專利名稱：一種替代抗生素的微生物飼料添加劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種飼料添加劑及其制備方法，尤其涉及一種替代抗生素的微生物飼 料添加劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
自20世紀(jì)40年代抗生素問(wèn)世以來(lái)，由于其在防病、保健和促進(jìn)生長(zhǎng)、提高飼料效 率方面的神奇功效，在養(yǎng)殖業(yè)中得到全方位的應(yīng)用，到了 20世紀(jì)70年代達(dá)到頂峰。根據(jù)2001年世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球每年消耗的抗生素總量中，有90%被用于食 用動(dòng)物，每年約有12000噸和900噸抗生素分別被用于食用動(dòng)物的飼料添加劑和治療用藥。 在動(dòng)物疾病治療中，濫用抗生素的現(xiàn)象普遍存在，許多動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)只要發(fā)現(xiàn)動(dòng)物發(fā)病，首先 使用的是抗生素，一種抗生素不見(jiàn)效，馬上換另一種，而且常常超大劑量使用抗生素?？股?素作為飼料添加劑，使用量更大，我國(guó)每年有6000噸抗生素用于飼料添加劑，占全球抗生 素飼料添加劑使用量的50%。據(jù)估計(jì)，國(guó)內(nèi)一個(gè)萬(wàn)頭豬場(chǎng)每年向環(huán)境中排泄的金霉素等原 形藥物約300 500kg。我國(guó)的畜牧業(yè)對(duì)抗生素的依賴性很大，世界每年抗生素花費(fèi)約50 億美元，我國(guó)約5億美元，占1/10。我國(guó)已成了世界上濫用抗生素最為嚴(yán)重的國(guó)家。在被稱為抗生素“黃金時(shí)代”的上世紀(jì)五六十年代，曾有人斷言，人類戰(zhàn)勝細(xì)菌的 時(shí)代已經(jīng)到來(lái)。具有諷刺意味的是那時(shí)全世界每年死于感染性疾病的人數(shù)只有約為700 萬(wàn)，而這一數(shù)字到了 1999年上升到2000萬(wàn)。我國(guó)現(xiàn)在每年有20萬(wàn)人死于藥品不良反應(yīng)， 其中有8萬(wàn)人直接死于抗生素的濫用?？咕幬餅E用的危害不僅導(dǎo)致藥品不良事件和藥源性疾病的發(fā)生，而且會(huì)導(dǎo)致對(duì) 抗菌藥物的耐藥性，不僅嚴(yán)重威脅著人類的生命，而且最近幾年傳染病集中爆發(fā)、畜牧業(yè)損 失慘重！免疫失敗也正是濫用抗生素的直接結(jié)果，每年全國(guó)因畜禽疾病的直接經(jīng)濟(jì)損失高 達(dá)200-250億元，間接經(jīng)濟(jì)損失更是數(shù)額驚人達(dá)1000億元之巨。在人們生活水平提高的 今天，只圖吃飽的時(shí)代早已一去不復(fù)返！濫用抗生素，畜產(chǎn)品藥物殘留嚴(yán)重超標(biāo)，面臨著畜 禽產(chǎn)品出口受阻。同時(shí)，飼料中添加抗生素，動(dòng)物生長(zhǎng)速度快，動(dòng)物自身及許多致病菌產(chǎn)生的毒性 胺、氨、細(xì)菌毒素、氧自由基等有毒物質(zhì)在體內(nèi)蓄積多；同時(shí)由于生長(zhǎng)速度快，呈味物質(zhì)合成 慢，與生長(zhǎng)速度不同步。故現(xiàn)在許多肉食品表現(xiàn)出肉質(zhì)蒼白、松軟、無(wú)肉香味，雞蛋蛋清稀 薄、蛋黃松散、蛋味不濃，魚(yú)肉松散、水分含量高、無(wú)嚼咬味。使畜產(chǎn)品食之無(wú)味，老百姓以前 把肉蛋奶作為生活必須品，現(xiàn)在幾乎成了“談肉色變”的地步，這也是畜產(chǎn)品價(jià)格持續(xù)低迷、 肉價(jià)不如菜價(jià)的根本原因！但菜畢竟是“菜”，動(dòng)物蛋白的營(yíng)養(yǎng)作用不是菜能簡(jiǎn)單替代得了 的！而中國(guó)畜牧業(yè)要想可持續(xù)發(fā)展，也必須走出抗生素的溫柔陷阱！否則不僅疾病頻繁流 行給畜牧業(yè)帶來(lái)巨額直接損失，而且面臨消費(fèi)群體集體消失的巨大風(fēng)險(xiǎn)。鑒于有抗食物的危害性，世界衛(wèi)生組織成立了慎用抗生素聯(lián)盟，其成員包括90多 個(gè)國(guó)家，采取立法手段禁用抗生素。近年來(lái)，發(fā)達(dá)國(guó)家意識(shí)到在動(dòng)物飼料中添加抗生素的危 害性，從1996年開(kāi)始，立法禁止在動(dòng)物飼料中使用抗生素。歐盟在2006年就已全面禁止在
