發(fā)明的諾麗果組合物含有一種或多種加工過的諾麗果組分，其存在量在重量的大約0.01到100重量％之間，優(yōu)選在重量的大約0.01%到95%之間。制劑的幾個實施方案包含在2001年4月lO日發(fā)布的專利No.6,214,351中。但是，這些組合物的目的僅僅是示例性的，因為本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通專業(yè)人員將會認識到含有加工過的諾麗果產(chǎn)品的其它制劑或組合物。在另一個示例性的實施方案中，內(nèi)服組合物含有的成分有存在量為重量的大約0.1-80%之間的加工過的諾麗果果汁或果泥汁，存在量為重量的大約0.1-20%之間的加工過的諾麗果油，以及存在量為重量的大約20-90°/。之間的載體介質(zhì)。諾麗果果泥汁或果汁也可以與以同樣濃度存在的加工過的諾麗果膳食纖維產(chǎn)品配制在一起。實施例下面的實施例說明了本發(fā)明的一些實施方案。這些實施例不是為了以任何方式進行限制，而僅僅是說明本發(fā)明的諾麗果組合物的某些實施方案的益處、優(yōu)點和治療效果。實施例1、諾麗果的葉汁在一個實施例中，研究了諾麗果的葉汁對5-LOX和15-LOX、HMG-CoA、PDE3和PDE4、XO和GABA的作用。諾麗果的葉汁以各種濃度的劑量給兔、大鼠、人和牛施用。在兔和人中分別觀察到了對5-LOX禾n15-LOX的抑制。在大鼠中觀察到了對HMG-CoA還原酶的抑制。在人類中觀察到了對PDE的抑制。在牛中觀察到了對黃嘌吟氧化酶的抑制，在大鼠中觀察到了對GABA的抑制。下面的表對這些研究的結(jié)果進行了匯總。表1，實施例1試驗動物樣品數(shù)量抑制％標(biāo)準(zhǔn)偏差HMG-CoA還原酶大鼠210%2925%521%-3脂氧合酶15-LOX兔210%11125%10221%87脂氧合酶5-LOX人類210%10117<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>表5<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表6<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實施例3在這個接下來的實施例中，諾麗果的葉汁和葉提取物顯示出明顯抑制第二位最常見類型的人類皮膚癌的生長。在本實施例中，基于活細胞引起阿爾瑪藍(alamarBlue)從無熒光的藍色到還原的有熒光的紅色形式的變化的能力，進行分析以檢測細胞增殖的變化。使用從阿爾瑪藍反應(yīng)獲得的結(jié)果，可以對細胞增殖進行定量，并可以檢測活細胞的代謝活性。測試化合物包括諾麗果的葉提取物、葉汁和烘烤過的葉片，測試了它們對人類表皮樣癌細胞系A(chǔ)431增殖的影響，通過連續(xù)的10倍稀釋液，分析濃度從0.01到100jug/ml或從0.0001%到1%。概括來說，發(fā)現(xiàn)了濃度在10到100pg/ml之間的葉提取物以及在0.1%至1」1%之間的葉汁，相對于介質(zhì)處理的對照來說在腫瘤細胞系中引起了顯著的生長抑制(小于生長的50%)，但烘烤過的葉片沒有能夠顯示出明顯的效果(0.01-100/xg/ml)。對于同時測試的標(biāo)準(zhǔn)參比藥劑絲裂霉素來說，在<10p.M下也觀察到了顯著的抑制活性。因此，通過非線性回歸分析計算了估算的LQo(50。/。抑制濃度)、TGI(總生長抑制)和LC5Q(50%致死濃度)的半定量測定值。下面描述在分析中使用的材料、設(shè)備和方法，以及匯總結(jié)果的表。測試物質(zhì)和濃度。諾麗果的葉提取物、葉汁和烘烤的葉片由TahitianNoniInternational,Inc.提供，用于體外抗腫瘤研究。將諾麗果化合物溶解在無菌蒸餾水中，然后用無菌蒸餾水稀釋以獲得起始工作溶液，葉提取物和烘烤過的葉片為10000、1000、100、10和l/xg/mL葉汁為100、10、1、0.1和0.01%。在測試中，在培養(yǎng)基中進行100倍稀釋，獲得最終分析濃度，分別為100、10、1、0.1和0.01/xg/ml，以及l(fā)、0.1、0.01、0.001禾口0.0001%。細胞系和培養(yǎng)基。