專利名稱：真姬菇菌株及真姬菇子實體的生產方法
技術領域：
本發(fā)明涉及難以發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株、以及使用該菌株生產真姬菇子實體的方法。而且，本發(fā)明涉及一種篩選難以發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的方法。
背景技術：
近年來，已開發(fā)了蘑菇的人工栽培技術，從而提供各種食用蘑菇的子實體(香菇、 金針菇、平菇、滑菇、舞茸、真姬菇、荷葉菇、占地菇等)。通常，蘑菇的人工栽培方法有原木栽培和菌床栽培，在原木栽培中，將櫟樹、櫸樹、 柞樹等原木用作碎塊木(《 C木)；在菌床栽培中，使用固體狀栽培用培養(yǎng)基，該固體狀栽培用培養(yǎng)基是這樣形成的將米糠、小麥麩、玉米皮等營養(yǎng)源混合在鋸末、玉米穗軸粉末等中而形成的培養(yǎng)基填充在瓶、袋、箱等容器中。在這些栽培方法中，在大型設備的工廠系統(tǒng)中推行的是使用聚乙烯制的瓶的菌床栽培方法，因為該方法比較容易實現(xiàn)大型化、機械化。 但是，在大型設備的工廠系統(tǒng)中，會看到在少量栽培中不?？吹降哪⒐皆耘鄷r的各種不利情況。例如，在真姬菇中，有時會看到在培養(yǎng)成熟期菌床上的種菌部分變色為褐色而硬化的現(xiàn)象。另外，此時，頻繁地伴隨著產生腐敗臭。產生這些現(xiàn)象時，多觀察到這樣的例子 搔菌后，直到菌床面都變成褐色，以及菌絲不再生或者再生極慢以至于不出芽，即，不能收獲到子實體。這種現(xiàn)象被稱為種菌硬化癥，由于使子實體的生產效率降低，因此成為重要問題。但是，種菌硬化癥的原因或機制尚不清楚，另外，作為應對方法，也只不過是嘗試著降低培養(yǎng)溫度等策略(例如，非專利文獻1及2)。[現(xiàn)有技術文獻][非專利文獻][非專利文獻1]菌床tO 二 栽培障害事例集，第64-66頁，日本長野縣經(jīng)濟事業(yè)農業(yè)協(xié)同聯(lián)合會，平成7年3月發(fā)行[非專利文獻2]長野県野菜花t試験場報告，第11號，2346頁，2001年

發(fā)明內容
發(fā)明要解決的問題鑒于上述現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的在于，提供一種在真姬菇的大規(guī)模生產中與現(xiàn)有的真姬菇菌株相比不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株、以及使用該菌株生產真姬菇子實體的方法。另外，還提供一種篩選不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的方法。解決問題的手段本發(fā)明人對于種菌硬化癥(其在真姬菇子實體的大規(guī)模生產中被認為是重要課題)進行了潛心研究，結果出乎意料地發(fā)現(xiàn)，通過使用大量含有硅酸鋁鎂之類的鎂化合物 (通常，為了使真姬菇子實體的產量增加而少量使用硅酸鋁鎂之類的鎂化合物)的固體狀栽培用培養(yǎng)基(菌床栽培用培養(yǎng)基或培養(yǎng)基)來進行真姬菇子實體的栽培，可以人為地引起與在大規(guī)模生產中發(fā)生的種菌硬化癥同樣的現(xiàn)象。另外發(fā)現(xiàn)，使用該固體狀栽培用培養(yǎng)基可以篩選不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株，并且發(fā)現(xiàn)使用該方法非常不容易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株。而且還發(fā)現(xiàn)，通過使用該菌株，可以在大規(guī)模生產中生產出產量好的穩(wěn)定的真姬菇子實體，從而完成本發(fā)明?？傮w上，本發(fā)明涉及以下方面[1] 一種真姬菇菌株，在使用固體狀栽培用培養(yǎng)基的栽培中，固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變，其中所述的固體狀栽培用培養(yǎng)基以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分，并含有以干燥重量比計為約6. 4重量％的硅酸鋁鎂。[2]如[1]所述的真姬菇菌株，在使用由針葉樹鋸屬、米糠、玉米穗軸粉末、大豆皮、麥麩和鎂化合物形成的固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變。[3]如[1]或[2]所述的真姬菇菌株，其選自Hypsizygus marmoreus K-4975 (FERM BP-11321) > Hypsizygus marmoreus K-4979 (FERM BP-11322) > Hypsizygus marmoreus Κ-4980(FERM BP-11323)、Hypsizygus marmoreus K-4981(FERM BP-11324)、或者為來源于這些菌株的變異株并且與這些菌株具有同等性質的菌株。[4] 一種真姬菇子實體的生產方法，使用了 [1]所述的真姬菇菌株。[5] 一種不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的篩選方法，包括使用固體狀栽培用培養(yǎng)基以栽培真姬菇菌株，其中所述的固體狀栽培用培養(yǎng)基以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分，并含有選自以干燥重量比計為約5. 2重量％以上的硅酸鋁鎂、以干燥重量比計為約0. 5重量％以上的氧化鎂、以及以干燥重量比計為約2重量％以上的氧化鋁鎂氫氧化物 (水酸化7 > S f 夕‘才、*々Λ )中的至少1種鎂化合物。[6]如[5]所述的真姬菇菌株的篩選方法，其中所述固體狀栽培用培養(yǎng)基由針葉樹鋸屑、米糠、玉米穗軸粉末、大豆皮、麥麩、以及鎂化合物形成。