4飼料中使用抗生素作為飼料生長(zhǎng)添加劑。研究綠色無(wú)抗生素飼料是近來(lái)世界各國(guó)飼料工業(yè)的重要研究方向，許多國(guó)家的飼 料和畜牧業(yè)生產(chǎn)者在政府管理部門(mén)限制和禁止使用抗生素的同時(shí)，主張用益生素來(lái)替代詞 料中的抗生素。我國(guó)在抗生素的替代方面有所研究，但大多集中在酶制劑方面，單一酶制劑對(duì)飼 料消化利用率提高作用明顯，但其抗病促生長(zhǎng)效果仍不敵抗生素?，F(xiàn)有的微生物發(fā)酵飼料替代抗生素，但由于其技術(shù)與國(guó)內(nèi)的實(shí)際養(yǎng)殖情況脫節(jié)， 無(wú)法在日常養(yǎng)殖生產(chǎn)中方便有效地應(yīng)用，導(dǎo)致其實(shí)際效果不佳。比如某產(chǎn)品由于技術(shù)的先 天原因，雖然理論效果良好，但由于最終產(chǎn)物水分含量高達(dá)30%以上，養(yǎng)殖戶使用極其不方 便，2008年前國(guó)內(nèi)有10多個(gè)廠家使用該技術(shù)，現(xiàn)大都放棄使用，不能不說(shuō)是一大遺憾！另外，國(guó)內(nèi)益生素生產(chǎn)廠家的益生素產(chǎn)品大都集中在提高飼料消化利用率方面的 研究，直接全面替代抗生素、砷制劑的產(chǎn)品目前并不多見(jiàn)，對(duì)完全取消砷制劑的產(chǎn)品更是空 白。因此研究完全替代抗生素、砷制劑、激素，恢復(fù)畜產(chǎn)品本來(lái)風(fēng)味、提高畜產(chǎn)品品質(zhì) 的產(chǎn)品顯得尤為緊迫和重要。這類產(chǎn)品必須價(jià)格低廉、使用方便、添加量少，才可能被畜牧養(yǎng)殖者、飼料生產(chǎn)廠 廣為接受，大面積推廣，體現(xiàn)技術(shù)的實(shí)用性，真正產(chǎn)生技術(shù)的價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明目的在于提供一種替代抗生素的微生物飼 料添加劑及其制備方法，提高動(dòng)物非特異免疫力，增強(qiáng)機(jī)體抗應(yīng)激能力，激活動(dòng)物生長(zhǎng)潛 能，全面提高生產(chǎn)性能，一攬子解決畜禽產(chǎn)品品質(zhì)低下、風(fēng)味缺失，仔豬腹瀉、母豬便秘、雞 鴨糞便稀溏，飼料原料抗?fàn)I養(yǎng)因子多、消化利用低的問(wèn)題，提供替代抗生素、酶制劑、砷制 劑、益生素的廉價(jià)簡(jiǎn)單實(shí)用方案。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，組分及其重量 百分比為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) 10-40%、釀酒酵母菌(Saccharomyce cerevisiae)10-40%、黑曲霉菌(Aspergillus niger) 10-40 %、米曲霉菌(Aspergillus oryzae) 10-40%。作為優(yōu)選，組分及其重量百分比為枯草芽孢桿菌25%、釀酒酵母菌菌25%、黑曲 霉菌25%、米曲霉菌25%。更進(jìn)一步地，上述各方案中，所述各菌種均由母種經(jīng)固態(tài)發(fā)酵成的生產(chǎn)種再經(jīng)固 態(tài)發(fā)酵而成，其生產(chǎn)種培養(yǎng)基的組分及其重量百分比為麥麩60%、玉米25%、豆粕10%、 棉粕5%。作為優(yōu)選，所述各菌種生產(chǎn)種的培養(yǎng)條件為將培養(yǎng)基放入殺菌斧在IMpa氣壓下 濕熱滅菌1小時(shí)，冷卻到35°C以后，用滅菌好的適量玉米漿和冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水 量在35 %左右后，按1 3 %重量比接種母種，再將培養(yǎng)基裝入淺盤(pán)里，在35-40 °C發(fā)酵48 小時(shí)。作為優(yōu)選，所述各菌種均由母種經(jīng)固態(tài)發(fā)酵成的生產(chǎn)種再經(jīng)固態(tài)發(fā)酵而成，其菌 種培養(yǎng)基的組分及其重量百分比為麥麩65%、玉米20%、豆粕10%、棉粕5%。
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作為優(yōu)選，所述各菌種的培養(yǎng)條件為將培養(yǎng)基用滅菌好的適量玉米漿和冷開(kāi)水 調(diào)配至含水量在35 %左右后，按5 10 %重量比接種生產(chǎn)種，在將培養(yǎng)基裝入發(fā)酵池里，在 35-40。C發(fā)酵48小時(shí)，發(fā)酵完成后將菌種自然曬干或熱風(fēng)吹干。作為優(yōu)選，所述各菌種的母種為液態(tài)發(fā)酵而成，其枯草芽孢桿菌母種培養(yǎng)基的重 量百分比組成為葡萄糖、0.3%牛肉膏、蛋白胨、0.5%食鹽，余量為開(kāi)水；其釀酒酵 母菌母種培養(yǎng)基的組分及其重量比為糖化麥芽汁玉米漿=100 1 ；其黑曲霉和米曲霉 母種培養(yǎng)基的組分及其重量比為土豆汁葡萄糖玉米漿=100 2 1。一種替代抗生素的微生物飼料添加劑的制備方法，步驟為(1)、制備母種制備枯草芽孢桿菌母種母種培養(yǎng)基組分及其重量百分比為葡萄糖、0. 