腫瘤細胞系A(chǔ)431(人類表皮樣癌)從美國典型培養(yǎng)物保藏中心獲得(ATCCCRL-1555)，在5%C02的空氣氣氛下在37°C下培養(yǎng)。使用的培養(yǎng)基含有90%的Dulbecco's修改的Eagle's培養(yǎng)基，10%胎牛血清，并添加1%的抗生素-抗真菌劑?；瘜W(xué)物質(zhì)。在分析中使用了下列化學(xué)物質(zhì)阿爾瑪藍(Biosource,USA)，抗生素-抗真菌劑(GIBCOBRL，USA)，Dulbecco's修改的Eagle's培養(yǎng)基(GIBCOBRL,USA)，胎牛血清(HyClone,USA)，以及絲裂霉素(Kyowa,日本)。皿。在分析中使用了下列設(shè)備C02培養(yǎng)箱(FonnaScientificInc.,21USA)，離心機5810R(Eppendorf，德國)，血細胞計數(shù)器(HausserScientificHorsham,USA)，倒置顯微鏡CK-40(Olympus,日本)，系統(tǒng)顯微鏡E-400(Nikon,日本)，SpectrafiuorPlus(Tecan，澳大利亞)，以及垂直平行流工作臺(TsaoHsin，R.O.C)。方法。評估了測試物質(zhì)的抗增殖性。100pl細胞懸浮液(大約3x103個細胞/孔)的等份試樣被放置在96孔微量滴定板中，在5%C02的氣氛下在37。C培養(yǎng)。24小時后，分別在每個孔中加入100pl生長培養(yǎng)基和2pl測試溶液、絲裂霉素或介質(zhì)(蒸餾水)，做兩份平行樣，繼續(xù)培養(yǎng)72小時。兩種測試化合物，葉提取物和烘烤過的葉片，在100、10、1、0.1和0.01pg/ml的濃度下評估。另一種化合物，葉汁，在l、0.1、0.01、0.001和0.0001%的濃度下評估。培養(yǎng)結(jié)束時，在每個孔中加入20pl卯％的阿爾瑪藍試劑，再溫育6小時后通過熒光強度檢測細胞存活性。使用SpectrafiuorPlus讀板器測量熒光強度，激發(fā)波長530nm，發(fā)射波長590nm。然后測定ICso、TGI禾口LC5o值。IC50(50%抑制濃度)是從0時開始，處理的細胞的數(shù)量或質(zhì)量到實驗結(jié)束時的增加僅僅為載體對照中相應(yīng)增加的50%時的測試化合物的濃度。TGI(總生長抑制)是在實驗結(jié)束時處理的細胞的數(shù)量或質(zhì)量與0時相等時的測試化合物的濃度。LC5。(50%致死濃度)是在實驗結(jié)束時處理的細胞的數(shù)量或質(zhì)量為0時的一半時的測試化合物的濃度。測量結(jié)果通過下面的公式進行計算PG(%)=100x(平均F湖,試-平均F0時)/(平均F對照—平均F0時)如果(平均F艱-平均F一)<0，那么PG(%)-100x(平均F測試-平均Fo吋)/(平均F。時-平均F空白)其中PG二生長百分率；平均F葉產(chǎn)就在細胞暴露于測試物質(zhì)之前的時刻還原阿爾瑪藍兩個測量的熒光強度平均值；平均F*1K=細胞暴露于測試物質(zhì)72小時后阿爾瑪藍的兩個測量的熒光強度平均值；平均F對,^沒有測試物質(zhì)的情況下溫育72小時后阿爾瑪藍兩個測量的熒光強度平均值；以及平均Fm-在不含細胞的培養(yǎng)基中溫育72小時后阿爾瑪藍兩個測量的熒光強度的平均值。相對于介質(zhì)處理的對照來說熒光強度減少50%或以上(20%)表明了顯著的細胞生長抑制、細胞抑制或細胞毒性活性，然后通過非線性回歸使用GraphPadPrism(GraphPadSoftware,USA)確定半定量的IC50、TGI禾卩LC50。結(jié)果。下面的表總結(jié)了分析的結(jié)果。諾麗果測試物質(zhì)對A43i皮膚腫瘤細胞生長的影響表7<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>表9測試物質(zhì)分析名稱空白0時介質(zhì)生長百分率濃度(ttM)1010.10.010.001絲裂霉素皮膚-100010097土035±87士382士3101±5相對于介質(zhì)處理的對照來說熒光強度減少50%或以上(20%)表明了顯著的生長抑制、細胞抑制或細胞毒性活性。