專利名稱：裂褶菌蛋白提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物病害防治領(lǐng)域，具體地說涉及裂褶菌蛋白提取物及其制備 方法和應(yīng)用；此外，還涉及裂褶菌的培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
植物病毒病類似人類的癌癥，目前尚無十分有效的防治方法。煙草花葉病 毒(7b6accomo^cv/ntf， TMV)是最具經(jīng)濟(jì)重要性的病毒之一，能侵染茄科、 葫蘆科、十字花科等300多種植物，并引起嚴(yán)重危害，植物病毒病防治通常依 靠育種和化學(xué)藥劑的方法解決，但效果都不理想，前者受限于抗病基因的來源， 后者則效果差，同時(shí)會(huì)造成環(huán)境污染等問題。近年來，隨著人們對環(huán)境的重視， 化學(xué)藥劑的應(yīng)用受到了限制，而環(huán)境友好型的生物源抗植物病毒藥劑受到重視。
裂褶菌(5"c/H'zop/^〃wm comm,e Fr.)又稱白參、樹花，屬于真菌門，擔(dān)子 菌亞門、層菌綱、非褶菌目、裂褶菌科、裂褶菌屬。裂褶菌廣布于世界各地， 我國大部分地區(qū)都有分布。近年來，日本及歐美等國主要從分子生物學(xué)、抗癌 活性物質(zhì)和優(yōu)良菌株的選育等方面對裂褶菌進(jìn)行研究，我國的研究則集中于裂 褶菌的發(fā)酵條件、人工馴化栽培和藥用價(jià)值。裂褶菌中含有多種抗菌消炎、抗 腫瘤，抗輻射等活性物質(zhì)，但其應(yīng)用研究多集中在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，而在抗植物病毒 方面的作用未涉及到。 '
專利《裂褶菌的培養(yǎng)工藝及其利用》(專利號ZL85103492)公開了用黃豆 粉、葡萄糖或蔗糖、酵母膏、硫酸鎂、磷酸二氫鉀等組成的培養(yǎng)基培養(yǎng)裂褶菌 的方法，提高菌絲體及裂褶多糖的得率，并從裂褶菌中提取抗腫瘤、抗放升白 及調(diào)整機(jī)體免疫功能、生產(chǎn)抗菌素增效劑的裂褶菌多糖和人體必需的氨基酸。 在這種液體培養(yǎng)工藝下，每升發(fā)酵菌液含200-300g菌絲體(濕重)，但是其產(chǎn)量 仍然較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一目的是提供一種能防治煙草花葉病毒的裂褶菌蛋白提取物。 本發(fā)明第二目的是提供上述裂褶菌蛋白提取物的制備方法。本發(fā)明第三目的是提供裂褶菌的培養(yǎng)方法。 本發(fā)明第四目的是提供用于培養(yǎng)裂褶菌的培養(yǎng)基。
本發(fā)明第五目的是提供裂褶菌蛋白提取物在防治煙草花葉病毒上的用途。 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案如下 裂褶菌蛋白提取物，按照如下方法制備.-
(1) 按照重量體積比為1: 10 20的比例將裂褶菌菌絲粉與pH 7.0 9.0
的磷酸緩沖液(PBS)混合，然后在2 6。C浸提1 3h，再在4。C、7000 10000rpm 條件下離心15 25min，收集上清液，得到裂褶菌粗提液；.