3% 牛肉膏、蛋白胨、0.5%食鹽，最后加開(kāi)水調(diào)至所需容積，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分 鐘，冷卻到35°C以后，按1 3%重量比接種菌株，在30-35°C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)36-48小時(shí)；制備釀酒酵母菌母種母種培養(yǎng)基的組分及其重量比為糖化麥芽汁玉米漿= 100 1，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分鐘，冷卻到35°C以后，按1 3%重量比接種菌株， 在30-35 °C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)24-36小時(shí)；制備黑曲霉和米曲霉母種母種培養(yǎng)基的組分及其重量比為土豆汁葡萄糖玉 米漿=100 2 1，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分鐘，冷卻到35°C以后，按1 3%重量 比接種菌株，在30-35°C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)36-72小時(shí)；(2)、制備各菌種的生產(chǎn)種培養(yǎng)基組分及其重量百分比組成為麥麩60%、玉米25%、豆粕10%、棉粕5%，將 培養(yǎng)基放入殺菌斧在IMpa氣壓下濕熱滅菌1小時(shí)，冷卻到35°C以后，用滅菌好的適量玉米 漿和冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水量在35 %左右后，按1 3 %重量比接種母種，在將培養(yǎng)基 裝入淺盤(pán)里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)；⑶、制備各菌種培養(yǎng)基組分及其重量百分比為麥麩65%、玉米20%、豆粕10%、棉粕5%，將培養(yǎng) 基用滅菌好的適量玉米漿和冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水量在35 %左右后，按5 10 %重量 比接種生產(chǎn)種，在將培養(yǎng)基裝入發(fā)酵池里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)，發(fā)酵完成后將菌種自然 曬干或熱風(fēng)吹干； (4)、制備微生物發(fā)酵床菌種將前述步驟(3)中制得的枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌按一 定比例混合均勻即得本發(fā)明的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其重量百分比為枯 草芽孢桿菌10-40%、釀酒酵母菌10-40%、黑曲霉菌10-40%、米曲霉菌10-40 %。本發(fā)明制作母種的接種菌株由市售購(gòu)得，優(yōu)選為枯草芽孢桿菌菌株從中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心購(gòu)買(mǎi)的20037菌種；釀酒酵母菌菌株從中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心購(gòu)買(mǎi)的31011菌種；黑曲霉菌株從中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心購(gòu)買(mǎi)的40072、40073菌種；米曲霉菌株從中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心購(gòu)買(mǎi)的40001菌種。本發(fā)明的有益效果是核心功效提高動(dòng)物非特異免疫力，增強(qiáng)機(jī)體抗應(yīng)激能力，激活動(dòng)物生長(zhǎng)潛能，全面提高生產(chǎn)性能。是一攬子解決畜禽產(chǎn)品品質(zhì)低下、風(fēng)味缺失，仔豬腹瀉、母豬便秘、雞鴨糞 便稀溏，飼料原料抗?fàn)I養(yǎng)因子多、消化利用低的廉價(jià)簡(jiǎn)單實(shí)用方案。能有效替代抗生素、酶 制劑、砷制劑、益生素。主要功效①含有呈味物質(zhì)，促進(jìn)動(dòng)物采食、補(bǔ)血健胃、解僵止瀉。②顯著提高日增重、生長(zhǎng)速度、成活率和整齊度，減少僵豬、弱豬數(shù)量和死淘率。實(shí) 現(xiàn)提前出欄。③提高飼料消化利用率、大幅度降低料肉比、料蛋比、餌料系數(shù)(約5-12% )。④提高產(chǎn)蛋率、增加蛋重和延長(zhǎng)產(chǎn)蛋高峰期約一個(gè)月左右，可以使產(chǎn)蛋率處于下 降通道的蛋雞產(chǎn)蛋率再度適度回升。