專利名稱：一種含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，尤其涉及一種含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法。
背景技術(shù)：
草魚是我國(guó)諸多淡水魚中的一種，它以其肉質(zhì)細(xì)嫩、個(gè)體大、肌間刺少等優(yōu)點(diǎn)而備受消費(fèi)者的喜愛(ài)。但是，草魚抗病能力差，成活率低，在養(yǎng)殖過(guò)程中極易受到“草魚四病(草魚四病即赤皮病、爛鰓病、腸炎病和出血病)”的侵害，因此草魚的規(guī)?；B(yǎng)殖受到了很大的制約。長(zhǎng)期的生產(chǎn)實(shí)踐證明，向草魚注射抗生素能夠預(yù)防“草魚四病”;但是，這些抗生素會(huì)隨著人們食用各種魚肉制品進(jìn)入人體，這就間接導(dǎo)致了抗生素的濫用，有可能引發(fā)多種藥源性疾病，甚至?xí)a(chǎn)生新的“超級(jí)耐藥菌”，因而這種草魚養(yǎng)殖方式嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。為了避免或減少在草魚養(yǎng)殖過(guò)程中注射抗生素，魚用微生態(tài)飼料添加劑應(yīng)運(yùn)而生。所謂魚用微生態(tài)飼料添加劑是將對(duì)魚有益無(wú)害的活性益生菌經(jīng)過(guò)特殊工藝制成的活性益生菌制劑。魚用微生態(tài)飼料添加劑作為一種功能性魚飼料添加輔料，能夠在無(wú)毒副作用、無(wú)耐藥性、無(wú)病原性的前提下有效預(yù)防和治療“草魚四病”，不僅可以調(diào)節(jié)草魚腸道微生態(tài)平衡、提高草魚生長(zhǎng)率、提高飼料利用率、而且可以抑制腸道有害微生物的繁殖、提高草魚健康水平、增強(qiáng)草魚免疫力。目前，在現(xiàn)有的草魚養(yǎng)殖中，常見的魚用微生態(tài)飼料添加劑的種類有乳酸菌制劑(包括嗜酸乳酸菌、雙歧乳桿菌、糞鏈球菌等)、芽孢桿菌制劑(包括枯草桿菌、蠟樣芽孢桿菌、地衣桿菌等)、真菌制劑(包括米曲霉菌等)、酵母菌制劑(包括啤酒酵母等)等近百種。在現(xiàn)有的魚用微生態(tài)飼料添加劑生產(chǎn)過(guò)程中，大多僅使用蛋白質(zhì)類物質(zhì)和/或糖類物質(zhì)作為活性益生菌的培養(yǎng)基，雖然菌株數(shù)量上可以滿足需求，但大多數(shù)菌株的活性不高，在腸道中的定植性能較弱，因此活性益生菌作為畜禽飼料所應(yīng)發(fā)揮的作用受到很大的限制；同時(shí)，活性益生僅能在一定程度上增強(qiáng)草魚的體質(zhì)，并不能有效治療和預(yù)防“草魚四病”，因此，現(xiàn)有的草魚微生態(tài)飼料添加劑并不能完全取代抗生素的使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明實(shí)施例提供了一種含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，以便于大幅提高草魚飼料添加劑中活性益生菌的菌株活性和在腸道中的定植性能，并且使制得的草魚飼料添加劑富含中藥成分，還能使中藥成分中起到藥理作用的活性成分充分發(fā)揮，從而提高草魚飼料添加劑的強(qiáng)體治病性能和促生長(zhǎng)性能，有效治療和預(yù)防“草魚四病”，進(jìn)而完全取代抗生素的使用。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，包括步驟A 選取相等菌株數(shù)量的多種草魚用活性益生菌的原菌株，并分別對(duì)每種草魚用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液；其中，所述的多種草魚用活性益生菌包括枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉、米根霉、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌中的至少兩種；步驟B 將相等重量的每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液進(jìn)行混合，從而獲得多菌種混合一級(jí)種子液；步驟C 將多菌種混合一級(jí)種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)， 從而獲得多菌種混合二級(jí)種子液；步驟D 將多菌種混合二級(jí)種子液接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵， 從而獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液；其中，所述的中藥液體培養(yǎng)基包括5 % 8 %的紅糖、2 % 3 %的中藥組分、 0. 2% 0. 3%的磷酸二氫鉀、0. 3% 0. 5%的酵母膏和余量的水；所述的中藥組分由黃芩、黃柏、當(dāng)歸、大黃、大清葉、甘草、紅景天和葛根組成，其各成分占中藥組分總量的重量份數(shù)為黃芩60 80份，黃柏60 80份，當(dāng)歸40 60份，大黃60 80份，大清葉60 80份，甘草30 50份，紅景天80 100份，葛根40 60份。步驟E 按照重量份數(shù)計(jì)，將80 100份的多菌種混合中藥發(fā)酵液、10 20份的淀粉和20 40份的糊精進(jìn)行混合，并攪拌均勻；步驟F 將步驟E攪拌均勻的混合物放入高速離心噴霧干燥塔進(jìn)行干燥，從而制得含中藥活性益生菌的噴霧干燥粉；步驟G 按照重量份數(shù)計(jì)，在50 70份的所述噴霧干燥粉中混入30 50份的無(wú)水葡萄糖，從而制得含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑。由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明實(shí)施例提供的含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法采用多味中藥來(lái)培養(yǎng)對(duì)草魚生長(zhǎng)和抗病能力有良好促進(jìn)作用的活性益生菌，從而使中藥中的活性成分充分發(fā)揮藥理作用，并且使所培養(yǎng)出的活性益生菌的活性遠(yuǎn)高于普通培養(yǎng)基培養(yǎng)出的活性益生菌，同時(shí)還增強(qiáng)了活性益生菌在腸道中的定植能力；由于中藥和活性益生菌對(duì)免疫系統(tǒng)有協(xié)同作用，因此將以中藥繁殖出的活性益生菌作為草魚用飼料添加劑，可以大大增強(qiáng)草魚的免疫能力。我們通過(guò)將現(xiàn)代微生態(tài)學(xué)原理同中醫(yī)相結(jié)合，用中藥組分培養(yǎng)活性益生菌，從而生產(chǎn)出一種完全取代抗生素的無(wú)藥殘、 防病促生長(zhǎng)、成本低廉的草魚用飼料添加劑。


為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)行的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。圖1為本發(fā)明實(shí)施例所提供的含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法的流程示意圖。
具體實(shí)施例方式下面面結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。首先，需要說(shuō)明的是，本申請(qǐng)文件中所稱的份均是指重量份，下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例所提供的含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法作一詳細(xì)描述。如圖1所示，一種含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，具體可以包括以下步驟步驟A 選取相等菌株數(shù)量的多種草魚用活性益生菌的原菌株，并分別對(duì)每種草魚用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液；其中，所述的多種草魚用活性益生菌包括枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉、米根霉、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌中的至少兩種；具體地，相應(yīng)的選取相等菌株數(shù)量的多種草魚用活性益生菌的原菌株，并分別對(duì)每種草魚用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液可以包括(1)將分離提純后的枯草芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得枯草芽孢桿菌的一級(jí)種子液；枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水；其中， 該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在7. 0 7. 2的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，以保證菌株活性和菌株生存狀態(tài)不會(huì)遭到破壞。需要說(shuō)明的是，枯草芽孢桿菌的接種比例為每500mL的枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的枯草芽孢桿菌。和/ 或，(2)將分離提純后的納豆芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得納豆芽孢桿菌的一級(jí)種子液；納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在7. 0 7. 2的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，以保證菌株活性和菌株生存狀態(tài)不會(huì)遭到破壞。需要說(shuō)明的是，納豆芽孢桿菌的接種比例為每500mL的納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的納豆芽孢桿菌。和/ 或，(3)將分離提純后的地衣芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得地衣芽孢桿菌的一級(jí)種子液；地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在7. 0 7. 2的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，以保證菌株活性和菌株生存狀態(tài)不會(huì)遭到破壞。需要說(shuō)明的是，地衣芽孢桿菌的接種比例為每500mL的地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的地衣芽孢桿菌。和/ 或，