[7]如[5]或[6]所述的真姬菇菌株的篩選方法，其為選擇這樣的真姬菇菌株的篩選方法，該真姬菇菌株中，固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變。作為上述[3]所述的發(fā)明的一個實施方案，提供一種真姬菇菌株，其為來源于選自下述菌株中的至少一者的變異株并且與這些菌株具有同等性質=Hypsizygus marmoreus K-4975 (FERM BP-11321) > Hypsizygus marmoreus K-4979 (FERM BP-11322) > Hypsizygus marmoreus K-4980(FERM BP-11323)、Hypsizygus marmoreus K-4981(FERM BP-11324)，這些菌株在使用以針葉樹鋸屑及米糠作為主要構成成分、并且含有以干燥重量比計為約6. 4 重量％的硅酸鋁鎂的固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，提供一種不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株，并提供使用該菌株進行穩(wěn)定的真姬菇子實體的大規(guī)模商業(yè)生產方法。另外，還提供不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的簡便的篩選方法。
具體實施例方式在本申請說明書中，所謂“種菌硬化癥”是指，在真姬菇子實體的生產中，在將種菌接種至固體狀栽培用培養(yǎng)基上之后，在培養(yǎng)成熟期固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分變色為褐色而硬化并伴隨腐敗臭、搔菌后在菌床表面菌絲不再生或再生極慢的現(xiàn)象。產生了該現(xiàn)象的固體狀栽培用培養(yǎng)基甚至不發(fā)芽，即，不能收獲子實體。在本申請說明書中，對于真姬菇的菌床栽培方法沒有特別限定，可以列舉(例如) 使用固體狀栽培用培養(yǎng)基的栽培方法，該固體狀栽培用培養(yǎng)基是通過向瓶、袋、箱等容器中填充在鋸末、玉米穗軸粉末等中混合有米糠、小麥麩、玉米皮等營養(yǎng)源的固體栽培用培養(yǎng)基而獲得的。作為固體狀栽培用培養(yǎng)基，可以使用在栽培真姬菇子實體時所使用的公知的固體狀栽培用培養(yǎng)基。可以列舉(例如)以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分的固體狀栽培用培養(yǎng)基，優(yōu)選的是，可以列舉含有針葉樹鋸屑、米糠、玉米穗軸粉末、大豆皮、麥麩和鎂化合物的固體狀栽培用培養(yǎng)基。在本申請說明書中，所謂“以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分”是表示在固體狀栽培用培養(yǎng)基中，作為培養(yǎng)基基材，針葉樹鋸屑為主要成分，作為營養(yǎng)材料，米糠為主要成分。即，表示作為培養(yǎng)基基材，僅使用針葉樹鋸屑、或相對于其他的培養(yǎng)基基材更多地使用針葉樹鋸屑；作為營養(yǎng)材料，僅使用米糠、或相對于其他的營養(yǎng)材料更多地使用米糠。例如，在瓶栽培中，在使用850mL瓶的情況下，針葉樹鋸屑以干燥重量計為50 95克，優(yōu)選為 60 75克；米糠以干燥重量計為45 110克，優(yōu)選為45 90克。在本申請說明書中，對于所謂的“鎂化合物”沒有特別限定，只要是含有鎂的化合物即可，可以使用鎂的含氧酸鹽、商化物、氧化物、氫氧化物、無機鹽或有機酸鹽等。例如， 作為含氧酸鹽，可列舉硅酸鋁鎂、碳酸鎂、硝酸鎂、硫酸鎂、碳酸氫鎂、過碳酸鎂；作為鹵化物，可列舉氟化鎂、氟化氫鎂、氯化鎂、溴化鎂、碘化鎂；作為氧化物，可列舉氧化鎂；作為氫氧化物，可列舉氫氧化鎂、氧化鋁鎂氫氧化物(氫氧化鋁和氫氧化鎂的共沉物)；作為無機鹽，可列舉鋁酸鎂、氫化鎂、硫化鎂、硫化氫鎂(氫硫化鎂)、過錳酸鎂、鉻酸鎂、氯酸鎂等。這些鎂化合物可以使用1種，也可以將多種組合使用。在本發(fā)明的不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的篩選方法中，特別優(yōu)選使用硅酸鋁鎂、氧化鎂或氧化鋁鎂氫氧化物。另外，該篩選方法中的固體狀栽培用培養(yǎng)基中的鎂化合物含量因使用的鎂化合物不同而不同，只要適當選擇即可，例如，在使用硅酸鋁鎂的情況下，相對于固體狀栽培用培養(yǎng)基的總干燥重量， 硅酸鋁鎂以干燥重量比計為約5. 2重量％ (例如，在市售品的干燥減量為18%的情況下，該市售品的用量以濕重量計為約12g/850mL瓶)以上、優(yōu)選約5. 2 8. 4重量％ (例如，在市售品的干燥減量為18%的情況下，該市售品的用量以濕重量計為約12 20g/850mL瓶)、 進一步優(yōu)選為約6.4重量％ (例如，在市售品的干燥減量為18%的情況下，該市售品的用量以濕重量計約15g/850mL瓶)；在使用氧化鎂的情況下，相對于固體狀栽培用培養(yǎng)基的總干燥重量，氧化鎂以干燥重量比計為約0.5重量％ (例如，市售品的情況下，約lg/850mL瓶) 以上、優(yōu)選約0.5 3重量％ (例如，市售品的情況下，約1 6g/850mL瓶)、進一步優(yōu)選約0.8重量％ (例如，市售品的情況下，約1.5g/850mL瓶)；在使用氧化鋁鎂氫氧化物的情況下，相對于固體狀栽培用培養(yǎng)基的總干燥重量，氧化鋁鎂氫氧化物以干燥重量比計為約 2重量％ (例如，在市售品的干燥減量為10%的情況下，該市售品的用量以濕重量計為約 4g/850mL瓶)以上、優(yōu)選約2 4重量％ (例如，在市售品的干燥減量為10%的情況下，該市售品的用量以濕重量計為約4 8g/850mL瓶)、進一步優(yōu)選約2. 5重量％ (例如，在市售品的干燥減量為10%的情況下，該市售品的用量以濕重量計約5g/850mL瓶)。
