專利名稱：耐熱β-甘露聚糖酶、其編碼基因、重組菌和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種耐熱￠-甘露聚糖酶、其編碼基因、重組菌和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
甘露聚糖是植物半纖維素的重要組分，是由P-l，4-D吡喃甘露糖連接而成的線狀多糖。甘露聚糖具有高親水性，在單胃動(dòng)物的消化道內(nèi)大量吸水，增加了消化道內(nèi)容物的粘度，抵抗胃腸的蠕動(dòng)，直接影響動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收。豆柏中甘露聚糖的含量在1.2%以上。近年來(lái)，隨著豆類產(chǎn)品(豆柏等)在動(dòng)物飼糧中的廣泛應(yīng)用，甘露聚糖的抗?fàn)I養(yǎng)作用也越來(lái)越受到重視。目前，我國(guó)大豆進(jìn)口量為3000萬(wàn)噸以上，其中80%以上用于飼料。甘露聚糖的完全酶解需要P -甘露聚糖酶、P -甘露糖苷酶、P -葡糖苷酶、a -半乳糖苷酶和脫乙酰酶的協(xié)同作用，其中￠-甘露聚糖酶在飼料中的應(yīng)用比較廣泛?！?甘露聚糖酶是一類能水解甘露聚糖的半纖維素酶類，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中。有報(bào)道，在大豬飼料中添加￠-甘露聚糖酶可以提高平均日增重10%以上；在肉雞飼料中添加￠-甘露聚糖酶可以提高飼料的轉(zhuǎn)化率4% _6%，提高雞的抗病力，改善肉用雞的健康狀況。目前已知的P-甘露聚糖酶耐熱性很差，無(wú)法抵抗飼料制粒溫度，限制了 P -甘露聚糖酶在飼料中的使用。因此，研制耐熱性的￠-甘露聚糖酶具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種耐熱￠-甘露聚糖酶、其編碼基因、重組菌和應(yīng)用。本發(fā)明提供的耐熱P -甘露聚糖酶(MANN-cxl蛋白)，獲自硫色曲霉P _甘露聚糖酶隨機(jī)突變后篩選得到的一株突變體，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列I的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有￠-甘露聚糖酶活性的由序列I衍生的蛋白質(zhì)。為了使(a)中的MANN-cxl蛋白便于純化，可在由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表I所示的標(biāo)簽。表I標(biāo)簽的序列
權(quán)利要求
1.一種蛋白質(zhì)，是如下(a)或(b) (a)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (b)將序列I的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有0-甘露聚糖酶活性的由序列I衍生的蛋白質(zhì)。
2.編碼權(quán)利要求I所述蛋白的基因。
3.如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于所述基因是如下I)至3)中任一所述的DNA分子 1)序列表中序列2所不的DNA分子； 2)在嚴(yán)格條件下與I)限定的DNA序列雜交且編碼具有￠-甘露聚糖酶活性蛋白的DNA分子; 3)與I)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼具有￠-甘露聚糖酶活性蛋白的DNA分子。
4.含有權(quán)利要求2或3所述基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
5.如權(quán)利要求4所述的重組表達(dá)載體，其特征在于所述重組表達(dá)載體為在載體pPICZ a A的多克隆位點(diǎn)插入序列表的序列2所示的DNA得到的重組質(zhì)粒。
6.如權(quán)利要求4所述的重組菌，其特征在于所述重組菌為將權(quán)利要求5所述重組質(zhì)粒導(dǎo)入畢赤酵母X-33得到的重組菌。
7.如權(quán)利要求6所述的重組菌，其特征在于所述重組菌為巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)x-33/PIC-MANNcxl CGMCC No. 4626。
8.—種生產(chǎn)￠-甘露聚糖酶的方法，是發(fā)酵權(quán)利要求4或6或7所述的重組菌，得到 甘露聚糖酶。
9.權(quán)利要求I所述蛋白在制備詞料添加劑中的應(yīng)用。
10.一種飼料添加劑，它的活性成分為權(quán)利要求I所述蛋白。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種耐熱β-甘露聚糖酶、其編碼基因、重組菌和應(yīng)用。本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)，是一種耐熱性β-甘露聚糖酶，為如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(b)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有β-甘露聚糖酶活性的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。本發(fā)明還提供了所述蛋白的編碼基因以及含有所述編碼基因的工程菌(重組巴斯德畢赤酵母)。本發(fā)明提供的β-甘露聚糖酶具有比活性高、酸穩(wěn)定性好、催化pH值范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，適于用作豬、雞等單胃動(dòng)物的添加劑。
文檔編號(hào)A23K1/165GK102732493SQ20111008645
公開(kāi)日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2011年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月7日
發(fā)明者崔栩, 曹云鶴, 李德發(fā), 王春林, 陸文清 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)