專利名稱：一種含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及畜禽飼料領(lǐng)域，尤其涉及一種含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法。
背景技術(shù)：
奶牛隱性乳房炎是一種常見的、復(fù)雜的、可以造成奶牛業(yè)嚴(yán)重?fù)p失的嚴(yán)重疾病，不僅嚴(yán)重影響乳牛的利用年限、產(chǎn)乳數(shù)量和乳品質(zhì)量，而且有害于食品衛(wèi)生和人類健康。長期以來，養(yǎng)牛戶大多采用向奶牛長期喂食抗生素的方式來預(yù)防奶牛隱性乳房炎?？股鼐哂袣缂?xì)菌和抑制致病微生物的作用，因此這種喂養(yǎng)方式在實(shí)際生產(chǎn)中起到了一定的預(yù)防奶牛隱性乳房炎的效果。但是，這些抗生素會隨著人們食用牛奶以及各種牛奶制品進(jìn)入人體，這就間接導(dǎo)致了抗生素的濫用，有可能引發(fā)多種藥源性疾病，甚至?xí)a(chǎn)生新的“超級耐藥菌”，因而這種喂養(yǎng)方式嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。為了避免或減少在奶牛喂養(yǎng)過程中長期使用抗生素，奶牛用微生態(tài)飼料添加劑應(yīng)運(yùn)而生。所謂奶牛用微生態(tài)飼料添加劑是將對奶牛有益無害的活性益生菌經(jīng)過特殊工藝制成的活性益生菌制劑。奶牛用微生態(tài)飼料添加劑作為一種功能性牛飼料添加輔料，實(shí)現(xiàn)了在無毒副作用、無耐藥性、無病原性的前提下預(yù)防奶牛隱性乳房炎，不僅可以調(diào)節(jié)奶牛腸道微生態(tài)平衡、提高奶牛生長率、提高飼料利用率、而且可以抑制腸道有害微生物的繁殖、提高奶牛健康水平、增強(qiáng)奶牛免疫力。目前，在現(xiàn)有的奶牛養(yǎng)殖中，常見的奶牛用微生態(tài)飼料添加劑的種類有乳酸菌制劑(包括嗜酸乳酸菌、雙歧乳桿菌、糞鏈球菌等)、芽孢桿菌制劑 (包括枯草桿菌、蠟樣芽孢桿菌、地衣桿菌等)、真菌制劑(包括米曲霉菌等)、酵母菌制劑 (包括啤酒酵母等)等近百種。在現(xiàn)有的牛用微生態(tài)飼料添加劑生產(chǎn)過程中，大多僅使用蛋白質(zhì)類物質(zhì)和/或糖類物質(zhì)作為活性益生菌的培養(yǎng)基，雖然菌株數(shù)量上可以滿足需求，但大多數(shù)菌株的活性不高，在腸道中的定植性能較弱，因此活性益生菌作為奶牛飼料所應(yīng)發(fā)揮的作用受到很大的限制；同時(shí)，活性益生菌僅能在一定程度上增強(qiáng)奶牛的體質(zhì)，其治療和預(yù)防奶牛隱性乳房炎的效果并不十分明顯，因此，現(xiàn)有的奶牛微生態(tài)飼料添加劑并不能完全取代抗生素的使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例提供了一種含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，以便于大幅提高奶牛飼料添加劑中活性益生菌的菌株活性和在腸道中的定植性能，并且使制得的奶牛飼料添加劑富含中藥成分，還能使中藥成分中起到藥理作用的活性成分充分發(fā)揮， 從而提高奶牛飼料添加劑的強(qiáng)體治病性能和促生長性能，有效治療和預(yù)防奶牛隱性乳房炎，進(jìn)而完全取代抗生素的使用。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，包括步驟A 選取相等菌株數(shù)量的多種奶牛用活性益生菌的原菌株，并分別對每種奶牛用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種奶牛用活性益生菌的一級種子液；其中，所述的多種奶牛用活性益生菌包括枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉、米根霉、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌中的至少兩種；步驟B 將相等重量的每種奶牛用活性益生菌的一級種子液進(jìn)行混合，從而獲得多菌種混合一級種子液；步驟C 將多菌種混合一級種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)， 從而獲得多菌種混合二級種子液；步驟D 將多菌種混合二級種子液接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵， 從而獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液；其中，所述的中藥液體培養(yǎng)基包括5 % 8 %的紅糖、2 % 3 %的中藥組分、 0. 2% 0. 3%的磷酸二氫鉀、0. 3% 0. 5%的酵母膏和余量的水；所述的中藥組分由黃芪、黨參、蒲公英、黃芩、川穹、王不留行、路路通、柴胡、當(dāng)歸、益母草、昆布和甘草組成，其各成分占中藥組分總量的重量份數(shù)為黃芪60 80份，黨參60 80份，蒲公英60 80份，黃芩40 60份，川穹10 20份，王不留行40 60份，路路通40 60份，柴胡50 80份，當(dāng)歸40 60份，益母草50 80份，昆布80-120份，甘草30 50份步驟E 將多菌種混合中藥發(fā)酵液與等重量的玉米芯粉混合制成固態(tài)發(fā)酵種子；步驟F:將固態(tài)發(fā)酵種子接種到中藥固體培養(yǎng)基中進(jìn)行二次中藥發(fā)酵，從而制得含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑。由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明實(shí)施例提供的含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法采用多味中藥來培養(yǎng)對奶牛生長和抗病能力有良好促進(jìn)作用的活性益生菌，從而使中藥中的活性成分充分發(fā)揮藥理作用，并且使所培養(yǎng)出的活性益生菌的活性遠(yuǎn)高于普通培養(yǎng)基培養(yǎng)出的活性益生菌，同時(shí)還增強(qiáng)了活性益生菌在腸道中的定植能力；由于中藥和活性益生菌對免疫系統(tǒng)有協(xié)同作用，因此將以中藥繁殖出的活性益生菌作為奶牛用飼料添加劑，可以大大增強(qiáng)奶牛的免疫能力。我們通過將現(xiàn)代微生態(tài)學(xué)原理同中醫(yī)相結(jié)合，用中藥組分培養(yǎng)活性益生菌，從而生產(chǎn)出一種完全取代抗生素的無藥殘、 防病促生長、成本低廉的奶牛用飼料添加劑。