此外，除非特別說明，否則在本申請說明書中，“％”和“比率”均表示以重量為基準的值?？梢酝ㄟ^作為菌床栽培方法的瓶栽培、袋栽培、箱栽培等來實施本發(fā)明的不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的篩選方法。作為一例，對利用瓶栽培的本發(fā)明篩選方法進行描述。真姬菇的菌床栽培方法由菌床培養(yǎng)基配制、裝瓶、殺菌、種菌的接種、菌床培養(yǎng)、搔菌(搔成饅頭型)、發(fā)芽、生長繁殖、收獲等各工序組成(例如，日本特開平05-268942號公報)。這些工序中，在菌床培養(yǎng)基配制工序中，將鎂化合物(例如硅酸鋁鎂)添加至固體狀栽培用培養(yǎng)基中，使得相對于固體狀栽培用培養(yǎng)基的總干燥重量，鎂化合物以干燥重量比計為約5. 2重量％。在本發(fā)明的不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的篩選方法中，對于大量含有鎂化合物的固體狀栽培用培養(yǎng)基沒有特別限定，可以使用在栽培真姬菇子實體時所使用的公知的固體狀栽培用培養(yǎng)基。在本發(fā)明中，特別優(yōu)選使用以針葉樹鋸屑(例如，杉材)及米糠為主要成分的培養(yǎng)基，例如，可以使用由針葉樹鋸屑、米糠、玉米穗軸粉末、大豆皮、麥麩、鎂化合物構成的固體狀栽培用培養(yǎng)基。接著，進行裝瓶以后的工序。作為所接種的種菌，可以使用打算進行是否不易發(fā)生種菌硬化癥篩選的真姬菇菌株的液體種菌或固體種菌。作為可以實施本發(fā)明的不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株篩選方法的真姬菇菌株，可以列舉以榆生離褶傘(Lyophyllum ulmarium)表示的菌株、以Hypsizygus marmoreus表示的菌株、以及適于栽培的這些菌株的變異株、以這些菌株作為親株并利用公知的雜交育種而得到的雜交株等。是否不易發(fā)生種菌硬化癥可以通過觀察選自搔菌前后的菌床表面狀態(tài)、搔菌后的膜再生狀態(tài)、子實體的生長繁殖狀態(tài)中的任一種狀態(tài)或全部狀態(tài)來進行篩選。例如，在容易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇種菌的情況下，在搔菌前的菌床面的狀態(tài)下，形成為褐色和/或產生異臭的狀態(tài)。另外，在這種情況下，搔菌后的菌床面也大多形成為褐色和/或產生異臭的狀態(tài)。而且，在搔菌后的膜再生中，形成為膜完全不再生或者僅一部分膜再生的狀態(tài)。在子實體的生長繁殖狀態(tài)下，與使用不含有或少量含有鎂化合物的固體狀栽培用培養(yǎng)基的情況相比，子實體的產量極低或者子實體的品質(形狀)降低。如下述實施例所示，在搔菌后的菌床面發(fā)生褐變的情況下，可以看到，即使正常地產生了子實體，其產量也降低。因此， 在大量含有鎂化合物的固體狀栽培用培養(yǎng)基中，固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變的菌株可以稱為不易發(fā)生種菌硬化癥的優(yōu)良菌株。通過選擇不會形成上述狀態(tài)的真姬菇菌株，可以篩選出不易發(fā)生或不發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株。另外，如后述的實施例中記載的那樣，通過與現(xiàn)有已知的真姬菇菌株進行比較，也可以篩選出不易發(fā)生或不發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株。在本發(fā)明的篩選方法中，優(yōu)選每1菌株在同一時期、同一培養(yǎng)基、同一條件下進行5個以上、優(yōu)選8個以上的栽培，篩選是否不易發(fā)生或不發(fā)生種菌硬化癥。作為使用本發(fā)明方法而篩選出的真姬菇菌株，可列舉以下菌株?！?Hypsizygus marmoreus K-4975 于 2009 年 9 月 2 日(日本國內保藏日)，保藏在日本國家高級工業(yè)科學技術學院國際專利生物保藏中心(地址日本國茨城縣筑波市東 1 丁目1番地1中央第6，郵編305-8566)，日本國內保藏編號FERM P-21841，其后，基于國際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約，于2010年12月M日以接收編號FERMABP-11321接收，并且于2011年2月10日國際保藏，國際保藏編號FERM BP-11321· Hypsizygus marmoreus K-4979 于 2009 年 9 月 2 日(日本國內保藏日)，保藏在日本國家高級工業(yè)科學技術學院國際專利生物保藏中心(地址日本國茨城縣筑波市東 1 丁目1番地1中央第6，郵編305-8566)，日本國內保藏編號FERM P-21842，其后，基于國際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約，于2010年12月M日以接收編號FERM ABP-11322接收，并且于2011年2月10日國際保藏，國際保藏編號FERM BP-11322· Hypsizygus marmoreus K-4980 于 2009 年 9 月 2 日(日本國內保藏日)，保藏在日本國家高級工業(yè)科學技術學院國際專利生物保藏中心(地址日本國茨城縣筑波市東 1 丁目1番地1中央第6，郵編305-8566)，日本國內保藏編號FERM P-21843，其后，基于國際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約，于2010年12月M日以接收編號FERM ABP-11323接收，并且于2011年2月10日國際保藏，國際保藏編號FERM BP-11323· Hypsizygus marmoreus K-4981 于2009年9 月 2 日(日本國內保藏日)，保藏在日本國家高級工業(yè)科學技術學院國際專利生物保藏中心(地址日本國茨城縣筑波市東 1 丁目1番地1中央第6，郵編305-8566)，日本國內保藏編號FERM P-21844，其后，基于國際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約，于2010年12月M日以接收編號FERM ABP-113M接收，并且于2011年2月10日國際保藏，國際保藏編號FERM BP-11324將干燥重量為62克的鋸屑(杉材)、濕重量為60克的米糠(水分含量約10% )、 濕重量為30克的玉米穗軸粉末(水分含量約10% )、濕重量為20克的大豆皮(水分含量約10% )、濕重量為20克的麥麩(水分含量約10% )和濕重量為15克的硅酸鋁鎂(干燥減量為18%的情況下)混合，然后，調制成含水率為65%的固體狀栽培用培養(yǎng)基，利用該固體狀栽培用培養(yǎng)基在25°C下進行的栽培中，以上這些菌株的種菌部分不發(fā)生褐變。