(4)將分離提純后的啤酒酵母的原菌株種子斜面接種到啤酒酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得啤酒酵母的一級(jí)種子液；啤酒酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水。需要說(shuō)明的是，啤酒酵母的接種比例為每500mL的啤酒酵母培養(yǎng)基中接種IOOmL的啤酒酵母。和/ 或，(5)將分離提純后的產(chǎn)朊假絲酵母的原菌株種子斜面接種到產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得產(chǎn)朊假絲酵母的一級(jí)種子液；產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水。需要說(shuō)明的是，產(chǎn)朊假絲酵母的接種比例為每500mL的產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基中接種IOOmL的產(chǎn)朊假絲酵母。和/ 或，(6)將分離提純后的黑曲霉的原菌株種子斜面接種到黑曲霉培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得黑曲霉的一級(jí)種子液；黑曲霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水。需要說(shuō)明的是，黑曲霉的接種比例為每500mL的黑曲霉培養(yǎng)基中接種IOOmL的黑曲霉。和/ 或，(7)將分離提純后的米根霉的原菌株種子斜面接種到米根霉培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得米根霉的一級(jí)種子液；米根霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水。需要說(shuō)明的是，米根霉的接種比例為每500mL的米根霉培養(yǎng)基中接種IOOmL的米根霉。禾口/ 或，(8)將分離提純后的干酪乳桿菌的原菌株種子斜面接種到干酪乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得干酪乳桿菌的一級(jí)種子液；干酪乳桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80(吐溫80的分子式是C J54 H.124.0 26.，英文名稱是P0LYS0RBATE 80，中文同義詞是聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯或乳化劑T80，易溶于水、乙醇、甲醇和醋酸乙酯，主要用于做注射液及口服液的增溶劑或乳化劑，膠囊劑的分散劑，軟膏劑的乳化劑和基質(zhì)，栓劑的基質(zhì)或是食品工業(yè)中的乳化劑)和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在6. 2 6. 4的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，從而保證菌株能夠具有較大的活性，并且保證菌株存活狀態(tài)不會(huì)遭到破壞。需要說(shuō)明的是，干酪乳桿菌的接種比例為每500mL的干酪乳桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的干酪乳桿菌。和/ 或，(9)將分離提純后的嗜酸乳桿菌的原菌株種子斜面接種到嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得嗜酸乳桿菌的一級(jí)種子液；嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在6. 2 6. 4的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，從而保證菌株能夠具有較大的活性，并且保證菌株存活狀態(tài)不會(huì)遭到破壞。需要說(shuō)明的是，嗜酸乳桿菌的接種比例為每500mL的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的嗜酸乳桿菌。
禾口/ 或，(10)將分離提純后的雙歧桿菌的原菌株種子斜面接種到雙歧桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得雙歧桿菌的一級(jí)種子液；雙歧桿菌培養(yǎng)基包括20 份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水；該培養(yǎng)基的PH值應(yīng)當(dāng)在6. 2 6. 4的范圍內(nèi)才能進(jìn)行接種，從而保證菌株能夠具有較大的活性，并且保證菌株存活狀態(tài)不會(huì)遭到破壞。需要說(shuō)明的是，雙歧桿菌的接種比例為每 500mL的雙歧桿菌培養(yǎng)基中接種IOOmL的雙歧桿菌。步驟B 將相等重量的每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液進(jìn)行混合，從而獲得多菌種混合一級(jí)種子液；具體地，在實(shí)際應(yīng)用中，最好從步驟A所述的10種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液中均選取出相同重量一級(jí)種子液，然后進(jìn)行混合，從而使最終制得的草魚飼料添加劑兼具有這10種益生菌。步驟C 將多菌種混合一級(jí)種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)， 從而獲得多菌種混合二級(jí)種子液；其中，相應(yīng)的種子罐培養(yǎng)基包括3 % 8 %的紅糖、0. 2 % 0. 5 %的磷酸二氫鉀、 0. 3% 0. 5%的酵母膏、0. 3% 0. 5%的蛋白胨和余量的水，此處描述的種子罐培養(yǎng)基的各組分含量均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)；具體地，在實(shí)際生產(chǎn)使用中，為了綜合制作成本和使用性能等多方面因素，該種子罐培養(yǎng)基的各成分占總的質(zhì)量比可選用如下表1中的方案，其中該表中的實(shí)施例一為最優(yōu)選方案表1:
