專利名稱：一種高效誘導棉花體胚發(fā)生與植株再生的方法及其培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種高效誘導棉花體胚發(fā)生與植株再生的方法及其培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
棉花是重要的經(jīng)濟作物，其細胞和組織培養(yǎng)研究已取得了很大的進展，并初步建立和完善了棉花組織培養(yǎng)的技術(shù)體系。棉花組織培養(yǎng)、離體再生作為棉花細胞工程和基因工程的基礎(chǔ)技術(shù)，在棉花遺傳改良中有著極為重要的作用。然而，棉花是較難通過體細胞胚胎發(fā)生途徑獲得再生植株的作物，表現(xiàn)為在組織培養(yǎng)中基因型依賴性強且周期長，重復性差。另外，在棉花體細胞胚胎發(fā)生過程中，體胚發(fā)生效率低且畸形胚胎頻率高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高效誘導棉花體胚發(fā)生與植株再生的方法及其培養(yǎng)基。本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基為用于獲得棉花體細胞再生植株的成套培養(yǎng)基，分為只由活性成分組成的便于存放的貯存型培養(yǎng)基和由所述貯存型培養(yǎng)基和水配成的即用型培養(yǎng)基。所述用于獲得棉花體細胞再生植株的成套培養(yǎng)基，其中的貯存型培養(yǎng)基，由獨立包裝的培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C組成；所述培養(yǎng)基A為由改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖和凝固劑組成的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基B為由所述改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖和氨基酸添加物組成的
培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基C為由所述改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖、氨基酸添加物和凝固劑組成的培養(yǎng)基；所述改良MS基本培養(yǎng)基由下述質(zhì)量份的營養(yǎng)成分組成NH4NO3 825 份、KNO3 3800 份、Iffl2PO4 170 份、CaCl2 · 2H20 440 份和 MgSO4 · 7H20370 份；KI 0. 83 份、Na2MoO4 · 2H20 0. 25 份、H3BO3 6. 2 份、CuSO4 · 5H20 0. 025 份、MnSO4 · 4H20 22. 3 份、CoCl2 · 6H20 0. 025 份和 ZnSO4 · 4H20 8. 6 份；Na2EDTA 37. 3 份和 FeSO4 · 7H20 27. 8 份；煙酸0. 5份、肌醇100份、鹽酸硫胺素0. 1份、鹽酸吡哆素0. 5份和甘氨酸2. 0份；所述激素為吲哚丁酸和激動素，所述吲哚丁酸和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足0. 3份-1. 0份所述吲哚丁酸/825份NH4NO3,具體可為0. 3份所述吲哚丁酸/825份NH4NO3或0. 6份所述吲哚丁酸/825份NH4NO3或1. 0份所述吲哚丁酸/825份NH4NO3 ；所述激動素和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足0. 05份-0. 3份所述激動素/825份NH4NO3,具體可為0. 05份所述激動素/825份NH4NO3或0. 15份所述激動素/825份NH4NO3或0. 3份所述激動素/825 份NH4NO3 ；所述吲哚丁酸與所述激動素在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的質(zhì)量份之比均為(7. 00-3. 00) 1，具體可為6 1或4 1或3. 33 1;所述葡萄糖和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足25000份-35000份所述葡萄糖/825份NH4NO3,具體可為25000份所述葡萄糖/825 份NH4NO3或30000份所述葡萄糖/825份NH4NO3或35000份所述葡萄糖/825份NH4NO3 ；所述氨基酸添加物為谷氨酰胺和天冬氨酸，所述谷氨酰胺和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足300份-700份所述谷氨酰胺/825份NH4NO3, 具體可為300份所述谷氨酰胺/825份NH4NO3或500份所述谷氨酰胺/825份NH4NO3或700 份所述谷氨酰胺/825份NH4NO3 ；所述天冬氨酸和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足300份-700份所述天冬氨酸/825份NH4NO3,具體可為300份所述天冬氨酸/825份NH4NO3或500份所述天冬氨酸/825份NH4NO3或700份所述天冬氨酸/825 份 NH4NO3 ；所述凝固劑具體可為植物凝膠或瓊脂。所述用于獲得棉花體細胞再生植株的成套培養(yǎng)基，其中的即用型培養(yǎng)基，由獨立包裝的培養(yǎng)基Al、培養(yǎng)基Bl和培養(yǎng)基Cl組成；所述培養(yǎng)基Al為向液體培養(yǎng)基D中加入凝固劑得到的固體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基D由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η200· 44g/L,MgSO4 ·7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3B036 . 