另外，具有與上述菌株同等性質(S卩，不易發(fā)生種菌硬化癥的性質)的變異株也包含在本發(fā)明中，所述變異株為以以上這些菌株作為親株、且采用公知的方法(例如，對上述菌株的孢子進行變異處理、或者將上述菌株的菌絲與其他菌株的菌絲進行雜交處理)而得到的變異株。這樣的變異株是本領域技術人員通過常規(guī)方法能夠容易取得的。此外，關于該變異株是否具有與上述菌株同等性質，可以根據(jù)本申請說明書所記載的方法來篩選。而且，與選自在使用以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分、并且含有以干燥重量比計約6. 4 重量％的硅酸鋁鎂的固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，固體狀栽培用培養(yǎng)基的種菌部分不發(fā)生褐變的上述菌株中的至少1個菌株具有同等性質的真姬菇菌株也包含在本發(fā)明中。示出 Hypsizygus marmoreus K-4975 (FERM BP-11321)的各種性質。(1)在麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)使用麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基(麥芽提取物5%、瓊脂3% )。至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為52mm。菌絲白色而稠密，生出氣生菌絲。至第12天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲白色而稠密，以直線狀延伸。背面同樣未發(fā)生變色。(2)在馬鈴薯·葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)使用 PDA 瓊脂培養(yǎng)基(Difco Potato Dextrose Agar Becton, Dickinson and Company USA公司生產)。至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為55mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。至第12天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。至第20天，培養(yǎng)皿的整個表面被稠密的菌絲覆蓋，像墊子狀凸起。氣生菌絲非常多。背面同樣未發(fā)生變色。
(3)在Czapek Dox瓊脂培養(yǎng)基)中的生長繁殖狀態(tài)使用Czapek Dox 瓊脂培養(yǎng)基(NaNO2 0. 2%, K2HPO4 0.1%, MgSO4 · 7Η20 0. 05%, KCl 0.05%, FeSO4 · 7H20 0. 001 %、蔗糖3%、瓊脂1. 5% )。至第7天有中等程度的生長繁殖，菌落直徑為45mm。菌絲呈樹狀伸長，非常稀薄，氣生菌絲少。至第10天，菌落直徑為 65mm;至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲呈樹狀、白色、稀薄。背面同樣未發(fā)生變色。(4)在Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)使用Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基(葡萄糖4%、蛋白胨0. 1%、瓊脂1.5% )。至第10 天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為31mm。菌絲呈白色而稀薄的綿狀。至第20天，菌落直徑為55mm。菌絲白色而稠密。背面同樣未發(fā)生變色。(5)在燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)使用燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(向30克燕麥片中加入小于或等于IOOOml的水，在熱水浴上加熱煮沸1小時。用2至3層紗布將其過濾，然后向所得到的濾液中加水至1000ml，再加入2%的瓊脂)。至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為54mm。菌絲多以分枝狀伸長，氣生菌絲多。至第10天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，生出大量的綿狀氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(6)在合成毛霉菌瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)使用合成毛霉菌瓊脂培養(yǎng)基(葡萄糖4%、天冬酰胺0.2%、K2HPO4 0. 05 %, MgSO4 · 7H20 0. 025g/L、硫胺0. 5mg/L、瓊脂1. 5% )0至第10天有中等程度的生長繁殖，菌落直徑為50mm。菌絲為白色，呈直線狀伸長。