(2) 向步驟(1)所得裂褶菌粗提液中加入硫酸銨至飽和度為40%，然后 在2 6。C放置6 12小時(shí)，再在4°C、 7000 10000rpm條件下離心〗5 25min， 收集上清液；
(3) 向步驟(2)所得上清液中加入硫酸鉸至飽和度為85%，然后在2 6。C 放置6 12小時(shí)，再在4。C、 7000 10000rpm條件下離心15 25min，所得沉
淀即為裂褶菌蛋白提取物。
上述裂褶菌蛋白提取物的制備方法，包括如下歩驟
(1) 按照重量體積比為1: 10 20的比例將裂褶菌菌絲粉與pH 7.0 9.0 的磷酸緩沖液(PBS)混合，然后在2 6。C浸提1 3h，再在4。C、7000 10000rpm 條件下離心15 25min,收集上清液，得到裂褶菌粗提液；
(2) 向步驟(1)所得裂褶菌粗提液中加入硫酸銨至飽和度為40%，然后 在2 6。C放置6 12小時(shí)，再-在4°C、 7000 10000rpm條件下離心15 25min， 收集上清液；
(3) 向歩驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為85%，然后在2 6。C 放置6 12小時(shí)，再在4°C、 7000 10000rpm條件下離心15 25min，所得沉
淀即為裂褶菌蛋白提取物。
所述的裂褶菌菌絲粉的粒徑為《60目。
上述裂褶菌蛋白提取物中所述的裂褶菌的培養(yǎng)方法，包括如下步驟
(1) 裂褶菌母種活化將裂褶菌母種轉(zhuǎn)接在？DA固體培養(yǎng)基上，然后在 24 28。C培養(yǎng)7 10天，得平板活化菌絲；
(2) —級菌種制備將步驟(1)所得平板活化菌絲切成小于lmm的小塊， 按照0.4 0.8g菌絲/100ml的接種量將裂褶菌菌絲接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基巾，然后在24 28°C 、 200 260rpm/min條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)4 6天，獲得一級菌種； 所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成成份及其重量百分比為可溶性淀粉4 6%、葡萄 糖4 5.5%、小麥粉2 3%、玉米粉2 4%、酵母膏0.3 0.6%、黃豆粉0.5 1%、蛋白胨0.2 0.6%、 KH2P041%、 MgSO40.5%、 VB,0.01。/。，其余為水；
(3) 發(fā)酵培養(yǎng)按照體積百分比為5 15%的接種量將歩驟(2)得到的一 級菌種接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基(其組成成份及其重量百分比同步驟(2))中， 然后在24 28。C、 200 260rpm/min條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)4 6天，得發(fā)酵混合
液；
(4) 將步驟(3)所得發(fā)酵混合液抽濾、收集裂褶菌菌絲，烘干、粉碎， 得裂褶菌菌絲粉。
上述培養(yǎng)方法步驟(2)或步驟(3)中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的時(shí)間優(yōu)選為6天。
上述培養(yǎng)方法步驟(1)所述的PDA固體培養(yǎng)基按照本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟 知的方法制備，其組成成份及其重量百分比可以為馬鈴薯淀粉20%、葡萄糖 20%、瓊脂20%、其余為水。
上述培養(yǎng)方法中所述的裂褶臠母種可以從中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中 心或中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物屮心購買得到。
上述培養(yǎng)方法步驟(2)或歩驟(3)中所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，其組成成 份及其重量百分比為可溶性淀粉4 6%、葡萄糖4 5.5%、小麥粉2 3%、 玉米粉2 4%、酵母膏0.3 0.6%、黃豆粉0.5 1%、蛋白胨0.2 0.6%、 KH2P04 1°/。、 MgSO40.5%、 VB,0.01。/。，其余為水。