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、 MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/ L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、吲哚丁酸 0. 3mg/L_l. Omg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 6mg/L 或 1. Omg/L、 激動素 0. 05mg/L-0. 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. :3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或 25g/L 或 30g/L 或 35g/L ；所述培養(yǎng)基Bl為液體培養(yǎng)基，由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下=NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、 MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/ L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、吲哚丁酸 0. 3mg/L_l. Omg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 6mg/L 或 1. Omg/L、 激動素 0. 05mg/L-0. 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. :3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或 25g/L 或 30g/L 或 35g/L、谷氨酰胺 0. 3g/L_0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L 和天冬氨酸 0. 3g/L-0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L ；所述培養(yǎng)基Cl為向液體培養(yǎng)基E中加入凝固劑得到的固體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基E由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下=NH4NO3 0. 825g/L、 KNO3 3. 8g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KIO. 83mg/L、 Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、 CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、 煙酸0. 5mg/L、肌醇100mg/L、鹽酸硫胺素0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸 0. 3mg/L-l. Omg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 6mg/L 或 1. Omg/L、激動素 0. 05mg/L_0· 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. :3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或 25g/L 或 30g/L 或 35g/L、谷氨酰胺 0. 3g/L-0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L 和天冬氨酸 0. 3g/L_0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L ；
所述吲哚丁酸與所述激動素在所述培養(yǎng)基D、所述培養(yǎng)基Bi、所述培養(yǎng)基E、所述培養(yǎng)基Al和所述培養(yǎng)基Cl中的質(zhì)量比為(7.00-3.00) 1，具體可為6 1或4 1或 3·33 · Io所述培養(yǎng)基D、所述培養(yǎng)基Bi、所述培養(yǎng)基E、所述培養(yǎng)基Al和所述培養(yǎng)基Cl的 pH 值均為 5. 6-6. 2 或 5. 6 或 5. 8 或 6. 2 ；所述凝固劑為植物凝膠，所述植物凝膠在所述培養(yǎng)基Al和所述培養(yǎng)基Cl中的濃度均為 2. 4g/L-3. Og/L 或 2. 4g/L 或 2. 6g/L 或 3. Og/L。利用所述的成套培養(yǎng)基按照包括如下步驟的方法將棉花愈傷組織培養(yǎng)成再生植株1)將棉花愈傷組織在所述培養(yǎng)基Al中培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織；2)將所述步驟1)中獲得的所述胚性愈傷組織培養(yǎng)于所述培養(yǎng)基Bl中，獲得原胚；3)將所述步驟幻中獲得的所述原胚在所述培養(yǎng)基Cl中培養(yǎng)，獲得棉花再生植株。