至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，產生氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(7)在Ypk瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)使用Ypk瓊脂培養(yǎng)基(可溶性淀粉1.5%、酵母提取物0.4%、K2HPO4 0.1%, MgSO4 ·7Η20 .(^^、瓊脂〗1^)。至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為64mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。呈墊子狀生長繁殖。至第10天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖， 生出大量氣生菌絲。背面同樣未發(fā)生變色。(8)在酚氧化酶檢測用培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)在添加有0. 5%沒食子酸的PDA瓊脂培養(yǎng)基中，至第7天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為27mm。菌絲呈白色綿狀，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基發(fā)生褐變，褐變半徑為^mm。至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，在菌絲表面觀察觀察到菌絲有濃淡，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基全部發(fā)生褐變。背面同樣觀察到有褐變。(9)最適宜的生長繁殖溫度在PDA瓊脂培養(yǎng)基上接種經(jīng)過前培養(yǎng)的直徑5mm的瓊脂種菌，在25°C下進行預培養(yǎng)，使得菌絲再生。其后，在各溫度下培養(yǎng)7天，測定一個方向上的菌絲的伸長量。結果，通過測定7天的菌絲伸長，最佳生長繁殖的溫度為M ^rc。另外，在5°c下能多少看到一些生長繁殖，但在35°c下幾乎不生長繁殖。(10)最適宜生長繁殖的pH 將PGY液體培養(yǎng)基(葡萄糖2%、多聚蛋白胨0.2%、酵母提取物0.2%、K2HPO4 0. 5%, MgSO4 · 7H20 0.5% )每次60ml分注于IOOml用的三角燒瓶中，殺菌，用酸或堿調節(jié)各PH后，接種直徑5mm的瓊脂種菌，在25°C下靜置培養(yǎng)15天，然后測定菌體的干燥重量。 結果，最適宜生長繁殖的pH為6至8。另外，本菌株能夠生長繁殖的pH范圍為3. 5至10。以下對菌株在與上述相同的培養(yǎng)基及條件下的各種性質進行研究。示出 Hypsizygus marmoreus K-4979 (FERM BP-11322)的各種性質。(1)在麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為46mm。菌絲白色而稠密，生出氣生菌絲。至第13天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲白色而稠密，以直線狀延伸。背面同樣未發(fā)生變色。(2)在馬鈴薯·葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為53mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。 至第12天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。至第20天，培養(yǎng)皿的整個表面被稠密的菌絲覆蓋，像墊子狀凸起。氣生菌絲非常多。背面同樣未發(fā)生變色。(3)在Czapek Dox瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為33mm。菌絲呈樹狀伸長，非常稀薄，氣生菌絲少。至第10天，菌落直徑為50mm;至第17天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲呈樹狀、白色、稀薄。背面同樣未發(fā)生變色。(4)在Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第10天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為34mm。菌絲呈白色稀薄的綿狀。至第 20天，菌落直徑為65mm。菌絲白色而稠密。背面同樣未發(fā)生變色。(5)在燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為51mm。菌絲多以分枝狀伸長，氣生菌絲多。至第12天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，生出大量綿狀氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(6)在合成毛霉菌瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第10天有中等程度的生長繁殖，菌落直徑為55mm。菌絲為白色，呈直線狀伸長。 至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，產生氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(7)在Ypk瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為62mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。 呈墊子狀生長繁殖。至第10天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，生出大量氣生菌絲。背面同樣未發(fā)生變色。(8)在酚氧化酶檢測用培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為21mm。菌絲呈白色綿狀，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基發(fā)生褐變，褐變半徑為26mm。至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，在菌絲表面觀察到菌絲有濃淡，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基全部發(fā)生褐變。背面同樣觀察到有褐變。(9)最適宜生長繁殖的溫度測定7天的菌絲的伸長量，最佳的生長繁殖溫度為M ^TC。另外，在5°C下多少能夠看到一些生長繁殖，但在35°C下幾乎不生長繁殖。(10)最適宜生長繁殖的pH