權(quán)利要求
1.一種含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，其特征在于，包括步驟A 選取相等菌株數(shù)量的多種草魚用活性益生菌的原菌株，并分別對(duì)每種草魚用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液；其中，所述的多種草魚用活性益生菌包括枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、啤酒酵母、產(chǎn)朊假絲酵母、黑曲霉、米根霉、干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌中的至少兩種；步驟B 將相等重量的每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液進(jìn)行混合，從而獲得多菌種混合一級(jí)種子液；步驟C 將多菌種混合一級(jí)種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)，從而獲得多菌種混合二級(jí)種子液；步驟D 將多菌種混合二級(jí)種子液接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵，從而獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液；其中，所述的中藥液體培養(yǎng)基包括5 % 8 %的紅糖、2 % 3 %的中藥組分、0. 2 % 0. 3%的磷酸二氫鉀、0. 3% 0. 5%的酵母膏和余量的水；所述的中藥組分由黃芩、黃柏、 當(dāng)歸、大黃、大清葉、甘草、紅景天和葛根組成，其各成分占中藥組分總量的重量份數(shù)為 黃芩60 80份，黃柏60 80份，當(dāng)歸40 60份，大黃60 80份， 大清葉60 80份，甘草30 50份，紅景天80 100份，葛根40 60份。 步驟E 按照重量份數(shù)計(jì)，將80 100份的多菌種混合中藥發(fā)酵液、10 20份的淀粉和20 40份的糊精進(jìn)行混合，并攪拌均勻；步驟F 將步驟E攪拌均勻的混合物放入高速離心噴霧干燥塔進(jìn)行干燥，從而制得含中藥活性益生菌的噴霧干燥粉；步驟G 按照重量份數(shù)計(jì)，在50 70份的所述噴霧干燥粉中混入30 50份的無(wú)水葡萄糖，從而制得含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的選取相等菌株數(shù)量的多種草魚用活性益生菌的原菌株，并分別對(duì)每種草魚用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)，從而獲得每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液包括將分離提純后的枯草芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得枯草芽孢桿菌的一級(jí)種子液；枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水； 和/或，將分離提純后的納豆芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得納豆芽孢桿菌的一級(jí)種子液；納豆芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水； 和/或，將分離提純后的地衣芽孢桿菌的原菌株種子斜面接種到地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)M小時(shí)，從而獲得地衣芽孢桿菌的一級(jí)種子液；地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基包括3份的牛肉膏、10份的蛋白胨、5份的氯化鈉、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的啤酒酵母的原菌株種子斜面接種到啤酒酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得啤酒酵母的一級(jí)種子液；啤酒酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的產(chǎn)朊假絲酵母的原菌株種子斜面接種到產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得產(chǎn)朊假絲酵母的一級(jí)種子液；產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的黑曲霉的原菌株種子斜面接種到黑曲霉培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得黑曲霉的一級(jí)種子液；黑曲霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的米根霉的原菌株種子斜面接種到米根霉培養(yǎng)基的三角瓶中，并振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得米根霉的一級(jí)種子液；米根霉培養(yǎng)基包括200份的土豆、20份的蔗糖、3份的磷酸二氫鉀、1. 