為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)行的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。圖1為本發(fā)明實(shí)施例所提供的含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法的流程示意圖。
具體實(shí)施方式
下面面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。首先，需要說明的是，本申請文件中所稱的份均是指重量份，下面對本發(fā)明實(shí)施例所提供的含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法作一詳細(xì)描述。如圖1所示，一種含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，具體可以包括以下步驟步驟A 選取相等菌株數(shù)量的多種奶牛用活性益生菌的原菌株，并分別對每種奶牛用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種奶牛用活性益生菌的一級種子液；其中，所述的多種奶牛用活性益生菌包括枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉、米根霉、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌中的至少兩種；具體地，相應(yīng)的選取相等菌株數(shù)量的多種奶牛用活性益生菌的原菌株，并分別對每種奶牛用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種奶牛用活性益生菌的一級種子液可以包括(1)將分離提純后的枯草芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得枯草芽孢桿菌的一級種子液；枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水；其中， 該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在7. 0 7. 2的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，以保證菌株活性和菌株生存狀態(tài)不會遭到破壞。需要說明的是，枯草芽孢桿菌的接種比例為每500mL的枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的枯草芽孢桿菌。和/ 或，(2)將分離提純后的納豆芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得納豆芽孢桿菌的一級種子液；納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在7. 0 7. 2的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，以保證菌株活性和菌株生存狀態(tài)不會遭到破壞。需要說明的是，納豆芽孢桿菌的接種比例為每500mL的納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的納豆芽孢桿菌。和/ 或，(3)將分離提純后的地衣芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得地衣芽孢桿菌的一級種子液；地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在7. 0 7. 2的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，以保證菌株活性和菌株生存狀態(tài)不會遭到破壞。需要說明的是，地衣芽孢桿菌的接種比例為每500mL的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的地衣芽孢桿菌。和/ 或，(4)將分離提純后的啤酒酵母的原菌株種子斜面接種到啤酒酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得啤酒酵母的一級種子液；啤酒酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水。需要說明的是，啤酒酵母的接種比例為每500mL的啤酒酵母培養(yǎng)基中接種IOOmL的啤酒酵母。和/ 或，(5)將分離提純后的產(chǎn)朊假絲酵母的原菌株種子斜面接種到產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得產(chǎn)朊假絲酵母的一級種子液；產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和 1000份的水。需要說明的是，產(chǎn)朊假絲酵母的接種比例為每500mL的產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基中接種IOOmL的產(chǎn)朊假絲酵母。和/ 或，(6)將分離提純后的黑曲霉的原菌株種子斜面接種到黑曲霉培養(yǎng)基的三角瓶中， 并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得黑曲霉的一級種子液；黑曲霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20 份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水。需要說明的是， 黑曲霉的接種比例為每500mL的黑曲霉培養(yǎng)基中接種IOOmL的黑曲霉。和/ 或，(7)將分離提純后的米根霉的原菌株種子斜面接種到米根霉培養(yǎng)基的三角瓶中， 并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得米根霉的一級種子液；米根霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20 份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水。