所述步驟2~)包括如下步驟將所述步驟1)中獲得的所述胚性愈傷組織在所述培養(yǎng)基Bl中進行第一次懸浮培養(yǎng)，使所述胚性愈傷組織增殖，再轉(zhuǎn)接入所述培養(yǎng)基Bl中進行第二次懸浮培養(yǎng)，得到所述原胚。所述步驟2、中，所述第一次懸浮培養(yǎng)和所述第二次懸浮培養(yǎng)的溫度、振蕩頻率和培養(yǎng)時間如下23-30°C、70-130轉(zhuǎn)/分鐘振蕩(旋轉(zhuǎn)半徑為12mm)培養(yǎng)10-14天，具體可為10天或12天或14天。所述第一次懸浮培養(yǎng)和所述第二次懸浮培養(yǎng)的光照條件為每天M小時中光照 14-18小時，光照強度為16001UX，其余時間黑暗。所述轉(zhuǎn)接是將第一次懸浮培養(yǎng)得到的粒徑小于50目，如60目或70目的愈傷組織接入所述培養(yǎng)基Bi。所述步驟1)的培養(yǎng)在如下條件進行23-30°C、光照條件為每天對小時中光照 14-18小時，光照強度為16001UX，其余時間黑暗；所述步驟3)的培養(yǎng)在如下條件進行23-30°C、光照條件為每天M小時中光照 14-18小時，光照強度為16001UX，其余時間黑暗。所述棉花愈傷組織是通過如下誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)棉花子葉苗的下胚軸得到的向液體培養(yǎng)基F中加入凝固劑得到的固體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基F由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下=NH4NO3 1. 65g/L、KNO3 1. 9g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、 CuSO4 ·5Η20 0. 025mg/L、MnS04 ·4Η20 22. 3mg/L、CoCl2 ·6Η200· 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/ L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. 0mg/L、2，4_D 0. 05mg/L_0· 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. 3mg/L、吲哚乙酸 0. 05mg/L_0. 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. 3mg/L、 激動素 0. 05mg/L-0. 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. :3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或 25g/L 或 30g/L 或 35g/L ；所述誘導培養(yǎng)基中的所述2，4_D、所述吲哚乙酸和所述激動素的質(zhì)量之比為 1:1:1;
所述誘導培養(yǎng)基的pH值為5. 6-6. 2或5. 6或5. 8或6. 2。本發(fā)明所提供的方法及其培養(yǎng)基尤其適用于陸地棉品種。本發(fā)明所提供的棉花體細胞再生方法及其培養(yǎng)基不受棉花基因型的限制；培養(yǎng)周期短，70天即可獲得再生棉花苗；胚性愈傷誘導率高，可達72. 14% ；體細胞胚胎發(fā)生率高， 可達47. 71%;成苗率高，可達18.本發(fā)明所提供的棉花體細胞再生方法及其培養(yǎng)基使棉花具高效獲得大量體細胞胚胎與植株再生的能力，從而為棉花的細胞工程、基因工程以及棉花遺傳改良等相關(guān)研究提供重要平臺。


圖1為珂字棉201固-液交替培養(yǎng)誘導體胚發(fā)生與植株再生過程。其中，A為愈傷誘導和增殖階段愈傷狀態(tài)；B為胚性愈傷誘導和增殖階段愈傷狀態(tài)；C為胚性愈傷組織懸浮細胞系預增殖的愈傷形態(tài)；D為胚性愈傷組織懸浮細胞增殖和體細胞胚胎發(fā)生階段愈傷及體胚形態(tài)，其中，a為增殖中胚性愈傷組織懸浮細胞形態(tài)，b為體胚發(fā)生過程中原胚的形態(tài)； E為體細胞胚胎發(fā)育階段體胚形態(tài)；F為從體細胞胚胎中獲得的再生植株。圖2為冀無2031固-液交替培養(yǎng)誘導體胚發(fā)生與植株再生過程。其中，A為愈傷誘導和增殖階段愈傷狀態(tài)；B為胚性愈傷誘導和增殖階段愈傷狀態(tài)；C為胚性愈傷組織懸浮細胞系預增殖的愈傷形態(tài)；D為胚性愈傷組織懸浮細胞增殖和體細胞胚胎發(fā)生階段愈傷及體胚形態(tài)，其中，a為增殖中胚性愈傷組織懸浮細胞形態(tài)，b為體胚發(fā)生過程中原胚的形態(tài)； E為體細胞胚胎發(fā)育階段形態(tài)；F為從體細胞胚胎中獲得的再生植株。圖3為農(nóng)大58固-液交替培養(yǎng)誘導體胚發(fā)生與植株再生過程。其中，A為愈傷誘導和增殖階段愈傷狀態(tài)；B為胚性愈傷誘導和增殖階段愈傷狀態(tài)；C為胚性愈傷組織懸浮細胞系預增殖的愈傷形態(tài)；D為胚性愈傷組織懸浮細胞增殖和體細胞胚胎發(fā)生階段愈傷及體胚形態(tài)，其中，a為增殖中胚性愈傷組織懸浮細胞形態(tài)，b為體胚發(fā)生過程中原胚的形態(tài)；E 為體細胞胚胎發(fā)育階段形態(tài)；F為從體細胞胚胎中獲得的再生植株。