上述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法，包括按照比例將可溶性淀粉、葡萄糖、 小麥粉、玉米粉、酵母膏、黃豆粉、蛋白胨、KH2P04、 MgS04和VB,加入水 中，然后混合均勻即可。
本發(fā)明裂褶菌蛋白提取物在防治煙草花葉病毒病上的應(yīng)用。具體方法為將 卜.述裂褶菌蛋白提取物稀釋成濃度為40嗎/ml的溶液，噴施于3 5葉期的煙草、 辣椒等植物的葉片上。
本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)(1)木發(fā)明裂褶菌蛋白提取物對煙草花葉病毒的防治 效果好，在噴施煙草72小時(shí)后，接種煙草花葉病毒，對煙草花葉病毒的抑制率 口丄達(dá)到70%以上；(2)本發(fā)明的裂褶菌蛋白提取物屬于天然提取物，對人類和 環(huán)境無害，屬于環(huán)境友好型農(nóng)藥；(3)本發(fā)明裂褶菌蛋白提取物制備方法簡單，成本低，適于進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。(4)利用本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)裂褶菌產(chǎn)量
高，每升發(fā)酵菌液可獲得400 480g菌絲體濕重或54 60g菌絲體干重,與現(xiàn)有
技術(shù)相比，產(chǎn)量冇了很人的提高。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1裂褶菌菌絲的制備
1、 菌種活化將裂褶菌母種轉(zhuǎn)接在PDA固體培養(yǎng)基(馬鈴薯淀粉20%、 葡萄糖20%、瓊脂20%、其余為水)上，在24。C培養(yǎng)10天，菌絲長滿平板。
2、 裂褶菌的發(fā)酵培養(yǎng)
(1) 液體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備分別稱取以下成分，60g 口r溶性淀粉、55g 葡萄糖、30g小麥粉、40g玉米粉、6g酵母膏、10g黃豆粉、6g蛋白胨、lgKH2P04、 0.5gMgSO4、 10mgVBp將這些物質(zhì)加入水屮并定容至lOOOml，混勻即可。
(2) —級菌種制備將步驟1得到的平板菌絲切成小于lmm的小塊，按 照0.4g菌絲/100ml的接種量將裂褶菌菌絲轉(zhuǎn)入裝有100ml發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml 搖瓶中，在24。C、 200rpm搖瓶培養(yǎng)6天得到一級菌種，其濃度為3.9g/100ml)。
(3) 發(fā)酵培養(yǎng)按照體積百分比為5%的接種量將步驟2 (2)得到的--級 菌種接種到裝有100ml步驟2( 1 )所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml搖瓶中，在24°C 、 200rpm搖瓶下培養(yǎng)6天，得發(fā)酵混合液；
(4) 將上述發(fā)酵混合液抽濾、收集菌絲于4(TC烘箱中烘干，每100ml發(fā) 酵菌液得到5.8g菌絲(下重)，粉碎過60目篩，得到裂褶菌菌絲粉。
實(shí)施例2裂褶菌菌絲的制備
1、 菌種活化將裂褶菌母種轉(zhuǎn)接在PDA固體培養(yǎng)基(馬鈴薯淀粉20%、 葡萄糖20%、瓊脂20%、其余為水)上，在26t:培養(yǎng)10天，菌絲長滿平板。
2、 裂褶菌的發(fā)酵培養(yǎng)
(1) 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備分別稱取以下成分，40g可溶性淀粉、40g葡萄 糖、20g小麥粉、20g玉米粉、3g酵母膏、5g黃豆粉、2g蛋白胨、0.1gKH2PO4、 0.5gMgSO4、 10mgVB,，將這些物質(zhì)加入1000ml水中混勻即可。
(2) —級菌種制各將步驟1得到的平板菌絲切成小于lmm的小塊，按 照0.6g菌絲/100ml的接種量將裂褶菌菌絲轉(zhuǎn)入裝有100ml發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml 搖瓶中，于26。C、 240rpm搖瓶培養(yǎng)6天，得到一級菌種(濃度為4.2g/100ml)。