最適宜生長繁殖的pH為6至8。另外，本菌株能夠生長繁殖的pH范圍為3. 5至 10。示出 Hypsizygus marmoreus K—4980 (FERM BP—11323)的各種性質。(1)在麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為45mm。菌絲白色而稠密，生出氣生菌絲。至第13天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲白色而稠密，以直線狀延伸。背面同樣未發(fā)生變色。(2)在馬鈴薯·葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為47mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。 至第12天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。至第20天，培養(yǎng)皿的整個表面被稠密的菌絲覆蓋，像墊子狀凸起。氣生菌絲非常多。背面同樣未發(fā)生變色。(3)在Czapek Dox瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為38mm。菌絲呈樹狀伸長，非常稀薄，氣生菌絲少。至第10天，菌落直徑為55mm;至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲呈樹狀、白色、稀薄。背面同樣未發(fā)生變色。(4)在Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第10天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為41mm。菌絲呈白色稀薄的綿狀。至第 20天，菌落直徑為61mm。菌絲白色而稠密。背面同樣未發(fā)生變色。(5)在燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為46mm。菌絲多以分枝狀伸長，氣生菌絲多。至第13天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，生出大量綿狀氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(6)在合成毛霉菌瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第10天有中等程度的生長繁殖，菌落直徑為47mm。菌絲為白色，呈直線狀伸長。 至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，產生氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(7)在Ypk瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為59mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。 呈墊子狀生長繁殖。至第10天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，生出大量氣生菌絲。背面同樣未發(fā)生變色。(8)在酚氧化酶檢測用培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為四讓。菌絲呈白色的綿狀，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基發(fā)生褐變，褐變半徑為27mm。至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，在菌絲表面觀察到菌絲有濃淡，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基全部發(fā)生褐變。背面同樣觀察到有褐變。(9)最適宜生長繁殖的溫度測定7天的菌絲伸長量，最佳生長繁殖的溫度為M ^TC。另外，在5°C下多少能夠看到一些生長繁殖，但在35°C下幾乎不生長繁殖。(10)最適宜生長繁殖的pH 最適宜生長繁殖的pH為6至8。另外，本菌株能夠進行生長繁殖的pH范圍為3. 5至10。示出 Hypsizygus marmoreus K—4981 (FERM BP-11324)的各種性質。(1)在麥芽提取物瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為48mm。菌絲白色而稠密，生出氣生菌絲。至第12天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲白色而稠密，以直線狀延伸。背面同樣未發(fā)生變色。(2)在馬鈴薯·葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為48mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。 至第13天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。