具體實施例方式下面以三個基因型的棉花品種為例，闡明本發(fā)明的技術(shù)方案。在本發(fā)明的第一個實施例中，棉花珂字棉201使用的成套培養(yǎng)基為培養(yǎng)基Al、 培養(yǎng)基 Bl 和培養(yǎng)基 Cl。其中，培養(yǎng)基 Al =NH4NO3 0. 825g/L、KNO3 3. 8g/L、KH2PO4 0. 17g/ L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H200. 25mg/L、 H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、 ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H2027. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 IOOmg/ L、鹽酸硫胺素0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸0. :3mg/L、激動素 0. 05mg/L、葡萄糖 25g/L，植物凝膠 2. 4g/L 和水，ρΗ5· 6 ；培養(yǎng)基Bl =NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0. 44g/L、 MgSO4 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸0. :3mg/L、激動素0. 05mg/L、葡萄糖25g/L、谷氨酰胺0. 3g/L、天冬氨酸0. 3g/L和水，ρΗ5· 6 ；培養(yǎng)基Cl =NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0. 44g/L、 MgSO4 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸0. :3mg/L、激動素0. 05mg/L、葡萄糖25g/L、谷氨酰胺0. 3g/L、天冬氨酸0. 3g/L、植物凝膠2. 4g/L和水，pH5. 6 ；誘導培養(yǎng)基=NH4NO31. 65g/L、KNO3 1. 9g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/ L、MgS04.7H20 0.37g/L、KI 0. 83mg/L, Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuS04 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. 0mg/L、2，4-D0. 05mg/L、吲哚乙酸 0. 05mg/L、激動素 0. 05mg/L、葡萄糖為25g/L、植物凝膠2. 4g/L和水，pH值為5. 6。利用上述成套培養(yǎng)基和誘導培養(yǎng)基按照包括如下步驟的方法將棉花愈傷組織培養(yǎng)成再生植株1)將在誘導培養(yǎng)基中形成的棉花愈傷組織在所述培養(yǎng)基Al中培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織；2)將所述步驟1)中獲得的所述胚性愈傷組織培養(yǎng)于所述培養(yǎng)基Bl中，獲得原胚；3)將所述步驟幻中獲得的所述原胚在所述培養(yǎng)基Cl中培養(yǎng)，獲得棉花再生植株。其中，在第一次懸浮培養(yǎng)和第二次懸浮培養(yǎng)的溫度、振蕩頻率、培養(yǎng)時間、光照條件如下23°C、70轉(zhuǎn)/分鐘振蕩(旋轉(zhuǎn)半徑為12mm)培養(yǎng)10天、每天M小時中光照14小時，光照強度為16001UX，其余時間黑暗。轉(zhuǎn)接是將第一次懸浮培養(yǎng)得到的粒徑小于60目的愈傷組織接入所述培養(yǎng)基Bi。所述步驟1)和所述步驟幻的培養(yǎng)在如下條件進行23°C、每天M小時中光照14 小時，光照強度為16001UX，其余時間黑暗。在本發(fā)明的第二個實施例中，棉花品種是冀無2031使用的成套培養(yǎng)基為培養(yǎng)基 Al、培養(yǎng)基 Bl 和培養(yǎng)基 Cl。其中，培養(yǎng)基 Al =NH4NO3 0. 825g/L、KNO3 3. 8g/L、KH2PO4O. 17g/ L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H200. 25mg/L、 H3BO 36. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、 ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H2027. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 IOOmg/ L、鹽酸硫胺素0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、吲哚丁酸0. 6mg/L、激動素 0. 15mg/L、葡萄糖 30g/L，植物凝膠 2. 6g/L 和水，ρΗ5· 8 ；培養(yǎng)基Bl =NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0. 44g/L、 MgSO4 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、吲哚丁酸0. 6mg/L、激動素0. 15mg/L、葡萄糖30g/L、谷氨酰胺0. 5g/L、天冬氨酸0. 5g/L和水，ρΗ5· 8 ；