需要說明的是， 米根霉的接種比例為每500mL的米根霉培養(yǎng)基中接種IOOmL的米根霉。禾口/ 或，(8)將分離提純后的干酪乳桿菌的原菌株種子斜面接種到干酪乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得干酪乳桿菌的一級種子液；干酪乳桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80(吐溫80的分子式是C. 64. H. 124 . 0. 26.，英文名稱是P0LYS0RBATE 80，中文同義詞是聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯或乳化劑T80，易溶于水、乙醇、甲醇和醋酸乙酯，主要用于做注射液及口服液的增溶劑或乳化劑，膠囊劑的分散劑，軟膏劑的乳化劑和基質(zhì)，栓劑的基質(zhì)或是食品工業(yè)中的乳化劑)和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在6. 2 6. 4的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，從而保證菌株能夠具有較大的活性，并且保證菌株存活狀態(tài)不會遭到破壞。需要說明的是，干酪乳桿菌的接種比例為每500mL的干酪乳桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的干酪乳桿菌。和/ 或，(9)將分離提純后的嗜酸乳桿菌的原菌株種子斜面接種到嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得嗜酸乳桿菌的一級種子液；嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和 1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在6. 2 6. 4的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，從而保證菌株能夠具有較大的活性，并且保證菌株存活狀態(tài)不會遭到破壞。需要說明的是，嗜酸乳桿菌的接種比例為每500mL的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的嗜酸乳桿菌。禾口/ 或，
(10)將分離提純后的雙歧桿菌的原菌株種子斜面接種到雙歧桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得雙歧桿菌的一級種子液；雙歧桿菌培養(yǎng)基包括20 份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在6. 2 6. 4的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，從而保證菌株能夠具有較大的活性，并且保證菌株存活狀態(tài)不會遭到破壞。需要說明的是，雙歧桿菌的接種比例為每 500mL的雙歧桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的雙歧桿菌。步驟B 將相等重量的每種奶牛用活性益生菌的一級種子液進(jìn)行混合，從而獲得多菌種混合一級種子液；具體地，在實(shí)際應(yīng)用中，最好從步驟A所述的10種奶牛用活性益生菌的一級種子液中均選取出相同重量一級種子液，然后進(jìn)行混合，從而使最終制得的奶牛飼料添加劑兼具有這10種益生菌。步驟C 將多菌種混合一級種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)， 從而獲得多菌種混合二級種子液；其中，相應(yīng)的種子罐培養(yǎng)基包括3 % 8 %的紅糖、0. 2 % 0. 5 %的磷酸二氫鉀、 0. 3% 0. 5%的酵母膏、0. 2% 0. 5%的蛋白胨和余量的水，此處描述的種子罐培養(yǎng)基的各組分含量均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)；具體地，在實(shí)際生產(chǎn)使用中，為了綜合制作成本和使用性能等多方面因素，該種子罐培養(yǎng)基的各成分占總的質(zhì)量比可選用如下表1中的方案，其中該表中的實(shí)施例一為最優(yōu)選方案表1:
實(shí)施例紅糖磷酸二氫鉀酵母膏蛋白胨水實(shí)施例一8%0. 22%0. 5%0. 3%余量實(shí)施例二6%0. 2%0.4%0. 4%余量實(shí)施例三7%0. 250. 4%0. 4%余量實(shí)施例四5%0. 3%0. 5%0. 2%余量進(jìn)一步地，相應(yīng)的將多菌種混合一級種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)，從而獲得多菌種混合二級種子液可以包括以下步驟步驟Cl 制備種子罐培養(yǎng)基；步驟C2 在115°C 121°C下對種子罐培養(yǎng)基滅菌25分鐘，再冷卻至30°C ；具體地，在實(shí)際應(yīng)用中，最好選用在121°C下對種子罐培養(yǎng)基滅菌25分鐘，以保證種子罐培養(yǎng)基中的有害菌能完全被殺滅。步驟C3 將多菌種混合一級種子液按照3% 5%的接種比例接種到種子罐培養(yǎng)基中(此處的按照3% 5%的接種比例是指每100個(gè)單位體積的種子罐培養(yǎng)基中接種3至5個(gè)單位體積的多菌種混合一級種子液)；步驟C4 對接種完的種子罐培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵裝置的轉(zhuǎn)速為180r/min， 發(fā)酵溫度為32°C，直至種子罐培養(yǎng)基中的PH值達(dá)到4. 8時(shí)發(fā)酵完成，即獲得多菌種混合二級種子液。一般情況下，種子罐培養(yǎng)基的厭氧發(fā)酵一般可以在48 72小時(shí)內(nèi)完成，發(fā)酵完成后，活性益生菌的數(shù)目可以達(dá)到每毫升15億株。步驟D 將多菌種混合二級種子液接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵， 從而獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液；其中，所述的中藥液體培養(yǎng)基包括5 % 8 %的紅糖、2 % 3 %的中藥組分、 0. 