至第20天，培養(yǎng)皿的整個表面被稠密的菌絲覆蓋，像墊子狀凸起。氣生菌絲非常多。背面同樣未發(fā)生變色。(3)在Czapek Dox瓊脂培養(yǎng)基(25 °C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為30mm。菌絲呈樹狀伸長，非常稀薄，氣生菌絲少。至第10天，菌落直徑為45mm;至第17天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖。菌絲呈樹狀、白色、稀薄。背面同樣未發(fā)生變色。(4)在Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基(25 °C )中的生長繁殖狀態(tài)至第10天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為36mm。菌絲呈白色稀薄的綿狀。至第 20天，菌落直徑為68mm。菌絲白色而稠密。背面同樣未發(fā)生變色。(5)在燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為48mm。菌絲多以分枝狀伸長，氣生菌絲多。至第12天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，生出大量綿狀氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(6)在合成毛霉菌瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第10天有中等程度的生長繁殖，菌落直徑為50mm。菌絲為白色，呈直線狀伸長。 至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，產生氣生菌絲。菌絲為白色。背面同樣未發(fā)生變色。(7)在Ypk瓊脂培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天生長繁殖旺盛，菌落直徑為55mm。菌絲白色而稠密，生出大量氣生菌絲。 呈墊子狀生長繁殖。至第10天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，生出大量氣生菌絲。背面同樣未發(fā)生變色。(8)在酚氧化酶檢測用培養(yǎng)基(25°C )中的生長繁殖狀態(tài)至第7天有小程度的生長繁殖，菌落直徑為30mm。菌絲呈白色的綿狀，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基發(fā)生褐變，褐變半徑為27mm。至第15天，菌絲在整個培養(yǎng)皿上生長繁殖，在菌絲表面觀察到菌絲有濃淡，產生氣生菌絲。培養(yǎng)基全部發(fā)生褐變。背面同樣觀察到有褐變。(9)最適宜生長繁殖的溫度測定7天的菌絲伸長量，最佳生長繁殖的溫度為M 26。C。另外，在5°C下多少能夠看到一些生長繁殖，但在35°C下幾乎不生長繁殖。(10)最適宜生長繁殖的pH 最適宜生長繁殖的pH為6至8。另外，本菌株能夠進行生長繁殖的pH范圍為3. 5至10。這4種菌株中的任一種在與其他3種菌株對峙培養(yǎng)中均形成帶線。另外，這些菌株中的任一種在與榆生離褶傘(1J才才74，AA )M-817 KFERM BP-1415)及各種公知的菌株的對峙培養(yǎng)中也形成帶線，它們顯然是新菌株。另外，在使用以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分、并包含以干燥重量比計為約6.4重量％ (例如，在市售品的干燥減量為18%的情況下，約15g/850mL瓶)的硅酸鋁鎂的固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，這 4種菌株均為不發(fā)生種菌硬化癥的新菌株。另外，在使用以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分、并包含以干燥重量比計為約6.4重量％ (例如，在市售品的干燥減量為18%的情況下， 以濕重量計為約15g/850mL瓶)的硅酸鋁鎂的固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，與榆生離褶傘(^才7^，/^々^· ^々")M-817KFERM BP-1415)相比，上述任意一種菌株都為高產量。此外，即使在通常的培養(yǎng)基(即，未大量含有鎂化合物的培養(yǎng)基)中進行栽培的情況下，與現(xiàn)有菌株相比，在上述菌株中種菌硬化癥的發(fā)生頻率也低。另外，榆生離褶傘M-8171 (Lyophyllum ulmarium M-8171)于 1987 年 7 月 17 日， 保藏在日本國通商產業(yè)省工業(yè)技術院微生物工業(yè)技術研究所(地址日本國茨城果筑波郡谷田部町1 丁目1番3，郵編305 ；即，現(xiàn)在的日本國家高級工業(yè)科學技術學院國際專利生物保藏中心(地址日本國茨城縣筑波市東1 丁目1番地1中央第6，郵編305-8566))，國際保藏編號FERM BP-1415。以上列舉瓶栽培的實例進行了說明，但是本發(fā)明并不局限于上述利用瓶栽培的篩選方法。使用通過上述篩選方法而獲得的菌株，可以利用瓶栽培、袋栽培、箱栽培等來生產真姬菇子實體。作為一例，對利用瓶栽培的真姬菇子實體的生產方法進行描述，該方法由菌床培養(yǎng)基調制、裝瓶、殺菌、種菌的接種、菌床培養(yǎng)、搔菌(搔成饅頭型)、發(fā)芽、生長繁殖、收獲等各工序組成。例如，作為進行日本特開平05-268942號公報中所記載的菌床栽培時的種菌，可以使用通過上述篩選方法而獲得的菌株。[實施例]下面利用實施例更進一步具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅限于以下的實施例范圍。實施例1將以干燥重量計為62g的鋸末(杉材)、濕重量為60g的米糠(水分含量10% )、濕重量為30g的玉米穗軸粉末(水分含量10% )、濕重量為20g的大豆皮(水分含量10% )、 濕重量為20g的麥麩(水分含量10% )充分混合，以2. 