用在表7-10中，下面的術(shù)語意味著空白雙份，在沒有細胞的培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天的時間后相對于d時的阿爾瑪藍平均熒光強度(被轉(zhuǎn)化和記錄為-100%)。0時雙份，就在細胞暴露于測試物質(zhì)之前培養(yǎng)基中阿爾瑪藍的平均熒光強度(轉(zhuǎn)化和記錄為0%)。介質(zhì)雙份，在含有細胞并加入介質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天后相對于d時的阿爾瑪藍平均熒光強度(轉(zhuǎn)化和記錄為100%)。Mso(50%抑制濃度)從d時開始處理的細胞數(shù)量或質(zhì)量的增加到實驗結(jié)束時僅僅為介質(zhì)對照中相應(yīng)增加的50%時的測試化合物的濃度。TGI(總生長抑制)在實驗結(jié)束時處理的細胞的數(shù)量或質(zhì)量與d時相等時的測試化合物的濃度。LC5Q(50%致死濃度)在實驗結(jié)束時處理的細胞的數(shù)量或質(zhì)量為d時的一半時的測試化合物的濃度。24下面的圖表是在用葉提取物、葉汁和烘烤的葉片處理的A431人類腫瘤細胞系中生長抑制的濃度反應(yīng)曲線。諾麗果測試化合物的IC，TGI和LC竺值表10化合物分析名稱aic50bTGIcl一，C葉提取物腫瘤，皮膚76〉100〉100葉汁腫瘤，皮膚0.20%0.36%0.65%烘烤的葉片腫瘤，皮膚〉100〉100〉100絲裂霉素腫瘤，皮膚0.0351.0通過非線性回歸分析使用GraphPadPrism(GraphPadSoftware,USA)進行了ICso、TGI和LC5o的半定量確定。概括來說，本發(fā)明的某些實施方案提供了使用諾麗葉汁和諾麗葉提取物來抑制HMG-CoA還原酶、PDE3和PDE4、5-LOX和15-LOX、XO、GABA以及第二位最常見的人類皮膚癌細胞系的生長，目的在于緩解疼痛和炎癥，治療前列腺癌，降低膽固醇水平，對抗n型糖尿病，維持腦中細胞相互作用的最高可能性的完整性使得神經(jīng)功能不被擾亂(即神經(jīng)保護作用)，緩解哮喘和過敏的效應(yīng)，提高能量，改善胰島素的分泌，減少腎結(jié)石的積累，減輕痛風(fēng)的效應(yīng)，最小化與癲癇和其它抽搐性疾病有關(guān)的痙攣，以及為藥物成癮的人提供姑息作用。實施例4此外，來自諾麗果新鮮葉片的壓榨汁液被用于通過對腺嘌呤A2A的生物學(xué)分析，鑒定了四種生物活性化合物，它們己經(jīng)被分離并鑒定為具有顯著的生物活性。它們的結(jié)構(gòu)已經(jīng)通過NMR技術(shù)和質(zhì)譜確定，并被鑒定為焦脫鎂葉綠酸a、脫鎂葉綠酸a、Purpin7和脫鎂葉綠酸葉綠醇酯(PheophorbidePhytolester)。上述的生物活性化合物的分離和定性為來自諾麗果植物、特別是植物的葉片的提取物的抗炎和止痛性25質(zhì)提供了重要的解釋。本發(fā)明可以體現(xiàn)為其它特定形式而不背離其基本特征的精神。所描述的實施方案在所有方面都應(yīng)該被認為僅僅是說明性的而不是限制性的。因此，本發(fā)明的范圍由所附的權(quán)利要求而不是前面的說明書指定。落入權(quán)利要求的等效性的意義和范圍內(nèi)的所有改變都將包含在其范圍之內(nèi)。2權(quán)利要求1.在哺乳動物中治療炎癥的方法，其包括獲得諾麗果(Morindacitrifolia)的葉片；溶解并將葉片切成小片；將葉片放置在壓碎裝置中；壓碎葉片；在醇溶液中滲濾葉片碎片；從醇葉漿液中收集醇和所有醇溶性成分；使醇蒸發(fā)；留下初級葉提取物；將葉提取物溶解在水中；以及給哺乳動物施用所述稀釋的葉提取物，化合物含有有效量的加工過的諾麗果的葉提取物產(chǎn)品，其中所述化合物減輕或阻止炎癥和/或疼痛。2.權(quán)利要求l的方法，其中所述葉提取物溶解在水中，以將溶液稀釋成選自下列的量10，000毫克/毫升，1000毫克/毫升，100毫克/毫升，10毫克/毫升，l毫克/毫升，0.1毫克/毫升，0.001毫克/毫升和0.0001毫克/毫升。3.權(quán)利要求l的方法，其中初級葉提取物被巴氏消毒。