2% 0. 3%的磷酸二氫鉀、0. 3% 0. 5%的酵母膏和余量的水，此處描述的中藥液體培養(yǎng)基的各組分含量均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)；所述的中藥組分由黃芪、黨參、蒲公英、黃芩、川穹、王不留行、路路通、柴胡、當(dāng)歸、益母草、昆布和甘草組成，其各成分占中藥組分總量的重量份數(shù)為黃芪60 80份，黨參60 80份，蒲公英60 80份，黃芩40 60份，川穹10 20份，王不留行40 60份，路路通40 60份，柴胡50 80份，當(dāng)歸40 60份，益母草50 80份，昆布80-120份，甘草30 50份。具體地，在實(shí)際生產(chǎn)使用中，為了綜合制作成本和使用性能等多方面因素，該中藥液體培養(yǎng)基的各成分占總的質(zhì)量比可選用如下表2中的優(yōu)選方案，其中該表中的實(shí)施例1 為最優(yōu)選實(shí)施方案表 2
權(quán)利要求
1.一種含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，其特征在于，包括步驟A 選取相等菌株數(shù)量的多種奶牛用活性益生菌的原菌株，并分別對每種奶牛用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種奶牛用活性益生菌的一級種子液；其中，所述的多種奶牛用活性益生菌包括枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉、米根霉、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌中的至少兩種；步驟B 將相等重量的每種奶牛用活性益生菌的一級種子液進(jìn)行混合，從而獲得多菌種混合一級種子液；步驟C 將多菌種混合一級種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)，從而獲得多菌種混合二級種子液；步驟D 將多菌種混合二級種子液接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵，從而獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液；其中，所述的中藥液體培養(yǎng)基包括5 % 8 %的紅糖、2 % 3 %的中藥組分、0. 2 % 0. 3%的磷酸二氫鉀、0. 3% 0. 5%的酵母膏和余量的水；所述的中藥組分由黃芪、黨參、 蒲公英、黃芩、川穹、王不留行、路路通、柴胡、當(dāng)歸、益母草、昆布和甘草組成，其各成分占中藥組分總量的重量份數(shù)為黃芪60 80份，黨參60 80份，蒲公英60 80份，黃芩40 60份， 川穹10 20份，王不留行40 60份，路路通40 60份，柴胡50 80份， 當(dāng)歸40 60份，益母草50 80份，昆布80-120份，甘草30 50份； 步驟E 將多菌種混合中藥發(fā)酵液與等重量的玉米芯粉混合制成固態(tài)發(fā)酵種子； 步驟F:將固態(tài)發(fā)酵種子接種到中藥固體培養(yǎng)基中進(jìn)行二次中藥發(fā)酵，從而制得含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的選取相等菌株數(shù)量的多種奶牛用活性益生菌的原菌株，并分別對每種奶牛用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種奶牛用活性益生菌的一級種子液包括將分離提純后的枯草芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得枯草芽孢桿菌的一級種子液；枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水； 和/或，將分離提純后的納豆芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得納豆芽孢桿菌的一級種子液；納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水； 和/或，將分離提純后的地衣芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得地衣芽孢桿菌的一級種子液；地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水； 和/或，將分離提純后的啤酒酵母的原菌株種子斜面接種到啤酒酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得啤酒酵母的一級種子液；啤酒酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20 份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的產(chǎn)朊假絲酵母的原菌株種子斜面接種到產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得產(chǎn)朊假絲酵母的一級種子液；產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的黑曲霉的原菌株種子斜面接種到黑曲霉培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得黑曲霉的一級種子液；黑曲霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、 3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的米根霉的原菌株種子斜面接種到米根霉培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得米根霉的一級種子液；米根霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、 3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的干酪乳桿菌的原菌株種子斜面接種到干酪乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中， 并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得干酪乳桿菌的一級種子液；干酪乳桿菌培養(yǎng)基包括20 