5g/瓶或15g/瓶(相對于固體狀栽培用培養(yǎng)基的總干燥重量，以干燥重量比計分別為約1. 1重量％、約6. 4重量％ )的量向所得到的混合物中添加硅酸鋁鎂(干燥減量為18%，富士化學工業(yè)株式會社生產，商品名) ^ 'J >)，將水分含量調節(jié)為65%，然后壓裝在聚丙烯制的850mL容量的廣口培養(yǎng)瓶(1 口一 e > S-850，信越農材株式會社生產)。在壓裝物表面的中央，開直徑Icm左右的接種孔部，蓋上蓋子后，在120°C下進行高壓滅菌60分鐘，將冷卻至常溫的物質作為固體狀栽培用培養(yǎng)基。對本發(fā)明人持有的11株真姬菇(Hypsizygus marmoreus)菌株實施雙列雜交， 共得到434株雜交株。進行將各雜交株接種于上述培養(yǎng)基上的栽培試驗，選拔出4株真姬菇(Hypsizygus marmoreus) K-4975 (FERM BP-11321)、K-4979 (FERM BP-11322)、 K-4980 (FERMBP-11323), K-4981 (FERM BP-113 )，它們是在含有 15g/850mL 瓶的硅酸鋁鎂的固體狀栽培用培養(yǎng)基中在搔菌前菌床表面沒有發(fā)生褐變的新的雜交株。配制上述的含有2. 5g/850mL瓶或15g/850mL瓶的硅酸鋁鎂的固體狀栽培用培養(yǎng)基。在固體狀栽培用培養(yǎng)基中分別接種K-4975、K-4979、K-4980、K-4981、K-4529 (由上述雜交株不經(jīng)過選拔工序而選出的菌株)、利用公知的方法由JA全農長野市售的真姬菇分離得到的比較用的菌株(以下記載為市售菌株)、以及榆生離褶傘M-8171(FERMBP-1415)的另外制成的固體種菌，每種菌分別接種8條，在25°C、濕度55%的條件下培養(yǎng)菌絲體30天，進一步培養(yǎng)45天，得到子實體原基。其后，摘去菌帽，將菌床面上部的菌絲層Icm殘留在中央部以進行搔菌，檢查搔菌時菌床表面的狀態(tài)。結果示于表1。[表1]
權利要求
1.一種真姬菇菌株，在使用固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變，其中所述的固體狀栽培用培養(yǎng)基以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分，并含有以干燥重量比計為約6. 4重量％的硅酸鋁鎂。
2.根據(jù)權利要求1所述的真姬菇菌株，在使用由針葉樹鋸屑、米糠、玉米穗軸粉末、大豆皮、麥麩和硅酸鋁鎂形成的固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，種菌部分不發(fā)生褐變。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的真姬菇菌株，其選自=Hypsizygusmarmoreus K-4975 (FERM BP-11321) > Hypsizygus marmoreus K-4979 (FERM BP-11322) > Hypsizygus marmoreus K-4980(FERM BP-11323)、Hypsizygus marmoreus K-4981(FERM BP-11324)、或者為來源于這些菌株的變異株并且與這些菌株具有同等性質的菌株。
4.一種真姬菇子實體的生產方法，使用了權利要求1所述的真姬菇菌株。
5.一種不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的篩選方法，包括使用固體狀栽培用培養(yǎng)基以栽培真姬菇菌株，其中所述的固體狀栽培用培養(yǎng)基以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分，并由選自以干燥重量比計為約5. 2重量％以上的硅酸鋁鎂、以干燥重量比計為約0. 5重量％以上的氧化鎂、以及以干燥重量比計為約2重量％以上的氧化鋁鎂氫氧化物中的至少 1種鎂化合物形成。
6.根據(jù)權利要求5所述的真姬菇菌株的篩選方法，其中所述固體狀栽培用培養(yǎng)基由針葉樹鋸屑、米糠、玉米穗軸粉末、大豆皮、麥麩、以及鎂化合物形成。
7.根據(jù)權利要求5或6所述的真姬菇菌株的篩選方法，其為篩選出固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變的真姬菇菌株的方法。
全文摘要
本發(fā)明提供不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株、使用該菌株的真姬菇子實體的生產方法、以及不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的篩選方法。本發(fā)明提供一種真姬菇菌株、使用該菌株的真姬菇子實體的生產方法，其中，所述真姬菇菌株在使用以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分、并且含有以干燥重量比計為約6.4重量％的硅酸鋁鎂的固體狀栽培用培養(yǎng)基進行的栽培中，固體狀栽培用培養(yǎng)基表面的種菌部分不發(fā)生褐變。本發(fā)明還提供一種不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株的篩選方法，該方法使用了以針葉樹鋸屑及米糠為主要組成成分、并含有大量鎂化合物的固體狀栽培用培養(yǎng)基。利用本發(fā)明的篩選方法，能夠預先篩選出不易發(fā)生種菌硬化癥的真姬菇菌株，保證大規(guī)模商業(yè)生產的真姬菇子實體的成品率，能夠有效地生產優(yōu)質的真姬菇子實體。
文檔編號A01G1/04GK102204476SQ20111008429
公開日2011年10月5日 申請日期2011年3月31日 優(yōu)先權日2010年3月31日
發(fā)明者前田真奈美, 小島理惠, 日下部克彥 申請人:寶生物工程株式會社