(3) 發(fā)酵培養(yǎng)按照體積百分比為10%的接種量將步驟2 (2)得到的一級菌種培養(yǎng)液接種到裝有100ml步驟2 (1)所述發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml搖瓶中， 于26"、 240rpm搖瓶培養(yǎng)6天，得發(fā)酵混合液。
(4)將上述發(fā)酵混合液抽濾收集菌絲于4(TC烘箱中烘干，每100ml發(fā)酵 菌液得到5.4g菌絲(干重)，粉碎過60目篩得到裂褶菌菌絲粉。 實(shí)施例3裂褶菌菌絲的制備
1、 菌種活化將裂褶菌母種轉(zhuǎn)接在PDA固體培養(yǎng)基(馬鈴薯淀粉20%、 葡萄糖20%、瓊脂20%、其余為水)上，在28。C培養(yǎng)10天，菌絲長滿平板。
2、 裂褶菌的發(fā)酵培養(yǎng)
(1) 發(fā)酵培養(yǎng)基的制備分別稱取以下成分，60g可溶性淀粉、55g葡萄 糖、30g小麥粉、40g玉米粉、6g酵母膏、10g黃豆粉、6g蛋白胨、lgKH2P04、 0.5gMgSO4、 10mgVBp將這些物質(zhì)加入水定容至1000ml混勻即可。
(2) —級菌種制備將步驟l得到的平板菌絲切成小于lmm的小塊，按 照0.8g菌絲/100ml的接種量將裂褶菌菌絲轉(zhuǎn)入裝有100ml發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml 搖瓶中，于2Sr、 260rpm搖瓶培養(yǎng)6天得到一級菌種(濃度為4.1g/100ml)。
(3) 發(fā)酵培養(yǎng)將步驟1)得到的一級菌種培養(yǎng)液按照體積百分比為15% 的接種量接種到裝有100ml步驟2)所述發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml搖瓶中，于28°C、 260rpm搖瓶培養(yǎng)6天，得發(fā)酵混合液；
(4) 將上述發(fā)酵混合液抽濾收集菌絲于4(TC烘箱中烘干，每100ml發(fā)酵 菌液得到6g菌絲(干重)，粉碎過60 H篩得到裂褶菌菌絲粉。
實(shí)施例4裂褶菌蛋白提取物的制備 按照如下方法進(jìn)行
(1) 按照重量體積比為lg/10ml的比例將2g實(shí)施例1中所得的裂褶菌菌 絲粉與0.025mol/LpH7.0的磷酸緩沖液混合；在2"浸提1小時(shí)后，4°C 10000rpm 下離心25min，收集上清液，得裂褶菌粗提液。
(2) 向步驟(1)得到的裂褶菌粗提液中加硫酸銨至飽和度為40%，在2C 放置8小時(shí)，在4。C、 10000rpm條件下離心，收集上清液。
(3) 向步驟(2)得到的上清液中加入硫酸銨至飽和度為85%，在2。C放 置8小時(shí)，在4。C、 10000rpm條件下離心，收集沉淀，即得到裂褶菌蛋白提取 物。
實(shí)施例5裂褶菌蛋白提取物的制備
8按照如卜方法進(jìn)行
(1) 按照重量體積比為lg/20ml的比例將2g實(shí)施例2屮所得的裂褶菌菌 -絲粉與0.025mol/LpH8.0的磷酸緩沖液混合；在4。C浸提2小時(shí)，4。C10000rpm 下離心25min，收集上清液，得裂褶菌粗提液。
(2) 向步驟(1)得到的裂褶菌粗提液中加硫酸銨至飽和度為40%，然后 在4。C放置8小時(shí)，再在4。C、 10000rpm條件下離心，收集上清液。
(3) 向步驟(2)得到的上清液中繼續(xù)加入硫酸銨至飽和度85%，在4°C 放置8小時(shí)，再在4。C、 10000rpm條件下離心，收集沉淀，即得到裂褶菌蛋白 提取物。
實(shí)施例6裂褶菌蛋白提取物的制備 按照如下方法進(jìn)行
(1) 按照重量體積比為lg/20ml的比例將2g實(shí)施例3中所得的裂褶菌菌 絲粉與0.025mol/L pH9.0的磷酸緩沖液混合；然后在6。C浸提3小時(shí)， 4"Cl0000rpm下離心25min，收集上清液，得裂褶菌粗提液。
(2) 向步驟(1)得到的裂褶菌粗提液中加硫酸鈸至飽和度為40%，然后 在6。C放置8小時(shí)，再在4。C、 10000rpm條件下離心，收集上清液。
(3) 向步驟(2)得到的上清液中加入硫酸銨至飽和度85%，然后在6'C 放置8小時(shí)，再在4。C、 10000rpm條件下離心，收集沉淀，即得到裂褶菌蛋t^ 提取物。
實(shí)施例7裂褶菌蛋白提取物誘導(dǎo)煙草抗煙草花葉病毒活性試驗(yàn)
1、 蛋白濃度的測定
用BCA蛋白濃度試劑盒(美國Pierce公司)檢測實(shí)施例4、 5、 6中提取的 裂褶菌蛋白提取物的蛋白濃度。