4.權(quán)利要求l的方法，其中初級葉提取物被部分滅菌。5.權(quán)利要求l的方法，還包括將初級葉提取物放置在離心機中，以除去任何殘留的葉汁和其它物質(zhì)、包括葉綠素的步驟。6.權(quán)利要求l的方法，其中初級葉提取物被進一步分級成選自下列的級份-無水己烷級份；以及水性甲醇級份己烷。7.權(quán)利要求6的方法，其中次級級份利用含有二氧化硅的氣相色譜產(chǎn)生。8.權(quán)利要求6的方法，還包括將次級甲醇級份分成更多的甲醇級份的步驟。9.權(quán)利要求6的方法，其中次級己垸級份被進一步分級成更多的己垸級份。10.權(quán)利要求1的方法，還包括將葉提取物與諾麗果植物果實的果汁合并以獲得葉槳的步驟。11.權(quán)利要求2的方法，還包括將初級葉提取物與載體介質(zhì)在施用前合并的步驟。12.權(quán)利要求1的方法，其中環(huán)加氧酶-2相對于環(huán)加氧酶-1也被選擇性抑制。13.權(quán)利要求1的方法，其中實現(xiàn)了減輕或阻止炎癥和/或疼痛，同時維持了胃粘膜的完整性。14.權(quán)利要求1的方法，還包括在施用前將溶解的提取物稀釋100倍的步驟。15.促進健康的方法，包括下面的步驟在基于醇的溶液中加入加工過的諾麗果組分；從所述溶液中分離和提取所述加工過的諾麗果組分的活性成分以獲得級份；將所述提取的活性成分引入所述哺乳動物，其中所述提取的活性成分減輕或阻止了炎癥和/或疼痛。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述基于醇的溶液主要選自甲醇、乙醇和乙酸乙酯，以及其它基于醇的衍生物。17.權(quán)利要求l的方法，其中所述活性成分選自焦脫鎂葉綠酸a、脫鎂葉綠酸a、Purpin7和脫鎂葉綠酸葉綠醇酯。18.在哺乳動物中治療炎癥的方法，包括獲得諾麗果葉片；溶解并將葉片切成小片；將葉片放置在壓碎裝置中；壓碎葉片；在壓碎時從葉片收集所有物質(zhì)；將葉汁溶解在水中；以及將所述稀釋的葉汁給哺乳動物施用，其中所述化合物減輕或阻止了炎癥和/或疼痛。19.權(quán)利要求18的方法，其中葉提取物被溶解在水中，以將溶液稀釋成選自下列的量毫克/毫升，1000毫克/毫升，100毫克/毫升，10毫克/毫升，l毫克/毫升，0.1毫克/毫升，0.001毫克/毫升和0.0001毫克/毫升。20.權(quán)利要求1S的方法，其中葉汁按照選自下面的方法進一步加工巴氏消毒，滅菌和部分滅菌。21.權(quán)利要求18的方法，其中葉汁被進一步分級成選自下面的級份4無水己垸級份；以及水性甲醇級份己垸。22.權(quán)利要求21的方法，還包括將次級甲醇級份分成更多的甲醇級份的步驟。23.權(quán)利要求21的方法，其中次級己垸級份被進一步分級成更多的己烷級份。24.權(quán)利要求18的方法，進一步包含將葉汁與諾麗果植物果實的果汁合并以獲得葉槳的步驟。25.權(quán)利要求1S的方法，還包括將葉汁與載體介質(zhì)在施用前合并的步驟。26.權(quán)利要求18的方法，其中環(huán)加氧酶-2相對于環(huán)加氧酶-1也被選擇性抑制。27.權(quán)利要求18的方法，其中實現(xiàn)了減輕或阻止炎癥和/或疼痛，同時維持了胃粘膜的完整性。28.權(quán)利要求18的方法，還包括在施用前將葉汁稀釋100倍的步驟。全文摘要本發(fā)明涉及通過給個體施用來自植物諾麗果(Morindacirtrifolia)的各種生物活性化合物而提供各種健康益處的方法和組合物。本發(fā)明涉及了使用下面的一種或多種諾麗葉提取物，諾麗葉汁，和/或烘烤的葉片。更具體來說，本發(fā)明涉及施用下列一種或多種焦脫鎂葉綠酸a、脫鎂葉綠酸a、Purpin7和/或脫鎂葉綠酸葉綠醇酯，它們都可以來自于諾麗葉提取物、諾麗葉汁和/或烘烤的葉片。此外，上述制劑導(dǎo)致疼痛和炎癥的緩解。文檔編號A01N65/00GK101489396SQ200780017244公開日2009年7月22日申請日期2007年5月11日優(yōu)先權(quán)日2006年5月12日發(fā)明者克勞德·亞拉克·詹森,史蒂芬·斯托里,周炳南,布雷特·J·韋斯特,晨蘇,鄧世新,阿法·K·帕盧申請人:大溪地諾麗國際公司