⑤廣譜抗菌對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌和多種病毒均有廣譜和而強(qiáng)效的殺 滅作用，有效防治呼吸道和消化道疾病，是防治混合感染的最佳選擇。⑥產(chǎn)生非特異性免疫調(diào)節(jié)因子，提高動(dòng)物免疫能力。⑦提高動(dòng)物健康程度，增強(qiáng)抗應(yīng)激能力，改善動(dòng)物外觀。⑧改善動(dòng)物生殖能力、好配種。⑨可有效改善動(dòng)物胃腸道微生態(tài)環(huán)境、抑制病原菌、抑制惡臭和蒼蠅等蟲(chóng)害發(fā)生， 糞便成型光潤(rùn)，能有效防止防止仔豬腹瀉、母豬便秘、雞鴨糞便稀溏。⑩改善肉質(zhì)、蛋質(zhì)顏色及口感使肉質(zhì)紅潤(rùn)、蛋清濃稠、蛋黃鮮艷，肉、蛋口感更厚 實(shí)和耐咀嚼。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1、安全可靠所選用菌株是農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)部105號(hào)公告允許使用的微生物飼料添加 劑菌種，也是美國(guó)食品與藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用作直接飼喂的微生物。2、成本低廉、節(jié)能環(huán)保、工藝簡(jiǎn)單可控，適合國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖生產(chǎn)的實(shí)際情況，解決了長(zhǎng) 期以來(lái)國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖面臨的技術(shù)與實(shí)際的脫節(jié)問(wèn)題，真正使得技術(shù)得以被接受和實(shí)施，產(chǎn)生技 術(shù)的巨大經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益由于在菌種培育階段，發(fā)酵培養(yǎng)基以廉價(jià)可得的農(nóng)副產(chǎn)品麩皮為 主，玉米、豆粕、棉粕等飼料用糧為輔，成本低廉。而且采用固態(tài)發(fā)酵具有節(jié)水、節(jié)能，工藝簡(jiǎn) 單可控的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，屬于清潔生產(chǎn)技術(shù)。最后的產(chǎn)物養(yǎng)殖使用方便，養(yǎng)殖戶樂(lè)于使用，且效 果良好。3、產(chǎn)物濃度高、代謝產(chǎn)物、生物活性物質(zhì)多、各種生長(zhǎng)因子含量豐富。4、所選用菌株功能獨(dú)特芽孢桿菌的生理學(xué)特性很廣，包括①降解動(dòng)植物來(lái)源的大分子物質(zhì)如纖維素、淀粉和蛋白質(zhì)等；②產(chǎn)生抗菌素。已記載的芽孢桿菌生產(chǎn)的抗菌素就有169種，僅枯草芽孢桿菌就 產(chǎn)生68種抗菌素。這些抗菌素主要是肽類，多作用于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌；③硝化作用；④反硝化作用；⑤固氮；⑥沉淀鐵離子；⑦還原硒和鎂離子等。
⑧耐高溫、抗輻射。酵母菌天然特性①蛋白質(zhì)含量高②核酸、維生素、微量元素豐富③具有多種酶類④酵母菌細(xì)胞壁具有多種活性物質(zhì)⑤酵母菌還含有豐富的酶類，如胃蛋白酶、淀粉酶等黑曲霉的特點(diǎn)生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生淀粉酶、酸性蛋白酶、纖維素酶、果膠酶、葡萄糖氧化酶、檸檬酸、 葡糖酸和沒(méi)食子酸等米曲霉的特點(diǎn)是一類產(chǎn)復(fù)合酶的菌株，除產(chǎn)蛋白酶外，還可產(chǎn)淀粉酶、糖化酶、纖維素酶、植酸酶寸。5、克服了現(xiàn)有技術(shù)的誤區(qū)和偏見(jiàn)，取得預(yù)料不到的技術(shù)效果A、跳出了中國(guó)飼料界人為的把酶制劑和益生菌劃分的誤區(qū)，實(shí)際上益生菌和產(chǎn)酶 菌沒(méi)有截然的界限芽孢桿菌、酵母菌在生產(chǎn)過(guò)程也產(chǎn)生大量酶，黑曲霉、米曲霉不僅是產(chǎn) 生多種酶，而且其菌體也起益生菌的作用。B、跳出了國(guó)內(nèi)生產(chǎn)飼料益生菌、酶制劑遵循所謂的“純菌”、“精酶”的教條約束不 進(jìn)行所謂的“提取”。