2、 抗病毒效果試驗(yàn)
(1) 噴霧防治處理分別將實(shí)施例4、 5、 6中得到的裂褶菌蛋白提取物用 水稀釋得到總蛋白濃度為40pg/ml的溶液，分別對三至四葉期的枯斑三生煙進(jìn) 行整株噴霧，設(shè)三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)三株，每株三片葉子；同時(shí)用清水噴施丁 三至四葉期的枯斑三生煙作為對照(CK)，設(shè)置三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)二株，每 株三片葉子。
(2) 病毒接種液的制備病毒來源為北京市農(nóng)林科學(xué)院植物與環(huán)境保護(hù)研究所植病綜防研究室保存的TMV普通株系(以普通煙為繁殖寄主，活體保存)，
將感染煙草花葉病毒TMV普通株系的普通煙的葉片去除主脈，與pH8.0的0.01 mol/LPBS按lg/20ml混合，每20mlPBS加0.015g金剛砂，將葉片充分研磨， 得到接種液。
(3) 接種按步驟(1)的方法噴霧處理枯斑三生煙植株72小時(shí)后，用步 驟(2)得到的接種液進(jìn)行汁液摩擦接種(植病研究方法(第三版)，方中達(dá)，中 國農(nóng)業(yè)出版社)接種后立即用清水沖洗，于防蟲溫室中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為28i: 光照12小時(shí)，18。C無光照12小時(shí)，交替進(jìn)行。
(4) 枯斑抑制率訃算接種72小時(shí)后調(diào)查枯斑三生煙葉片產(chǎn)生枯斑數(shù)量，
按下式計(jì)算出枯斑抑制率。
X= (CK-Y) X100/CK (式I)
式I屮，X為枯斑抑制率，單位％; CK為清水對照葉片的平均枯斑數(shù)， 單位個(gè)；Y為經(jīng)裂褶菌蛋白提取物誘導(dǎo)處理后葉片的平均枯斑數(shù)，單位個(gè)。 結(jié)果(見表1)實(shí)施例4、 5、 fi所得的裂褶菌蛋閂提取物處理過的煙草 對煙草花葉病毒的抑制率均在70%以匕說明裂褶菌蛋白提取物能夠誘導(dǎo)煙草 對煙草花葉病毒產(chǎn)生抗性。
表1.裂褶菌蛋白提取物誘導(dǎo)煙草抗煙草花葉病毒活性試驗(yàn)結(jié)果
裂褶菌 蛋白 提取物重復(fù)一重復(fù)二重復(fù)三平均值標(biāo)準(zhǔn) 偏差
貧'寂敘 ^發(fā)^抑制 率％平均 枯斑 數(shù)抑制 率0/0平均 枯斑數(shù)抑制 率％平均 枯斑 數(shù)抑制 率％實(shí)施例42774.492577.613270.242874.113.7
實(shí)施例52972.152874.473369.163071.092.7
實(shí)施例62575.963270.913071.963270.092.7
CK104110107107
10
權(quán)利要求
1、裂褶菌蛋白提取物，按照如下方法制備(1)按照重量體積比為1∶10～20的比例將裂褶菌菌絲粉與pH7.0～9.0的磷酸緩沖液混合，然后在2～6℃浸提1～3h，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，收集上清液，得到裂褶菌粗提液；(2)向步驟(1)所得裂褶菌粗提液中加入硫酸銨至飽和度為40％，然后在2～6℃放置6～12小時(shí)，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，收集上清液；(3)向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為85％，然后在2～6℃放置6～12小時(shí)，再在4℃、7000～10000rpm條件下離心15～25min，所得沉淀即為裂褶菌蛋白提取物。
2、 按照權(quán)利要求1所述的裂褶菌蛋白提取物，其特征在于所述的裂褶菌菌 絲粉的粒徑為《60目。
3、 權(quán)利要求l所述的裂褶菌蛋白提取物的制備方法，包括如下步驟(1) 按照重量體積比為h 10 20的比例將裂褶菌菌絲粉與pH 7.0 9.0 的磷酸緩沖液(PBS)混合，然后在2 6。C浸提1 3h，再在4。C、7000 10000rpm 條件下離心15 25min，收集上清液，得到裂褶菌粗提液；(2) 向步驟(1)所得裂褶菌粗提液中加入硫酸銨至飽和度為40%，然后 在2 6。C放置6 12小時(shí)，再在4°C、 7000 10000rpm條件下離心15 25min， 收集上清液；(3) 向步驟(2)所得上清液中加入硫酸銨至飽和度為85%，然后在2 6°C 放置6 12小時(shí)，再在4。C、 7000 10000rpm條件下離心15 25min，所得沉淀即為裂褶菌蛋白提取物。