培養(yǎng)基Cl =NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0. 44g/L、 MgSO4 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸0. 6mg/L、激動素0. 15mg/L、葡萄糖30g/L、谷氨酰胺0. 5g/L、天冬氨酸0. 5g/L、植物凝膠2. 6g/L和水，pH5. 8 ；誘導培養(yǎng)基=NH4NO31. 65g/L、KNO3 1. 9g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/ L、MgS04.7H20 0.37g/L、KI 0. 83mg/L, Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuS04 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. 0mg/L、2，4-D0. 15mg/L、吲哚乙酸 0. 15mg/L、激動素 0. 15mg/L、葡萄糖為30g/L、植物凝膠2. 6g/L和水，pH值為5. 8。利用上述成套培養(yǎng)基和誘導培養(yǎng)基按照包括如下步驟的方法將棉花愈傷組織培養(yǎng)成再生植株1)將在誘導培養(yǎng)基中形成的棉花愈傷組織在所述培養(yǎng)基Al中培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織；2)將所述步驟1)中獲得的所述胚性愈傷組織培養(yǎng)于所述培養(yǎng)基Bl中，獲得原胚；3)將所述步驟幻中獲得的所述原胚在所述培養(yǎng)基Cl中培養(yǎng)，獲得棉花再生植株。其中，第一次懸浮培養(yǎng)和第二次懸浮培養(yǎng)的溫度、振蕩頻率、培養(yǎng)時間、光照條件如下J6°C、100轉(zhuǎn)/分鐘振蕩(旋轉(zhuǎn)半徑為12mm)培養(yǎng)12天、每天M小時中光照16小時， 光照強度為16001UX，其余時間黑暗。轉(zhuǎn)接是將第一次懸浮培養(yǎng)得到的粒徑小于60目的愈傷組織接入所述培養(yǎng)基Bi。所述步驟1)和所述步驟幻的培養(yǎng)在如下條件進行J6°C、光照條件為每天M小時中光照16小時，光照強度為16001UX，其余時間黑暗。在本發(fā)明的第三個實施例中，棉花農(nóng)大58使用的培養(yǎng)基為培養(yǎng)基Al、培養(yǎng)基Bl 和培養(yǎng)基 Cl。其中，培養(yǎng)基 Al :ΝΗ4Ν030 · 825g/L、KN03 3. 8g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、 CuSO4 ·5Η20 0. 025mg/L、MnS04 ·4Η20 22. 3mg/L、CoCl2 ·6Η200· 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/ L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、吲哚丁酸1. 0mg/L、激動素0. :3mg/L、葡萄糖 35g/L，植物凝膠 3. 0g/L 和水，ρΗ6· 2 ；培養(yǎng)基Bl =NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0. 44g/L、 MgSO4 · 7Η20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、吲哚丁酸1. 0mg/L、激動素0. :3mg/L、葡萄糖35g/L、谷氨酰胺0. 7g/L、天冬氨酸0. 7g/L和水，ρΗ6· 2 ；培養(yǎng)基Cl =NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L,KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 ·2Η20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸1. Omg/L、激動素0. :3mg/L、葡萄糖35g/L、谷氨酰胺0. 7g/L、天冬氨酸0. 7g/L、植物凝膠3. Og/L和水，ρΗ6· 2 ；誘導培養(yǎng)基NH4NO31. 65g/L、KNO3 1. 9g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/ L、MgS04.7H20 0.37g/L、KI 0. 83mg/L, Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuS04 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. 0mg/L、2，4-D0. 3mg/L、吲哚乙酸0. 3mg/L、激動素0. 3mg/L、葡萄糖為35g/L、植物凝膠3. Og/L和水，pH值為6. 2。利用上述成套培養(yǎng)基和誘導培養(yǎng)基按照包括如下步驟的方法將棉花愈傷組織培養(yǎng)成再生植株1)將在誘導培養(yǎng)基中形成的棉花愈傷組織在所述培養(yǎng)基Al中培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織；2)將所述步驟1)中獲得的所述胚性愈傷組織培養(yǎng)于所述培養(yǎng)基Bl中，獲得原胚；3)將所述步驟幻中獲得的所述原胚在所述培養(yǎng)基Cl中培養(yǎng)，獲得棉花再生植株。其中，第一次懸浮培養(yǎng)和第二次懸浮培養(yǎng)的溫度、振蕩頻率、培養(yǎng)時間、光照條件如下30°C、130轉(zhuǎn)/分鐘振蕩(旋轉(zhuǎn)半徑為12mm)培養(yǎng)14天、每天M小時中光照18小時， 光照強度為16001UX，其余時間黑暗。轉(zhuǎn)接是將第一次懸浮培養(yǎng)得到的粒徑小于60目的愈傷組織接入所述培養(yǎng)基Bi。所述步驟1)和所述步驟幻的培養(yǎng)在如下條件進行30°C、光照條件為每天M小時中光照18小時，光照強度為16001uX，其余時間黑暗。