益生菌生產(chǎn)過(guò)程中的提純生產(chǎn)“純菌”，實(shí)質(zhì)是將發(fā)酵里大量產(chǎn)生的大 量酶、抗菌肽、核酸、維生素等活性物質(zhì)和培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成份統(tǒng)統(tǒng)作為雜質(zhì)除掉，酶制劑生 產(chǎn)過(guò)程中的提純生產(chǎn)“精酶”“單酶”，實(shí)質(zhì)是將其它的酶連同菌體、培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成份，統(tǒng)統(tǒng) 作為雜質(zhì)除掉，實(shí)在是極大的浪費(fèi)因?yàn)檫@些活性物質(zhì)既是動(dòng)物生長(zhǎng)最好的營(yíng)養(yǎng)，也是動(dòng)物 增強(qiáng)免疫力的最好物質(zhì)。而發(fā)酵用原料產(chǎn)用的飼料原料，本身動(dòng)物就可直接食用。這種提 純，既不應(yīng)該，也沒(méi)必要，得不喪失發(fā)酵的飼料原料既構(gòu)成微生物的生活環(huán)境，大大提高微 生物的各種性能，同時(shí)又作為飼料使用，經(jīng)過(guò)微生物處理，富含營(yíng)養(yǎng)，更易吸收等，兩者的結(jié) 合使得其各自發(fā)揮了遠(yuǎn)超原來(lái)的作用，相互構(gòu)成的系統(tǒng)又發(fā)揮了預(yù)料不到的效果。C、固態(tài)發(fā)酵起源于中國(guó)，具有幾千年的歷史。在中國(guó)，固態(tài)發(fā)酵，特別是傳統(tǒng)固態(tài) 發(fā)酵是發(fā)酵工業(yè)中古老而又落后工藝的代名詞。甚至，在發(fā)酵工程或生化工程的教科書(shū)中， 也很少提到固態(tài)發(fā)酵。在我們盲目將“液態(tài)發(fā)酵”視為現(xiàn)代科技，對(duì)固態(tài)發(fā)酵不屑一顧的時(shí) 候，具有諷刺意味的是固態(tài)發(fā)酵法也受到美法荷等國(guó)的青睞，他們也在探索應(yīng)用固態(tài)發(fā)酵 法生產(chǎn)酶制劑，有的已形成生產(chǎn)規(guī)模。已“中為洋用”固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品如奧特奇公司的特威寶 SSF在中國(guó)大為暢銷(xiāo)。但實(shí)際上固態(tài)發(fā)酵、液態(tài)發(fā)酵優(yōu)劣互有，現(xiàn)代固態(tài)發(fā)酵法里也有液態(tài) 發(fā)酵過(guò)程。本發(fā)明傳承中國(guó)傳統(tǒng)固態(tài)發(fā)酵之精髓，吸收西方液態(tài)發(fā)酵之長(zhǎng)處，應(yīng)用現(xiàn)代微生 物學(xué)，選育菌種，并不斷純化、復(fù)壯，經(jīng)液、固培養(yǎng)發(fā)酵，低溫干燥等生產(chǎn)工藝生產(chǎn)。最后均采 用現(xiàn)代固態(tài)發(fā)酵體系，產(chǎn)品是非遺傳修飾的、采用天然方法生產(chǎn)的具有獨(dú)特特性的多酶復(fù) 合物和多菌復(fù)合物；與液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)的菌(酶)相比，發(fā)酵底物更接近飼糧，作用更自然、更適 合對(duì)各種天然飼料降解。與液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)的菌(酶)相比，具有良好的物理化學(xué)特性，包括耐熱性提聞。與液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)的菌(酶)相比，微生物是在接近于自然條件的狀況下生 長(zhǎng)，產(chǎn)生一些液體培養(yǎng)中產(chǎn)生不了的酶和其它生物活性物質(zhì)。與液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)的菌(酶)相比，菌(酶)活力更高、更能在小腸復(fù)雜的底 物環(huán)境中保持強(qiáng)大的活性。保證了所研制的飼用微生物添加劑產(chǎn)品含活菌量高、活性強(qiáng)、休眠狀態(tài)好，復(fù)蘇繁 殖快、效果好等特點(diǎn)；保證了所研制的飼用微生物添加劑產(chǎn)品酶活高，對(duì)應(yīng)底物廣，應(yīng)用效果顯著，其產(chǎn) 品安全高效、無(wú)殘留、無(wú)毒副作用。6、配伍獨(dú)特眾所周知，微生物的配比無(wú)法像普通無(wú)機(jī)、有機(jī)般較隨意的混合搭配 即可，出于生物的特性，微生物間會(huì)有不同的協(xié)同乃至抑制作用，搭配得當(dāng)，相互協(xié)同形成 共生發(fā)展的微生物群落，反之則某種、某幾種微生物無(wú)法發(fā)揮作用乃至無(wú)法成活，同時(shí)研究 其配比與其食物鏈、依存抑制關(guān)系，使得各種微生物間構(gòu)成最佳生物群落，這是微生物技術(shù) 的關(guān)鍵，是最為體現(xiàn)創(chuàng)造性的所在。本發(fā)明提供的微生物發(fā)酵床菌種及其制備方法經(jīng)反復(fù) 的研究、試驗(yàn)，挑選合適的菌種及其恰當(dāng)?shù)呐浔?，用芽孢桿菌、酵母菌、黑曲霉、米曲霉合理 搭配，利用芽孢桿菌產(chǎn)生抗菌素的特點(diǎn)替代抗生素；利用酵母菌細(xì)胞壁具有多種活性物質(zhì) 提高動(dòng)物免疫力，減低疾病發(fā)生率；利用黑曲霉、米曲霉產(chǎn)生大量的酶，提高飼料消化利用 率，發(fā)揮1+1 > 2的微生物協(xié)同作用，形成有效的益生微生物群落。