4、權(quán)利要求1中所述的裂褶菌的培養(yǎng)方法，包括如下步驟:(1) 將裂褶菌母種轉(zhuǎn)接在PDA固體培養(yǎng)基上，然后在24 28。C培養(yǎng)7 10天，得平板活化菌絲；(2) 將步驟(1)所得平板活化菌絲切成小于lmm的小塊，按照0.4 0.8g 菌絲/100ml的接種量將裂褶菌菌絲接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后在24 28°C 、 200 260rpm/min條件下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)4 6天，獲得一級菌種；所述的液體發(fā) 酵培養(yǎng)基的組成成份及其重量百分比為可溶性淀粉4 6%、葡萄糖4 5.5%、小麥粉2 3%、玉米粉2 4%、酵母膏0.3 0.6%、黃豆粉0.5 1%、蛋白胨 0.2 0.6%、 KH2P041%、 MgSO40.5%、 VB0.010/。，其余為水；(3) 按照體積百分比為5 15%的接種量將步驟(2)得到的一級菌種接種 到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后在24 28'C、 200 260rpm/min條件下進(jìn)行發(fā)酵培 養(yǎng)4 6天，得發(fā)酵混合液；(4) 將步驟(3)所得發(fā)酵混合液抽濾、收集裂褶菌菌絲，烘干、粉碎， 得裂褶菌菌絲粉。
5、 按照權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于其歩驟(2)中所述的發(fā) 酵培養(yǎng)的時(shí)間為6天。
6、 按照權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)方法，其特征在于其歩驟(3)中所述的發(fā) 酵培養(yǎng)的時(shí)間為6天。
7、 按照權(quán)利要求4、 5或6所述的培養(yǎng)方法，其特征在于其步驟(1)中所 述的PDA固體培養(yǎng)基的組成成份及其重量百分比為馬鈴薯淀粉20%、葡萄糖 20%、瓊脂20%、其余為水。
8、 權(quán)利要求4中所述的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于其組成成份及其重量 百分比為可溶性淀粉4 6%、葡萄糖4 5.5%、小麥粉2 3%、玉米粉2 4%、酵母膏0.3 0.6%、黃豆粉0.5 1%、蛋白胨0.2 0.6%、 KH2P041%、 MgS04 0.5%、 VB,0.01。/。，其余為水。
9、 權(quán)利要求1所述的裂褶菌蛋白提取物在防治煙草花葉病毒病上的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種裂褶菌蛋白提取物及其制備方法，就是將裂褶菌菌絲粉在磷酸緩沖液中浸提，然后離心，得裂褶菌菌絲粗提液；然后向裂褶菌菌絲粗提液中加入硫酸銨，放置6～12小時(shí)后離心，最終可得裂褶菌蛋白提取物。本發(fā)明還公開了裂褶菌的培養(yǎng)方法和一種發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明裂褶菌蛋白提取物對煙草花葉病毒的防治效果好，對煙草花葉病毒的抑制率可達(dá)到70％以上；本發(fā)明屬于天然提取物，對人類和環(huán)境無害，屬于環(huán)境友好型農(nóng)藥；本發(fā)明制備方法簡單，成本低，適于進(jìn)行規(guī)模化生產(chǎn)。此外，利用本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)裂褶菌產(chǎn)量高。
文檔編號A01N63/04GK101444231SQ20081024756
公開日2009年6月3日 申請日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者紅 嚴(yán), 娜 盧, 瑩 周, 李興紅, 燕繼曄 申請人:北京市農(nóng)林科學(xué)院