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、高效獲得體細胞胚胎與再生植株(一)無菌子葉苗的獲得1、棉花種子的脫絨取50g棉花品種珂字棉201種子加15ml左右濃硫酸，快速攪動2_;3min，然后石灰水中和，不斷搓洗，流水沖洗10-iaiiin，獲得干凈的脫絨種子。2、棉花種子的萌發(fā)將脫絨種子經(jīng)0. 1% (w/v)HgCl2溶液消毒10分鐘，然后用滅菌水清洗種子5-6遍， 最后加入150ml滅菌水，28°C暗處萌發(fā)M小時，獲得萌發(fā)種子。3、棉花種子的發(fā)芽將萌發(fā)種子在無菌環(huán)境下剝?nèi)シN殼，并將去種殼的棉花種胚種植于發(fā)芽培養(yǎng)基上，28°C暗培養(yǎng)6天，獲得無菌黃化子葉苗。發(fā)芽培養(yǎng)基為NH4NO30. 825g/L、KNO3 3. 8g/L、KH2PO4 0. 17g/L、 CaCl2 · 2Η200· 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、蔗糖 20g/L，瓊脂粉 7. 5g/L 和水，pH5. 8。
( 二)愈傷組織的誘導和增殖將珂字棉201無菌黃化子葉苗的下胚軸切成0. 5cm長度，接種于誘導培養(yǎng)基(培養(yǎng)皿直徑9cm，每皿含誘導培養(yǎng)基25ml，每皿接種8_10個下胚軸)23°C每天光照14小時，光照強度為1600LUX，培養(yǎng)30天(圖1-A)。按每10皿為一個重復統(tǒng)計，每個重復接種的下胚軸數(shù)目記為A，共設(shè)重復3個。誘導培養(yǎng)基的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是MS基本培養(yǎng)基(表1)。向MS基本培養(yǎng)基中添加2， 4-D、吲哚乙酸(IAA)、激動素(KT)、葡萄糖和植物凝膠(phytagel)得到的固體培養(yǎng)基即為該誘導培養(yǎng)基。在該誘導培養(yǎng)基中，2，4-D、IAA和KT的濃度均為0. 05mg/L，葡萄糖的濃度為25g/L，植物凝膠的濃度為2. 4g/L。滅菌前調(diào)pH值為5. 6，115°C高壓滅菌20min。表1. MS基本培養(yǎng)基
權(quán)利要求
1.用于獲得棉花體細胞再生植株的成套培養(yǎng)基，由獨立包裝的培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C組成；所述培養(yǎng)基A為由改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖和凝固劑組成的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基B為由所述改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖和氨基酸添加物組成的培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基C為由所述改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖、氨基酸添加物和凝固劑組成的培養(yǎng)基；所述改良MS基本培養(yǎng)基由下述質(zhì)量份的營養(yǎng)成分組成NH4NO3 825 份、KNO3 3800 份、KH2PO4 170 份、CaCl2 · 2H20 440 份和 MgSO4 · 7H20370 份； KI 0. 83 份、Na2MoO4 · 2H20 0. 25 份、H3BO3 6. 2 份、CuSO4 · 5H20 0. 025 份、MnSO4 · 4H20 22. 3 份、CoCl2 · 6H20 0. 025 份和 ZnSO4 · 4H20 8. 6 份；Na2EDTA 37. 3 份和 FeSO4 · 7H20 27. 8 份； 煙酸0. 5份、肌醇100份、鹽酸硫胺素0. 1份、鹽酸吡哆素0. 5份和甘氨酸2. 0份；所述激素為吲哚丁酸和激動素，所述吲哚丁酸和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足0. 3份-1. 0份所述吲哚丁酸/825份NH4NO3 ；所述激動素和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足0. 05 份-0. 3份所述激動素/825份NH4NO3 ；所述吲哚丁酸與所述激動素在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基 B和培養(yǎng)基C中的質(zhì)量份之比均為(7.00-3.00) 1 ；所述葡萄糖和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足25000份-35000份所述葡萄糖/825份NH4NO3 ；所述氨基酸添加物為谷氨酰胺和天冬氨酸，所述谷氨酰胺和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足300份-700份所述谷氨酰胺/825份NH4NO3 ；所述天冬氨酸和所述改良MS基本培養(yǎng)基在所述培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C中的配比滿足300份-700 份所述天冬氨酸/825份NH4NO315