具體實(shí)施例方式一種替代抗生素的微生物飼料添加劑的制作方法，其步驟為(1)制備母種制備枯草芽孢桿菌母種母種培養(yǎng)基的組分及其重量百分比組成為葡萄糖、 0. 3%牛肉膏、1 %蛋白胨、0. 5%食鹽，最后加開(kāi)水調(diào)至所需容積，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌 20分鐘，冷卻到35°C以后，按1 3%重量比接種菌株，在30-35°C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)36-48小 時(shí)；制備釀酒酵母菌母種母種培養(yǎng)基的組分及其重量比組成為糖化麥芽汁玉米 漿=100 1，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分鐘，冷卻到35°C以后，按1 3%重量比接種 菌株，在30-35°C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)24-36小時(shí)；麥芽汁的制備方法用需要的麥芽汁劑量2倍的水、0. 5倍的麥芽在55-63°C糖 化4-6小時(shí)后用四層紗布過(guò)濾即成麥芽汁濾液(用0. 02摩爾/升碘液測(cè)定為黃色至無(wú)色 時(shí)，糖化結(jié)束)，用波美比重計(jì)檢測(cè)糖化液中糖濃度，將濾液用水稀釋到10 15波林，調(diào)pH 至 6. 4。制備黑曲霉和米曲霉母種母種培養(yǎng)基的組分及其重量比組成為土豆汁葡萄 糖玉米漿=100 2 1，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分鐘，冷卻到35°C以后，按1 3% 重量比接種菌株，在30-35°C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)36-72小時(shí)；土豆汁的制備方法將土豆去皮、去芽，稱重(需要達(dá)到需制作溶液量20%的重 量)，切成0. 5厘米厚片，加水至需要溶液量，煮沸20 30分鐘(能被玻璃棒戳破即可) 后，四層紗布過(guò)濾即得土豆汁，補(bǔ)足水分至需要溶液量。
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(2)、制備各菌種的生產(chǎn)種培養(yǎng)基的組分及其重量百分比組成為麥麩60%、玉米25%、豆粕10%、棉粕5%， 將培養(yǎng)基放入殺菌斧在IMpa氣壓下濕熱滅菌1小時(shí)，冷卻到35°C以后，用滅菌好的適量玉 米漿(約10% )和冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水量在35%左右后，按1 3%重量比接種母 種，在將培養(yǎng)基裝入淺盤(pán)里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)；⑶、制備各菌種培養(yǎng)基的組分及其重量百分比組成為麥麩65%、玉米20%、豆粕10%、棉粕5%， 將培養(yǎng)基用滅菌好的適量玉米漿(約10% )和冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水量在35%左右 后，按5 10%重量比接種生產(chǎn)種，在將培養(yǎng)基裝入發(fā)酵池里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)，發(fā) 酵完成后將菌種自然曬干或熱風(fēng)吹干；(4)、制備替代抗生素的微生物飼料添加劑將前述步驟(3)中制得的枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌按一 定配方混合均勻即得本發(fā)明的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其重量百分比組成 為枯草芽孢桿菌10-40%、釀酒酵母菌10-40%、黑曲霉菌10-40%、米曲霉菌10-40%。實(shí)施例1 按上述方法制得一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其組分及其重量百分比組 成為枯草芽孢桿菌25%、釀酒酵母菌25%、黑曲霉菌25%、米曲霉菌25%。試驗(yàn)例1替代抗生素的微生物飼料添加劑應(yīng)用在斷奶仔豬上效果很好。試驗(yàn)在陜西興平市店張鎮(zhèn)張興社養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行，時(shí)間為2009年7月13日至2009年 11月21曰。