5份的硫酸鎂、20份的瓊脂和1000份的水；和/或，將分離提純后的干酪乳桿菌的原菌株種子斜面接種到干酪乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得干酪乳桿菌的一級(jí)種子液；干酪乳桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水；和/或，將分離提純后的嗜酸乳桿菌的原菌株種子斜面接種到嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得嗜酸乳桿菌的一級(jí)種子液；嗜酸乳桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水；和/或，將分離提純后的雙歧桿菌的原菌株種子斜面接種到雙歧桿菌培養(yǎng)基的克氏瓶中，并在37°C下培養(yǎng)48小時(shí)，從而獲得雙歧桿菌的一級(jí)種子液；雙歧桿菌培養(yǎng)基包括20份的葡萄糖、10份的蛋白胨、10份的牛肉膏、5份的酵母膏、5份的檸檬酸鈉、2份的磷酸二氫鈉、5份的乙酸鈉、0. 2份的七水硫酸鎂、0. 25份的四水硫酸錳、1份的吐溫80和1000份的水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的將多菌種混合一級(jí)種子液接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)，從而獲得多菌種混合二級(jí)種子液包括以下步驟步驟Cl 制備種子罐培養(yǎng)基；其中，所述的種子罐培養(yǎng)基包括3 % 8 %的紅糖、0. 2 % 0. 5 %的磷酸二氫鉀、% 0. 5%的酵母膏、0. 3% 0. 5%的蛋白胨和余量的水；步驟C2 在115°C 121°C下對(duì)種子罐培養(yǎng)基滅菌25分鐘，再冷卻至30°C ；步驟C3 將多菌種混合一級(jí)種子液按照3% 5%的接種比例接種到種子罐培養(yǎng)基中；步驟C4 對(duì)接種完的種子罐培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵裝置的轉(zhuǎn)速為180r/min，發(fā)酵溫度為32°C，直至種子罐培養(yǎng)基中的PH值達(dá)到4. 8時(shí)發(fā)酵完成，即獲得多菌種混合二級(jí)種子液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的將多菌種混合二級(jí)種子液接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵，從而獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液包括以下步驟步驟Dl 制備中藥液體培養(yǎng)基；步驟D2 在115°C 121°C下對(duì)中藥液體培養(yǎng)基滅菌20分鐘，再冷卻至30°C ； 步驟D3 將多菌種混合二級(jí)種子液按照5% 10%的接種比例接種到中藥液體培養(yǎng)基中；步驟D4 對(duì)接種完的中藥液體培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵裝置的轉(zhuǎn)速為180r/min，發(fā)酵溫度為32°C，直至中藥液體培養(yǎng)基中的PH值達(dá)到5. 0時(shí)發(fā)酵完成，即獲得多菌種混合中藥發(fā)酵液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，其特征在于，所述的將步驟E攪拌均勻的混合物放入高速離心噴霧干燥塔進(jìn)行干燥，從而制得含中藥活性益生菌的噴霧干燥粉包括高速離心噴霧干燥塔的進(jìn)風(fēng)口溫度在100°C 115°C之間，其出風(fēng)口溫度在670C 72°C之間，其離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為每分鐘12000轉(zhuǎn)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含中藥活性益生菌的草魚飼料添加劑的制造方法，包括分別對(duì)草魚用活性益生菌的原菌株進(jìn)行單菌種菌株數(shù)量擴(kuò)充培養(yǎng)；將相等重量的每種草魚用活性益生菌的一級(jí)種子液進(jìn)行混合，并接種到種子罐培養(yǎng)基中進(jìn)行多菌種混合培養(yǎng)，然后接種到中藥液體培養(yǎng)基中進(jìn)行首次中藥發(fā)酵；將多菌種混合中藥發(fā)酵液與等體積的玉米芯粉混合制成固態(tài)發(fā)酵種子，再接種到中藥固體培養(yǎng)基中進(jìn)行二次中藥發(fā)酵。本發(fā)明實(shí)施例的實(shí)施能夠大幅提高草魚飼料添加劑中活性益生菌的菌株活性和在腸道中的定植性能，并且使制得的草魚飼料添加劑富含中藥成分，還能使中藥成分中起到藥理作用的活性成分充分發(fā)揮，從而提高草魚飼料添加劑的強(qiáng)體治病性能和促生長(zhǎng)性能，有效治療和預(yù)防“草魚四病”，進(jìn)而完全取代抗生素的使用。
文檔編號(hào)A23K1/18GK102366025SQ20111027686
公開日2012年3月7日 申請(qǐng)日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者李羽, 汪松林 申請(qǐng)人:汪松林