份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水；和/或，將分離提純后的嗜酸乳桿菌的原菌株種子斜面接種到嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中， 并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得嗜酸乳桿菌的一級種子液；嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基包括20 份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水；和/或，將分離提純后的雙歧桿菌的原菌株種子斜面接種到雙歧桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在 37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得雙歧桿菌的一級種子液；雙歧桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的將多菌種混合一級種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)，從而獲得多菌種混合二級種子液包括以下步驟步驟Cl 制備種子罐培養(yǎng)基；其中，所述的種子罐培養(yǎng)基包括3 % 8 %的紅糖、0. 2 % 0. 5 %的磷酸二氫鉀、 0. 3% 0. 5%的酵母膏、0. 2% 0. 5%的蛋白胨和余量的水；步驟C2 在115°C 121°C下對種子罐培養(yǎng)基滅菌25分鐘，再冷卻至30°C ；步驟C3 將多菌種混合一級種子液按照3% 5%的接種比例接種到種子罐培養(yǎng)基中；步驟C4 對接種完的種子罐培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵裝置的轉(zhuǎn)速為180r/min，發(fā)酵溫度為32°C，直至種子罐培養(yǎng)基中的PH值達(dá)到4. 8時(shí)發(fā)酵完成，即獲得多菌種混合二級種子液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的將多菌種混合二級種子液接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵，從而獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液包括以下步驟步驟Dl 制備中藥液體培養(yǎng)基；步驟D2 在115°C 121°C下對中藥液體培養(yǎng)基滅菌20分鐘，再冷卻至30°C ； 步驟D3 將多菌種混合二級種子液按照5% 10%的接種比例接種到中藥液體培養(yǎng)基中；步驟D4 對接種完的中藥液體培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵裝置的轉(zhuǎn)速為180r/min，發(fā)酵溫度為32°C，直至中藥液體培養(yǎng)基中的PH值達(dá)到5. 0時(shí)發(fā)酵完成，即獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的將固態(tài)發(fā)酵種子接種到中藥固體培養(yǎng)基中進(jìn)行二次中藥發(fā)酵，從而制得含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑包括以下步驟步驟Fl 制備中藥固體培養(yǎng)基；其中，所述的中藥固體培養(yǎng)基由60 70份的麥麩，15 20份豆粕，10 15份的玉米粉，2 3份的紅糖，2 3份的中藥組分，2 4份的輕質(zhì)碳酸鈣，0. 5 0. 8份的酵母膏， 1 2份的海帶，0. 2 0. 5份的黃腐酸組成；所述的中藥組分包括黃芪、黨參、蒲公英、黃芩、川穹、王不留行、路路通、柴胡、當(dāng)歸、益母草、昆布和甘草，其各成分占中藥組分總量的重量份數(shù)為黃芪60 80份，黨參60 80份，蒲公英60 80份，黃芩40 60份， 川穹10 20份，王不留行40 60份，路路通40 60份，柴胡50 80份， 當(dāng)歸40 60份，益母草50 80份，昆布80-120份，甘草30 50份； 步驟F2 在115°C 121°C下對中藥固體培養(yǎng)基滅菌20分鐘，再冷卻至30°C ； 步驟F3 將固態(tài)發(fā)酵種子液按照20% 30%的接種比例接種到中藥固體培養(yǎng)基中； 步驟F4 將接種完的中藥固體培養(yǎng)基置于37°C下進(jìn)行密封發(fā)酵，當(dāng)中藥固體培養(yǎng)基的溫度達(dá)到40°C時(shí)將中藥固體培養(yǎng)基進(jìn)行翻轉(zhuǎn)；持續(xù)發(fā)酵，直至中藥固體培養(yǎng)基的溫度不再上升時(shí)發(fā)酵完成，即獲得含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含中藥活性益生菌的奶牛飼料添加劑的制造方法，包括分別對奶牛用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)；將相等重量的每種奶牛用活性益生菌的一級種子液進(jìn)行混合，并接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)，然后接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵；將多菌種混合中藥發(fā)酵液與等體積的玉米芯粉混合制成固態(tài)發(fā)酵種子，再接種到中藥固體培養(yǎng)基中進(jìn)行二次中藥發(fā)酵。本發(fā)明實(shí)施例的實(shí)施能夠大幅提高奶牛飼料添加劑中活性益生菌的菌株活性和在腸道中的定植性能，并且使制得的奶牛飼料添加劑富含中藥成分，還能使中藥成分中起到藥理作用的活性成分充分發(fā)揮，從而提高奶牛飼料添加劑的強(qiáng)體治病性能和促生長性能，進(jìn)而完全取代抗生素的使用。
文檔編號A23K1/16GK102366023SQ201110276378
公開日2012年3月7日 申請日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者李羽, 汪松林 申請人:汪松林