2.用于獲得棉花體細胞再生植株的成套培養(yǎng)基，由獨立包裝的培養(yǎng)基Al、培養(yǎng)基Bl和培養(yǎng)基Cl組成；所述培養(yǎng)基Al為向液體培養(yǎng)基D中加入凝固劑得到的固體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基D由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下=NH4NO3 0. 825g/L、 KNO3 3. 8g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H200. 37g/L、KI 0. 83mg/L、 Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H200. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、 CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、 煙酸0. 5mg/L、肌醇100mg/L、鹽酸硫胺素0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸 0. 3mg/L-l. Omg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 6mg/L 或 1. Omg/L、激動素 0. 05mg/L_0· 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. 3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或 25g/L 或 30g/L 或 35g/L ；所述培養(yǎng)基Bl為液體培養(yǎng)基，由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下NH4N03 0 . 8 2 5g/L、KNO3 3. 8g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、 MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA 37. 3mg/ L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. Omg/L、吲哚丁酸 0. 3mg/L_l. Omg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 6mg/L 或 1. Omg/L、 激動素 0. 05mg/L-0. 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. :3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或25g/L 或 30g/L 或 35g/L、谷氨酰胺 0. 3g/L_0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L 和天冬氨酸 0. 3g/L-0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L ；所述培養(yǎng)基Cl為向液體培養(yǎng)基E中加入凝固劑得到的固體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基 E由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下=NH4NO3 0. 825g/L、KN03 3. 8g/L、 KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KIO. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、CuSO4 · 5H20 0. 025mg/L、MnSO4 · 4H20 22. 3mg/L、CoCl2 · 6H20 0. 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/L、Na2EDTA37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、 肌醇100mg/L、鹽酸硫胺素0. lmg/L、鹽酸吡哆醇0. 5mg/L、甘氨酸2. Omg/L、吲哚丁酸0. 3mg/ L-l. Omg/L 或 0. 3mg/L 或 0. 6mg/L 或 1. Omg/L、激動素 0. 05mg/L_0· 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. 3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或 25g/L 或 30g/L 或 35g/L、谷氨酰胺 0. 3g/ L-0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L 和天冬氨酸 0. 3g/L_0. 7g/L 或 0. 3g/L 或 0. 5g/L 或 0. 7g/L ；所述吲哚丁酸與所述激動素在所述培養(yǎng)基D、所述培養(yǎng)基Bi、所述培養(yǎng)基E、所述培養(yǎng)基Al和所述培養(yǎng)基Cl中的質(zhì)量比為(7.00-3.00) 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的成套培養(yǎng)基，其特征在于所述培養(yǎng)基D、所述培養(yǎng)基Bi、所述培養(yǎng)基E、所述培養(yǎng)基Al和所述培養(yǎng)基Cl的pH值均為5. 6-6. 2或5. 6或5. 8或6. 2 ；所述凝固劑為植物凝膠，所述植物凝膠在所述培養(yǎng)基Al和所述培養(yǎng)基Cl中的濃度均為 2. 4g/L-3. 0g/L 或 2. 4g/L 或 2. 6g/L 或 3. 0g/L。