1.試驗(yàn)材料與方法1.1試驗(yàn)材料上述生產(chǎn)的替代抗生素的微生物飼料添加劑。1.2試驗(yàn)動(dòng)物與分組選用陜西興平市店張鎮(zhèn)張興社養(yǎng)豬場(chǎng)10頭胎次相近(3-5胎)、產(chǎn)期相近、產(chǎn)仔數(shù) 相近的哺乳母豬PIC母豬，隨機(jī)分為2個(gè)處理，即對(duì)照組和試驗(yàn)組。1. 3試驗(yàn)期產(chǎn)仔至80日齡1.4試驗(yàn)日糧設(shè)計(jì)根據(jù)斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)需要配制基礎(chǔ)日糧，其營(yíng)養(yǎng)水平與生產(chǎn)實(shí)踐 相接近，其原料組成和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。對(duì)照組即基礎(chǔ)日糧+抗生素；試驗(yàn)組即基礎(chǔ)日糧 +上述生產(chǎn)的替代抗生素的微生物飼料添加劑，具體設(shè)計(jì)方案見(jiàn)表2。2.飼養(yǎng)管理2. 1試驗(yàn)由專人負(fù)責(zé)，嚴(yán)格按照試驗(yàn)要求進(jìn)行管理。2. 2每個(gè)保育欄的地板都裝有板條，仔豬可通過(guò)飲水器和自動(dòng)投料器進(jìn)行自由飲 水和采食，哺乳仔豬按7日齡開(kāi)始補(bǔ)料(飼料外購(gòu))，30日齡一次斷奶，斷奶后趕走母豬，仔 豬留原欄飼養(yǎng)。2. 3.試驗(yàn)操作規(guī)程2. 3. 1以組為單位在30日齡和80日齡分別在晨前喂料前空腹稱斷奶窩重和試驗(yàn)
結(jié)束窩重
2. 3. 2以組為單位詳細(xì)記錄仔豬的耗料量。2. 3. 3以組為單位每天早晨詳細(xì)記錄每窩仔豬腹瀉頭、次，計(jì)算腹瀉率。2. 3. 4最后計(jì)算全期的平均日采食量、平均增重、腹瀉率等生產(chǎn)性能指標(biāo)。表1基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平
權(quán)利要求
一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于組分及其重量百分比為枯草芽孢桿菌10 40％、釀酒酵母菌10 40％、黑曲霉菌10 40％、米曲霉菌10 40％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于組分及 其重量百分比為枯草芽孢桿菌25 %、釀酒酵母菌菌25 %、黑曲霉菌25 %、米曲霉菌25 %。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于所 述各菌種均由母種經(jīng)固態(tài)發(fā)酵成的生產(chǎn)種再經(jīng)固態(tài)發(fā)酵而成，其生產(chǎn)種培養(yǎng)基的組分及其 重量百分比為麥麩60%、玉米25%、豆粕10%、棉粕5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于所述各 菌種生產(chǎn)種的培養(yǎng)條件為將培養(yǎng)基放入殺菌斧在IMpa氣壓下濕熱滅菌1小時(shí)，冷卻到 35°C以后，用滅菌好的適量玉米漿和冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水量在35%左右后，按1 3%重量比接種母種，再將培養(yǎng)基裝入淺盤(pán)里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于所 述各菌種均由母種經(jīng)固態(tài)發(fā)酵成的生產(chǎn)種再經(jīng)固態(tài)發(fā)酵而成，其菌種培養(yǎng)基的組分及其重 量百分比為麥麩65%、玉米20%、豆粕10%、棉粕5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于所述各 菌種的培養(yǎng)條件為將培養(yǎng)基用滅菌好的適量玉米漿和冷開(kāi)水調(diào)配至含水量在35%左右 后，按5 10%重量比接種生產(chǎn)種，在將培養(yǎng)基裝入發(fā)酵池里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)，發(fā) 酵完成后將菌種自然曬干或熱風(fēng)吹干。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于所述各 菌種的母種為液態(tài)發(fā)酵而成，其枯草芽孢桿菌母種培養(yǎng)基的重量百分比組成為葡萄 糖、0.3%牛肉膏、蛋白胨、0.5%食鹽，余量為開(kāi)水；其釀酒酵母菌母種培養(yǎng)基的組分及 其重量比為糖化麥芽汁玉米漿=100 1 ；其黑曲霉和米曲霉母種培養(yǎng)基的組分及其重 量比為土豆汁葡萄糖玉米漿=100 2 1。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其特征在于所述各 菌種的母種為液態(tài)發(fā)酵而成，其枯草芽孢桿菌母種培養(yǎng)基的重量百分比組成為葡萄 糖、0. 3%牛肉膏、蛋白胨、0. 5%食鹽，余量為開(kāi)水；其釀酒酵母菌母種培養(yǎng)基的組分及 其重量比為糖化麥芽汁玉米漿=100 1 ；其黑曲霉和米曲霉母種培養(yǎng)基的組分及其重 量比為土豆汁葡萄糖玉米漿=100 2 1。