4.利用權(quán)利要求2或3所述的成套培養(yǎng)基按照包括如下步驟的方法將棉花愈傷組織培養(yǎng)成再生植株1)將棉花愈傷組織在所述培養(yǎng)基Al中培養(yǎng)，獲得胚性愈傷組織；2)將所述步驟1)中獲得的所述胚性愈傷組織培養(yǎng)于所述培養(yǎng)基Bl中，獲得原胚；3)將所述步驟幻中獲得的所述原胚在所述培養(yǎng)基Cl中培養(yǎng)，獲得棉花再生植株。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述步驟2、包括如下步驟將所述步驟 1)中獲得的所述胚性愈傷組織在所述培養(yǎng)基Bl中進行第一次懸浮培養(yǎng)，使所述胚性愈傷組織增殖，再轉(zhuǎn)接入所述培養(yǎng)基Bl中進行第二次懸浮培養(yǎng)，得到所述原胚。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述步驟幻中，所述第一次懸浮培養(yǎng)和所述第二次懸浮培養(yǎng)的溫度、振蕩頻率和培養(yǎng)時間如下23-30°C、70-130轉(zhuǎn)/分鐘、振蕩培養(yǎng)10-14天。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于所述第一次懸浮培養(yǎng)和所述第二次懸浮培養(yǎng)的光照條件為每天M小時中光照14-18小時，其余時間黑暗。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于所述轉(zhuǎn)接是將第一次懸浮培養(yǎng)得到的粒徑小于50目的愈傷組織接入所述培養(yǎng)基Bi。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于所述步驟1)的培養(yǎng)在如下條件進行23-30°C、光照條件為每天M小時中光照14-18 小時，其余時間黑暗；所述步驟幻的培養(yǎng)在如下條件進行23-30°C、光照條件為每天M小時中光照14-18 小時，其余時間黑暗。
10.根據(jù)權(quán)利要求4-9中任一所述方法，其特征在于所述棉花愈傷組織是通過如下誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)棉花子葉苗的下胚軸得到的向液體培養(yǎng)基F中加入凝固劑得到的固體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基F由溶質(zhì)和溶劑組成，所述溶劑為水，所述溶質(zhì)的濃度如下=NH4NO3 1. 65g/L、KNO3 1. 9g/L、KH2PO4 0. 17g/L、CaCl2 · 2H20 0. 44g/L、MgSO4 · 7H20 0. 37g/L、KI 0. 83mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0. 25mg/L、H3BO3 6. 2mg/L、 CuSO4 ·5Η20 0. 025mg/L、MnS04 ·4Η20 22. 3mg/L、CoCl2 ·6Η200· 025mg/L、ZnSO4 · 4H20 8. 6mg/ L、Na2EDTA 37. 3mg/L、FeSO4 · 7H20 27. 8mg/L、煙酸 0. 5mg/L、肌醇 100mg/L、鹽酸硫胺素 0. lmg/L、鹽酸吡哆醇 0. 5mg/L、甘氨酸 2. 0mg/L、2，4_D 0. 05mg/L_0· 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. 3mg/L、吲哚乙酸 0. 05mg/L_0. 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. 3mg/L、 激動素 0. 05mg/L-0. 3mg/L 或 0. 05mg/L 或 0. 15mg/L 或 0. :3mg/L、葡萄糖為 25g/L_35g/L 或 25g/L 或 30g/L 或 35g/L ；所述誘導培養(yǎng)基中的所述2，4-D、所述吲哚乙酸和所述激動素的質(zhì)量之比為 1:1:1;所述誘導培養(yǎng)基的PH值為5. 6-6. 2或5. 6或5. 8或6. 2。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效誘導棉花體胚發(fā)生與植株再生的方法及其培養(yǎng)基。本發(fā)明的培養(yǎng)基為用于棉花體細胞再生植株的成套培養(yǎng)基，由培養(yǎng)基A、培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C組成，所述培養(yǎng)基A由改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖和凝固劑組成；所述培養(yǎng)基B由改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖和氨基酸添加物組成；所述培養(yǎng)基C由改良MS基本培養(yǎng)基、激素、葡萄糖、氨基酸添加物和凝固劑組成；本發(fā)明的方法是使用所述成套培養(yǎng)基，將棉花愈傷組織培養(yǎng)成再生植株的方法。本發(fā)明不受棉花基因型的限制，且培養(yǎng)周期短、重復性高，使棉花具高效獲得大量體細胞胚胎與植株再生的能力，從而為棉花的細胞工程、基因工程以及棉花遺傳改良等相關(guān)研究提供重要平臺。
文檔編號A01H4/00GK102405835SQ20111024320
公開日2012年4月11日 申請日期2011年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月23日
發(fā)明者劉正杰, 華金平, 張園, 王彥霞, 王玉美 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學