9.一種替代抗生素的微生物飼料添加劑的制備方法，其特征在于步驟為(1)、制備母種制備枯草芽孢桿菌母種母種培養(yǎng)基組分及其重量百分比為葡萄糖、0.3%牛肉 膏、蛋白胨、0.5%食鹽，最后加開(kāi)水調(diào)至所需容積，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分鐘，冷 卻到35°C以后，按1 3%重量比接種菌株，在30-35°C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)36-48小時(shí)；制備釀酒酵母菌母種母種培養(yǎng)基的組分及其重量比為糖化麥芽汁玉米漿= 100 1，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分鐘，冷卻到35°C以后，按1 3%重量比接種菌株， 在30-35 °C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)24-36小時(shí)；制備黑曲霉和米曲霉母種母種培養(yǎng)基的組分及其重量比為土豆汁葡萄糖玉米漿 =100 2 1，培養(yǎng)液在120°C高溫滅菌20分鐘，冷卻到35°C以后，按1 3%重量比接 種菌株，在30-35°C恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)36-72小時(shí)；(2)、制備各菌種的生產(chǎn)種培養(yǎng)基組分及其重量百分比組成為麥麩60 %、玉米25 %、豆粕10 %、棉粕5 %，將培養(yǎng) 基放入殺菌斧在IMpa氣壓下濕熱滅菌1小時(shí)，冷卻到35°C以后，用滅菌好的適量玉米漿和 冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水量在35 %左右后，按1 3 %重量比接種母種，在將培養(yǎng)基裝入 淺盤(pán)里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)；(3)、制備各菌種培養(yǎng)基組分及其重量百分比為麥麩65 %、玉米20 %、豆粕10 %、棉粕5 %，將培養(yǎng)基用 滅菌好的適量玉米漿和冷開(kāi)水將培養(yǎng)基調(diào)配至含水量在35 %左右后，按5 10 %重量比接 種生產(chǎn)種，在將培養(yǎng)基裝入發(fā)酵池里，在35-40°C發(fā)酵48小時(shí)，發(fā)酵完成后將菌種自然曬干 或熱風(fēng)吹干；(4)、制備微生物發(fā)酵床菌種將前述步驟(3)中制得的枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌按一定比 例混合均勻即得本發(fā)明的一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，其重量百分比為枯草芽 孢桿菌10-40%、釀酒酵母菌10-40%、黑曲霉菌10-40%、米曲霉菌10-40 %。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種替代抗生素的微生物飼料添加劑，主要由枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、黑曲霉菌、米曲霉菌等組成；其制備方法為各菌種的母種由液態(tài)發(fā)酵而成，生產(chǎn)種由母種固態(tài)發(fā)酵而成，生產(chǎn)種進(jìn)一步固態(tài)發(fā)酵得到菌種，將菌種按一定比例混合即得本微生物飼料添加劑。本發(fā)明能提高動(dòng)物非特異免疫力，增強(qiáng)機(jī)體抗應(yīng)激能力，激活動(dòng)物生長(zhǎng)潛能，全面提高生產(chǎn)性能，一攬子解決畜禽產(chǎn)品品質(zhì)低下、風(fēng)味缺失，仔豬腹瀉、母豬便秘、雞鴨糞便稀溏，飼料原料抗?fàn)I養(yǎng)因子多、消化利用低的問(wèn)題，提供替代抗生素、酶制劑、砷制劑、益生素的廉價(jià)簡(jiǎn)單實(shí)用方案。
文檔編號(hào)A23K1/17GK101965912SQ20101027404
公開(kāi)日2011年2月9日 申請(qǐng)日期2010年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月6日
發(fā)明者董善銳 申請(qǐng)人:成都和諧生物科技有限公司